地稔總黃酮含量的測定

楊菁 朱丹 杜雨涵 陳華巧 于妮

摘要[目的]建立地稔中總黃酮含量的測定方法。[方法]采用紫外-可見分光光度法，以蘆丁為對照，以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH為顯色劑，檢測波長為500 nm，測定地稔中總黃酮含量。[結果]蘆丁濃度在0.01～0.07 mg/mL時與吸光度呈良好的線性關系（R2=0.999 8）；平均加樣回收率為99.34%，相對標準偏差為0.56%。[結論]該方法簡單可靠、精密度高、重現(xiàn)性好，為地稔的進一步開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

關鍵詞地稔；總黃酮；紫外-可見分光光度法

中圖分類號R284文獻標識碼

A文章編號0517-6611（2017）16-0009-02

Determination of Total Flavonoids from Melastoma dodecandrum Lour.

YANG Jing，ZHU Dan，DU Yuhan et al（Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou 550031）

Abstract[Objective] To establish a method for the total flavonoids content determination from Melastoma dodecandrum Lour.[Method] The content of total flavonoids from Melastoma dodecandrum Lour.was determined by UVvisble spectrophotometry with rutin as reference substance，sodium nitritealuminum nitrate and sodium hydroxide as chromogenic agent at the detection wavelength of 500 nm.[Result] The rutin showed a good linear relationship at the range of 0.01-0.07 mg/mL（R2=0.999 8）.The average recovery rate was 99.34%，and the relative standard deviation was 0.56%.[Conclusion] The method is simple and reliable，reasonable，specific，reproducible and provides experiment basis for the development of Melastoma dodecandrum Lour..

Key wordsMelastoma dodecandrum Lour.；Total flavonoids；UVvisble spectrophotometry

基金項目國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目（貴中醫(yī)大創(chuàng)合字〔2015〕 12號）。

作者簡介楊菁（1988—），女，貴州黔東南人，助理實驗師，碩士，從事中藥藥效物質基礎及質量標準研究。

收稿日期2017-05-12

地稔為野牡丹科植物地稔（Melastoma dodecandrum Lour.）的干燥全草，主要分布于長江以南的廣西、福建、貴州、云南等地[1]。地稔具有活血止血、清熱解毒、化濕等功效，臨床上主要用于治療高熱、咽喉腫痛、赤白血痢疾、黃疸、水腫痛經、崩漏等[2-3]。研究表明，地稔主要含黃酮類[4]、多糖類、氨基酸[5]等化學成分[6-7]，其中黃酮類化合物為主要有效成分之一，以蘆丁、槲皮素、山奈酚為主[8-9]。目前，人們對地稔的研究主要集中在化學成分、藥理作用、營養(yǎng)保健[10-11]等方面，鮮見對地稔總黃酮進行含量測定、提取工藝的研究報道。鑒于此，筆者對地稔中總黃酮含量進行了測定，以期為地稔藥材的進一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器。UV-5900紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）、J223BC型萬分之一分析天平（江蘇常州市雙杰測試儀器廠）、SYG-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇常州朗越儀器制造有限公司）、101-1AB電熱鼓風干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）、WM數(shù)控超聲波控制儀（貴州味美食品工業(yè)有限公司）。

1.1.2試劑。地稔藥材采自貴州省龍里縣羊場鎮(zhèn)羊場中學附近山頭；蘆丁對照品（貴州迪大生物科技有限責任公司，批號：GZDD-0001，>98%）；亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁（天津市恒興化學試劑制造有限公司），試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1對照品溶液的制備。稱取105 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品12.50 mg，置于25 mL容量瓶中，加60%乙醇溶解，定容，即得0.500 0 mg/mL對照品溶液。

1.2.2供試品溶液的制備。稱定地稔藥材粉末0.5 g，置于圓底燒瓶中，加入50 mL 60%乙醇溶液，稱重，在90 ℃下回流提取1 h，放冷至室溫，用60%乙醇補足減失的質量，過濾，即得供試品溶液。

