刺絡瀉血對高脂血癥模型大鼠血脂、NO及ET-1影響的研究

戰(zhàn)慧敏 趙慧玲 譚 麗 陳子晨 張 博 曾 蕊 魏丹蕾

(北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院,北京,100029)

刺絡瀉血對高脂血癥模型大鼠血脂、NO及ET-1影響的研究

戰(zhàn)慧敏 趙慧玲 譚 麗 陳子晨 張 博 曾 蕊 魏丹蕾

(北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院,北京,100029)

目的:觀察刺絡瀉血療法對高脂血癥大鼠一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)及血脂的影響,探討刺絡瀉血療法對高脂血癥模型大鼠調(diào)脂的作用及機制。方法:將32只雄性SD大鼠隨機分為4組,每組8只即空白對照組、模型組、刺血觀察組、藥物觀察組,除空白對照組外,其他組大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)建立高脂血癥模型。造模成功后空白對照組不進行任何干預;模型組只進行抓取及按壓;刺血觀察組在大鼠后肢淺靜脈進行刺血干預,0.3～0.5 mL/次,2次/周,治療4周;藥物觀察組給予辛伐他丁2 mg/(kg·d)灌胃干預,治療4周。觀察大鼠的血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)水平。結(jié)果:與空白組比較,模型組大鼠血清TC、TG、HDL-C、ET-1含量均顯著上升,NO含量顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較,刺血組及藥物組大鼠血清TC、TG、HDL-C、ET-1含量均降低,NO含量均上升,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);各組大鼠血清HDL-C含量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但模型組較空白組有下降趨勢,刺血組及藥物組較模型組均有上升趨勢。結(jié)論:刺絡瀉血療法可以糾正脂質(zhì)代謝異常,并通過抑制ET-1含量的增加而維持血管內(nèi)皮細胞平衡,從而減輕和延緩內(nèi)皮細胞損傷。

刺絡瀉血;高脂血癥;血脂;一氧化氮;內(nèi)皮素-1;大鼠

高脂血癥(Hyperlipidemia,HLP)是腦卒中、冠心病、心肌梗死和動脈粥樣硬化等心腦血管疾病的主要危險因素之一[1]。世界衛(wèi)生組織的報告也指出,膽固醇水平的升高是全球五大主要致死原因之一[2],我國在2002年60歲以上人群的患病率分已經(jīng)達到23.4%[3],HLP的發(fā)病率也會隨著老年人口的增長而不斷升高。因此對HLP的防治研究已成為目前醫(yī)學界一項重要的研究課題,積極尋求安全、有效的調(diào)脂方法具有重要的臨床意義。刺血療法是一種使用安全、操作簡便且不良反應小的傳統(tǒng)中醫(yī)療法,有研究表明刺血療法能降低血液黏滯度,刺激血管引起血管平滑肌細胞復雜的信號傳導變化,產(chǎn)生細胞內(nèi)、細胞間及血管中部和整體的調(diào)節(jié)反應[4]。我們在本實驗采用高脂飼料喂養(yǎng)建立HLP模型大鼠,觀察刺血對大鼠的血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)的影響。探討刺血療法治療HLP的相關機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 清潔級雄性SD大鼠32只,體重(200±20)g,由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供,許可證號:SCXK(京)2012—0001。飼養(yǎng)于室溫22 ℃,相對濕度45%清潔條件下,自由進食及飲水,適應性飼養(yǎng)1周。

1.1.2 試劑與儀器 高脂飼料(82.5%基礎飼料,10%豬油,5%蛋黃粉,2%膽固醇,0.5%膽酸鈉)由科奧協(xié)力有限公司生產(chǎn);10%水合氯醛(北京中醫(yī)藥大學生理教研室配制);辛伐他汀(杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn),批號:20130068);小號三棱針(華佗牌);一次性注射針頭(上海金塔醫(yī)用器材有限公司);TC、TG、HDL-C、LDL-C、NO、ET-1試劑盒(北京環(huán)宇金科生物醫(yī)學技術有限公司);離心機(eppendorf公司高速冷凍離心機5810R)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 動物適應性飼養(yǎng)1周后,采用完全隨機設計法,利用隨機數(shù)字表將32只SD大鼠隨機分為4組,每組8只,即A空白組、B模型組、C刺血組、D藥物組?？瞻捉M喂以普通飼料,其余3組采用喂養(yǎng)特制高脂飼料法誘發(fā)大鼠HLP模型,依據(jù)每周測定的大鼠體重設定1周飼料劑量,均分為每日量飼養(yǎng),每日的飼養(yǎng)量為70 g/kg,至8周末。

