杜仲炭抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

鄭斌 楊瑞 解燕

摘要[目的]研究杜仲炭的抗炎鎮(zhèn)痛作用。[方法]對杜仲炭進(jìn)行水煎醇的提取方法處理，分別采用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳殼致炎腫脹法和熱板致痛法對其進(jìn)行小鼠體內(nèi)的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究。試驗以生理鹽水作為空白對照，地塞米松磷酸鈉作為對照組，杜仲炭的提取物作為試驗組，測定耳廓腫脹率來觀察杜仲炭提取物的抗炎作用；以生理鹽水作為空白對照，阿司匹林作為對照組，杜仲炭的提取物作為試驗組，測定小白鼠的舔足次數(shù)或時間以觀察杜仲炭的鎮(zhèn)痛作用。[結(jié)果]杜仲炭提取物具有抗炎鎮(zhèn)痛作用的功效，且與濃度相關(guān)。隨著提取物濃度提高，抗炎作用逐漸增強，但鎮(zhèn)痛作用則呈現(xiàn)先增強后下降的趨勢。通過對提取物進(jìn)行紫外鑒定分析，發(fā)現(xiàn)其中含有綠原酸有效成分。[結(jié)論]杜仲炭具有抗炎鎮(zhèn)痛作用，可以為其應(yīng)用提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞杜仲炭；抗炎；鎮(zhèn)痛；杜仲炭提取物

中圖分類號S567.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2017）16-0126-02

Study on Antiinflammatory and Analgesic Effects of Charred Cortex Eucommiae

ZHENG Bin，YANG Rui，XIE Yan

（School of Chemistry and Chemical Engineering， Hefei Normal University，Hefei，Anhui 230016）

Abstract[Objective]The research aimed to study the antiinflammatory and analgesic effects of charred cortex eucommiae. [Method]The extracts of charred cortex eucommiae were obtained through water extractionalcohol precipitation method and its effect on antiinflammatory and analgesic action were observed by xylene induced auricular inflammatory swelling of mice and hot plate pain， respectively. Physiological saline was adopted as the blank control， dexamethasone sodium phosphate as the control group， the extract of charred cortex eucommiae as the experimental group to obtain the auricle swelling rate and swelling inhibition rate. Physiological saline was adopted as the blank control， aspirin as the control group， the extract of charred cortex eucommiae as the experimental group to count the number of mice licking foot or time. [Result]The extract of charred cortex eucommiae had antiinflammatory and analgesic effects，and which were associated with the concentration of extracts.With the increase of the concentration of extract， the antiinflammatory effect gradually increased，but the analgesic effect showed an increasing first and then decreasing trend.Through UV qualification， the effective content was found to be chlorogenic acid.[Conclusion]Charred cortex eucommiae has antiinflammatory and analgesic effects and the study provides the theoretical basis for the application of charred cortex eucommiae.

Key wordsCharred cortex eucommiae；Antiinflammatory；Analgesic rates；Extracts of charred cortex eucommiae

基金項目留學(xué)人員科技活動擇優(yōu)資助項目（2015LXKJZZ001）；國家自然科學(xué)基金青年項目（21504021）；安徽省級質(zhì)量工程項目教學(xué)研究重點項目（2015jyxm277） 。

作者簡介鄭斌（1986—），女，山東煙臺人，副教授，博士，從事生物傳感器制備與應(yīng)用研究。

收稿日期2017-04-12

杜仲是我國獨特具有的樹種，作為我國的名貴藥材已有上千年的歷史。趙玉英等[1]研究杜仲皮和杜仲葉發(fā)現(xiàn)，其主要藥理成分有綠原酸、桃葉珊瑚苷、松脂醇二葡萄苷等。由于活性成分的存在使得杜仲具有調(diào)節(jié)血壓、血脂、抗菌、消炎、止血、抗氧化、抗病毒、抑制腫瘤細(xì)胞生長等藥理作用，并具有延緩衰老、美白養(yǎng)顏、強筋壯骨、調(diào)理沖任、固經(jīng)安胎、滋陰補腎等功效[2]，這些功效的發(fā)揮與其炮制方法密切相關(guān)。通過動物試驗表明，降壓作用中鹽制杜仲比生杜仲好近1倍，而杜仲炭和砂燙杜仲在降壓和對子宮抑制作用上基本相同[3]。杜仲制劑對蛋清性腳腫有明顯的抑制作用，同時嗜酸性細(xì)胞明顯降低，說明杜仲有增強腎上腺皮質(zhì)的功能；在鎮(zhèn)靜方面，杜仲注射后對小鼠有安靜嗜睡現(xiàn)象[3]。杜仲藥理作用相比于化學(xué)藥而言，其副作用較少，有明顯的優(yōu)勢?，F(xiàn)代研究表明，杜仲皮有增強機體的免疫功能，對細(xì)胞免疫有雙向調(diào)節(jié)作用，可促進(jìn)人體皮膚、骨骼、肌肉中蛋白質(zhì)膠原的合成和分解，其具有促進(jìn)代謝、防止衰老等功效。可見，杜仲在臨床上的醫(yī)療作用有著不可替代的地位。中藥類的杜仲提取物對疼痛癥狀有顯著藥效，同時恢復(fù)較快，副作用較小，并且不易成癮，安全性比目前的安定類藥物大大提高[4]。