1.2.3標準曲線的繪制。移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL對照品溶液于25 mL容量瓶中，依次加入6% NaNO2溶液0.6 mL、8% Al（NO3）3溶液1.0 mL和2% NaOH溶液4.0 mL，用水定容，顯色15 min，于500 nm波長處測定吸光度，以濃度（C）為橫坐標、吸光度（A）為縱坐標繪制標準曲線。

1.2.4測定波長的選擇。量取對照品溶液3 mL及供試品溶液4 mL，按照“1.2.3”方法顯色，以相應試劑為空白，在200～700 nm波長處進行掃描。

1.2.5精密度試驗。移取4.0 mL蘆丁對照品溶液于25 mL容量瓶中，按照“1.2.3”方法顯色，在500 nm波長處測定吸光度，反復測試6次，計算吸光度和相對標準偏差。

1.2.6穩(wěn)定性試驗。稱取地稔粉末0.5 g，置于圓底燒瓶中，按照“1.2.2”方法操作，移取4 mL供試品溶液于25 mL容量瓶中，按照“1.2.3”方法顯色，分別在0、2、4、6、8、24 h測定吸光度，考察其穩(wěn)定性。

1.2.7重復性試驗。稱取同一批地稔粉末0.5 g于圓底燒瓶中，共6份。按照“1.2.2”方法操作，移取供試品溶液4 mL于25 mL容量瓶中，按照“1.2.3”方法顯色，測定吸光度，計算總黃酮含量和相對標準偏差。

1.2.8加樣回收試驗。稱取同一批地稔粉末6份，各0.2 g，于圓底燒瓶中，分別加入適量蘆丁對照品，按照“1.2.2”方法操作，移取4 mL濾液于25 mL容量瓶中，按照“1.2.3”方法顯色，測定吸光度，計算回收率和相對標準偏差。

2結果與分析

2.1測定波長的選擇由圖1可知，蘆丁對照品溶液與供試品溶液均在500 nm波長處有最大吸收，且干擾較小，故確定500 nm為測定波長。

2.2標準曲線繪制由圖2可知，線性回歸方程為y=11.614x+0.026 6（R2=0.999 8），表明蘆丁對照品濃度在0.01～0.07 mg/mL時與吸光度呈良好的線性關系。

2.3精密度精密度的相對標準偏差為0.29%，表明儀器精密度良好。

2.4穩(wěn)定性吸光度的相對標準偏差為0.66%，表明該方法在24 h內穩(wěn)定性良好。

2.5重復性計算得總黃酮的平均含量為3.82%，相對標準偏差為0.91%，表明該方法重復性良好。

2.6加樣回收率由表1可知，蘆丁的平均加樣回收率為99.34%，相對標準偏差為0.56%，表明該方法準確度較高。

3結論

總黃酮的顯色方法主要有硝酸鋁顯色法和三氯化鋁顯色法，該研究對這2種顯色方法分別進行了考察，通過比較對照品溶液和供試品溶液的吸收曲線，發(fā)現(xiàn)采用硝酸鋁顯色法顯色后，所得吸收曲線有明顯的吸收峰，所以選擇硝酸鋁顯色法。

地稔中主要黃酮化合物為槲皮素和蘆丁，通過硝酸鋁顯色方法顯色后比較吸收曲線，結果表明以蘆丁為對照，所得吸收曲線與供試品溶液相似，所以選擇蘆丁作為對照品。

試驗以60%乙醇為提取溶劑，NaNO2-Al（NO3）3-NaOH為顯色劑，采用紫外-可見分光光度法測定地稔中總黃酮含量為3.82%，且精密度、重復性、穩(wěn)定性、加樣回收率試驗結果表明，該測定方法操作簡單，結果穩(wěn)定、可靠。

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