1.2.2 干預方法 第5周起開始干預治療,空白組、模型組不給于任何治療,只抓取按壓;刺血組取雙側(cè)足三里、豐隆穴(參考實驗針灸學[5])刺血,總計出血量0.5 mL,2次/周;藥物組給予辛伐他汀2 mg/(kg·d)灌胃治療。

1.2.3 指標檢測與方法 第8周末,全部大鼠禁食、禁水12 h,10%水合氯醛腹腔注射麻醉,腹主動脈取血5 mL,靜置1 h后,4 ℃,3 000 r/min離心15 min,取分離的上層血清,送檢血脂4項(TC、TG、HDL-C、LDL-C);采用ELISA法測定一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)含量,嚴格按照試劑盒說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血脂4項指標比較 與空白組比較,模型組大鼠血清TC、TG、LDL-C含量顯著上升,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較,刺血組及藥物組大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01);與空白組比較,模型組大鼠血清HDL-C含量有下降趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與模型組比較,刺血組及藥物組大鼠血清HDL-C含量均有上升趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本實驗的造模方法可能對HDL-C作用不明顯。見表1。

2.2 各組大鼠血清NO、ET-1比較 與空白組比較,模型組大鼠血清NO含量顯著降低,ET-1含量顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較,刺血組及藥物組大鼠血清NO含量均上升,ET-1含量均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01)。見表2。

表1 各組大鼠血清血脂4項含量比較

注:與正常對照組比較,*P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01。

圖1 各組大鼠血清血脂4項含量比較

表2 各組大鼠血清NO、ET-1含量比較

注:與正常對照組比較,*P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01。

圖2 各組大鼠血清NO含量比較

圖3 各組大鼠血清ET-1含量比較

3 結(jié)論

HLP,即脂質(zhì)代謝紊亂,是指由于脂肪代謝或運轉(zhuǎn)異常使血漿中一種或幾種脂質(zhì)高于正常水平的病癥。可直接引起一些嚴重危害人體健康的疾病,同時也是老齡化社會中危害老年人身心健康的嚴重全身性代謝性紊亂疾病。

中國古代醫(yī)籍中并沒有“高脂血癥”這一病名記載。HLP是一個現(xiàn)代醫(yī)學概念,根據(jù)HLP的臨床表現(xiàn),其應當歸屬于“脂”“膏”范疇,病因責之于“痰濁”“瘀血”,肝失疏泄,脾失健運,痰濕偏盛,是該病的基本病機[6],因此與肝、脾、腎功能失調(diào)關系密切?！端貑枴ぱ獨庑沃尽吩?“凡治病必先去其血,乃去其所苦,伺之所欲,然后瀉有余,補不足?！贝萄委烪LP是在總結(jié)前人運用針灸治療HLP的經(jīng)驗基礎上產(chǎn)生的,且現(xiàn)代研究表明刺血療法治療HLP有顯著療效[7]。本實驗基于臨床經(jīng)驗及文獻分析,選取足三里及豐隆穴為治療HLP的主要穴位。足三里穴是足陽明胃經(jīng)合穴,是“四總穴”之一?！肚Ы鹨健酚涊d:“胸中瘀血稽滿,脅膈痛不能久立,膝痞寒,三里主之。”同時足三里為下合穴,可以調(diào)六腑功能,有調(diào)理中焦、疏通經(jīng)絡、扶正祛邪的功效。足三里穴對消化系統(tǒng)有明顯的調(diào)整作用,“肚腹三里留”說明足三里可以調(diào)理胃腸及消化功能;可以糾正血脂代謝異?！，F(xiàn)代研究表明足三里穴能夠提升HDL-C水平[8]。豐隆穴為胃經(jīng)的絡穴,可以治療脾胃二經(jīng)疾患,在《針灸集成》中指出:“針灸法渚痰飲病取豐隆”。因此豐隆穴具有通調(diào)脾胃,健脾化痰的作用。且是目前臨床及實驗研究治療HLP使用頻次最高的穴位[9]。HLP治療當以化痰,祛瘀為主[10],因此本實驗選取足三里和豐隆穴進行刺血的治療。

目前已有大量研究證實,TC的升高與冠心病(CHD)及動脈粥樣硬化(AS)的發(fā)生具有很強的相關性[11]。TC在血液中的含量每增加1%,CHD的危險就會增加2%～3%[12]。TG升高可使LDL-C的升高和HDL-C的降低,而導致AS的發(fā)生,同時還有不少研究表明,HDL-C升高與CHD發(fā)生率呈負相關,而LDL-C升高則與CHD的發(fā)生率呈正相關[13]。因此降低TC、TG、LDL-C含量,升高HDL-C是治療HLP的關鍵,也是防止AS及心腦血管疾病發(fā)生的有效途徑。