杜仲有種類繁多的化學(xué)成分和廣泛的藥理作用，應(yīng)用前景極為廣闊，在醫(yī)藥領(lǐng)域有巨大潛力。為研究杜仲炭其他功效，開拓其應(yīng)用范圍，筆者擬針對杜仲的抗炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行藥理學(xué)驗證研究，以期達(dá)到合理利用、拓展其應(yīng)用領(lǐng)域的目的。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1儀器設(shè)備。

電子調(diào)溫電爐220V.AC/1000W，金壇市金城國勝實驗儀器廠；

HK-04B搖擺式藥材粉碎機，廣州華凱機電設(shè)備有限公司；

JYT-2托盤天平，上海馬頭牌天平秤；

SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；

80-2型電動離心機，江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠；

UV-1800PC，上海美譜達(dá)儀器有限公司；

HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇市杰瑞爾電器有限公司；

EX125DZH電子天平，奧豪斯儀器（常州）有限公司。

1 000 mL燒杯、冷凝裝置（圓底燒瓶、冷凝管、牛角管、溫度計）、25 mL試劑瓶、40 mL錐形瓶、布氏漏斗、抽濾瓶。

1.1.2試驗用品。

醫(yī)用紗布、醫(yī)用剪刀、打孔器、無水乙醇（AR）、去離子水、二甲苯、阿司匹林泡騰片、注射劑、地塞米松磷酸鈉注射液、杜仲炭（四川產(chǎn)）。

1.2試驗方法

1.2.1杜仲炭水提取物的制備。

用托盤天平秤取杜仲炭100 g，放置中藥粉碎機中粉碎。將粉碎好的粉末用紗布包好，放在1 000 mL的燒杯中用適量的水浸透煎煮3次，時間分別為2.0、1.0、0.5 h。合并3次煎煮液濃縮至100 mL，然后加入適量的無水乙醇（60 mL），使醇含量達(dá)到60%（V/V），密封冷藏24 h；而后用抽濾機抽濾取下清夜，再用離心機在4 000 r/min中離心10 min，取上清液。在79 ℃下蒸餾回收乙醇即得杜仲炭的水煎醇提取物，定容至100 mL（含主藥1 g/mL），裝瓶，消毒備用。

1.2.2

杜仲炭水提取物的鑒定。

杜仲炭的水提取物主要為各種多糖和黃酮類。采用紫外分光光度儀進(jìn)行測定，分別用標(biāo)準(zhǔn)品的綠原酸和提取物進(jìn)行對比測定。查閱相關(guān)文獻(xiàn)得知，綠原酸的紫外最大吸收峰的波長在200～360 nm，在328 nm有最大吸收峰[5]。故將紫外分光光度儀的測量波長定在200～400 nm，掃描間隔為0.2 nm，將待測液放在比色皿中進(jìn)行吸光度的測定。

1.2.3鎮(zhèn)痛試驗（熱板法）。

將1 000 mL大燒杯放置恒溫水浴鍋中，溫度調(diào)節(jié)為（ 55±0.5）℃，置小鼠于燒杯上，測定各小鼠正常的痛閾。以小鼠舔足為觀察指標(biāo)，共測2次，每次間隔大于5 min，以均值不超過30 s為合格，共篩選出25只雄性小鼠，稱其質(zhì)量標(biāo)記，分為5組：空白對照組（生理鹽水0.02 mL/g）、杜仲炭水提取物低劑量組（2 mg/g）、杜仲炭水提取物中劑量組（10 mg/g）、杜仲炭水提取物高劑量組（20 mg/g）、陽性對照組（阿司匹林片劑，0.2 mg/g）。各組腹腔注射給藥，共注射5次，末次給藥1 h后再測定痛閾，如果60 s內(nèi)無反應(yīng)按60 s記，并將小鼠取出以防燙傷。