本實驗結(jié)果顯示,刺絡瀉血療法可有效降低HLP大鼠血清中TC、TG、LDL-C含量及升高HDL-C含量。運用足三里穴的調(diào)理胃腸消化功能及豐隆穴的通調(diào)脾胃，健脾化痰的作用,于此二穴刺血,充分發(fā)揮了經(jīng)絡的調(diào)節(jié)作用。通過疏通經(jīng)絡,調(diào)節(jié)機體臟腑功能,進一步促進體內(nèi)脂質(zhì)代謝,下調(diào)血清中TC、TG、LDL-C含量,上調(diào)HDL-C含量;同時刺絡瀉血療法能夠發(fā)揮“祛瘀生新”的功用,將體內(nèi)代謝異常的脂質(zhì)隨瀉出的血液自然排出體外,并抑制體內(nèi)脂質(zhì)過分合成,以此來降低血液黏稠度,起到對血液成分良性調(diào)節(jié)的作用,從而糾正血液中脂質(zhì)代謝的紊亂。且刺血組與辛伐他丁藥物治療組比較無明顯差異,更好的說明刺絡瀉血療法治療HLP的有效性及實用性。

NO、ET-1是一種活性物質(zhì),由血管內(nèi)皮分泌釋放。能夠調(diào)節(jié)小血管的舒張和收縮、抑制血小板聚集、炎性反應細胞浸潤及炎性反應因子的過度表達[14]。NO為血管舒張因子,ET-1為縮血管物質(zhì),它們相互拮抗但又共同保持血管功能。HLP會抑制內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOs)的表達并使之失活,NO合成與釋放減少,同時ET-1的含量會明顯增加,導致血管內(nèi)皮細胞功能受損[15-17]。

本實驗結(jié)果顯示,刺絡瀉血療法能夠提高一氧化氮合酶的活性,促進NO的合成與釋放,并將高脂狀態(tài)下血管內(nèi)皮中異常增多的ET-1隨瀉出的血也排出,從而有效調(diào)節(jié)血管的舒張和收縮,維持血管張力,抑制血小板的聚集,減輕和延緩血管內(nèi)皮細胞受損,降低由HLP所引發(fā)的AS及心腦血管疾病的發(fā)生率。尤其刺血觀察組與辛伐他丁觀察組并無差異,說明刺絡瀉血療法在保護血管內(nèi)皮細胞方面與辛伐他丁效果相當。

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(2016-11-07收稿 責任編輯：王明)

Effect of Blood-letting Puncture on Blood Lipid, NO and ET-1 in Rats with Hyperlipidemia

Zhan Huimin, Zhao Huiling, Tan Li, Chen Zichen, Zhang Bo, Zeng Rui, Wei Danlei

(SchoolofAcupuncture-MoxibustionandTuinaofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective:To observe the effect of blood-letting puncture therapy on NO, ET-1 and blood lipid in rats with hyperlipidemia, and explore its therapeutic effect and mechanism in treating hyperlipidemia. Methods:A total of 32 male SD rats were randomly divided into 4 groups, which are control group, model group, blood pricking group and medical group. Except for the control group, the other three groups were made into hyperlipidemia models by high fat diet. After modeling, rats in control group

no treatment. The model group was fixed to receive blood-letting puncture therapy on the superficial vein of the rats hind leg, 0.3-0.5 mL each time, 2 times a week.To observe the levels of TC, TG, HDL-C, LDL-C, NO and ET-1. Results:Comparing to the control group, the level of TC, TG, LDL-C, ET-1 of the model groups significantly increased, and the level of NO content in the model groups significantly decreased with significant difference (P<0.01). Comparing to the control groups, the levels of TC, TG, LDL-C, ET-1 content in the other groups decrease, and the levels of NO content in the blood-letting group and medicine group increased, and the difference is significant (P<0.05，P<0.01). The content of HDL-C in each group do not have significant difference (P>0.05), however, compared to control group, the model group shows a tendency of decrease, while blood-letting group and medicine group has a tendency of increase. Conclusion:Blood-letting puncture therapy can correct lipid metabolism abnormalities. Besides, by inhibiting the increase of ET-1 content and maintain vascular endothelial cell balance, it can reduce and delay endothelial cell injury.

Blood pricking therapy; Hyperlipidemia; NO; ET-1; Rats

戰(zhàn)慧敏(1990.07—),女,碩士,北京中醫(yī)藥大學,研究方向:刺血療法作用機制的實驗與臨床研究,E-mail:zhanzhanhm2008@163.com

趙慧玲(1957.07—),女,碩士,主任醫(yī)師,教授,北京中醫(yī)藥大學,研究方向:刺血療法作用機制的實驗與臨床研究,E-mail:zhaohuiling3895@sohu.com

R245.31

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.05.037