1.2.4抗炎試驗。

取雄性小鼠25只，稱其體重，隨機分為5組，即對照組、地塞米松磷酸鈉注射液為陽性組、杜仲炭水提取物高、中、低劑量組。將二甲苯（0.02 mL/只）均勻涂在小鼠右耳的內(nèi)外兩面以致使發(fā)炎。30 min后進(jìn)行給藥，給藥方法同“1.2.3”，采用腹腔注射，在末次給藥2 h后，觀察小鼠耳廓顏色的變化。致炎3 h后將小鼠處死，剪下左右兩耳，用打孔器9 mm 分別在兩耳的同一部位打下圓形耳片，再用分析天平稱取耳片的質(zhì)量，計算各組小鼠的耳片腫脹程度。耳片腫脹程度=致炎側(cè)耳片質(zhì)量（右耳）-對照側(cè)耳片質(zhì)量（左耳），腫脹率=腫脹程度/對照側(cè)耳片質(zhì)量（左耳）×100%。

2結(jié)果與分析

2.1杜仲炭的水提取物濃度

用去離子水稀釋綠原酸標(biāo)準(zhǔn)物成0.001、0.002和0.005 g/mL的待測溶液，對照組為去離子水，在328 nm處測定，得到綠原酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=22.642x-0.203 9，r=0.999 9（n=6）。該試驗測定得到的杜仲炭水提取物中綠原酸濃度為24.493 μg/mL。

2.2提取物的鎮(zhèn)痛試驗

從表1可以看出，杜仲炭水提取物對熱刺激所致的小鼠疼痛反應(yīng)具有一定的作用。與空白對照組相比，試驗組用藥后疼痛閾值的反應(yīng)時間延長，且與試驗劑量和用藥時間有關(guān)。隨著時間延長，疼痛閾值的反應(yīng)時間呈先增大后減小的趨勢；隨劑量提高，疼痛閾值的反應(yīng)時間呈先增大后減小的趨勢。與陽性阿司匹林對照組相比，杜仲炭水提取物疼痛閾值稍低，但仍具有一定的鎮(zhèn)痛作用。

2.3提取物的抗炎試驗

由表2可知，杜仲炭水提取物對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹發(fā)炎有

良好的抑制效果。在空白對照組（生理鹽水）中，小鼠耳廓的腫脹率較高，達(dá) 25.00%，

而在陽性對照組（地塞米松磷酸鈉）中，小鼠的耳廓腫脹率僅為2.20%。在試驗組的3個濃度下，小鼠的耳廓腫脹率隨濃度升高出現(xiàn)遞減的趨勢，顯示出隨濃度增大抗炎作用

增強的趨勢，且均比空白對照組小。因此，杜仲炭水提取物在抗炎試驗上效果較好，具有一定的抑制作用。

3結(jié)論

杜仲炭的主要有效成分是黃酮類和多糖類等化合物，而多糖類化合物本身就具有抗炎抑菌、抗氧化、抗衰老、抗癌防癌等生理活性[6]，所以可依此推測出杜仲炭具有良好的抗炎鎮(zhèn)痛作用。熱刺激法是通過熱刺激足部的感覺神經(jīng)末梢致痛，類似于急性銳痛。在試驗中小白鼠給予5次給藥后，發(fā)現(xiàn)杜仲炭具有良好的鎮(zhèn)痛效果，因此杜仲炭對急性銳痛和慢性鈍痛均有良好的治療作用。在抗炎試驗中，杜仲炭水提取物對二甲苯誘導(dǎo)的耳廓腫脹有明顯的抑制作用，表明杜仲炭具有良好的抗炎作用。此次試驗只是初步地研究出了杜仲炭的抗炎鎮(zhèn)痛效應(yīng)，而對其作用機制有待深入研究。

參考文獻(xiàn)

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方海燕，夏美俊.杜仲的炮制及臨床應(yīng)用研究的進(jìn)展[J].基層中藥雜志，1997，11（3）：52-53.

[4] 李欣，樊金鈴，朱文學(xué)，等.杜仲雄花正丁醇提取物的鎮(zhèn)靜催眠作用研究[J].食品與機械，2009，25（4）：56-59.

[5] 李坤，武瑞，伊文君，等.杜仲葉中綠原酸含量測定方法的建立[J].中國獸醫(yī)雜志，2015，51（3）：61-63.

[6] 唐栩，許東暉，梅雪婷，等.26種黃酮類天然活性成分的藥理研究進(jìn)展[J].中藥材，2003，26（1）：46-54.