黃山回溪河養(yǎng)殖光唇魚全人工繁殖技術(shù)研究

凌俊　江河　段國慶

摘要[目的]在黃山回溪河實現(xiàn)養(yǎng)殖光唇魚全人工繁殖，以促進黃山地區(qū)光唇魚自然資源的保護及其在天然水域的人工增養(yǎng)殖。[方法]從回溪河采捕當(dāng)年自然繁殖的幼魚，進行馴化，培育至性成熟。通過養(yǎng)殖光唇魚個體繁殖力測定，定期監(jiān)測親魚性腺發(fā)育，采用外源激素催產(chǎn)、人工授精和流水孵化進行全人工繁殖。[結(jié)果]養(yǎng)殖光唇魚對絨毛膜促性腺激素（HCG）具有較高的敏感性，當(dāng)催產(chǎn)藥物配伍中HCG、促黃體素釋放激素類似物（LHRH-A3）和地歐酮（DOM）的注射劑量分別為1 500 IU/kg、5 μg/kg和5 mg/kg時，催產(chǎn)率最高，為85.0%，受精率和孵化率分別為86.1%和71.2%。[結(jié)論]養(yǎng)殖光唇魚在黃山地區(qū)完全可以實現(xiàn)全人工繁殖。

關(guān)鍵詞回溪河；養(yǎng)殖光唇魚；全人工繁殖；催產(chǎn)素配伍

中圖分類號S965文獻標(biāo)識碼

A文章編號0517-6611（2017）30-0105-03

Abstract[Objective] To achieve the fully artificial propagation of cultured Acrossocheilus fasciatus in Huixi River of Huangshan Mountain and advance the conservation and artificial breeding of A.fasciatus natural resources in Huangshan area.[Method] Juvenile fishes were collected from Huixi River，and they were then tamed and bred to become sexually mature.Artificial propagation was conducted by adopting exterior hormones，artificial insemination and incubating in running water ，based on the measurement of individual fecundity of cultured A.fasciatus and monitoring on the gonadal development of parent fishes periodically.[Result] Cultured A.fasciatus were highly sensitive to HCG.There was the highest rate（85.0%） of inducing spawning of all with 1 500 IU/kg HCG，5 μg/kg LHRHA3 and 5 mg/kg DOM in the combination of exterior hormones，while the fertilization rate and hatchability were 86.1% and 71.2% respectively.[Conclusion] The fully artificial propagation for cultured A.fasciatus was fully feasible in Huangshan Mountain area.

Key wordsHuixi River；Cultured A.fasciatus；Artificial propagation； Combination of oxytocin

光唇魚（Acrossocheilus fasciatus），隸屬鯉形目（Cypriniformes） 鯉科（Cyprinidae） 鲃亞科（Barbinae）光唇魚屬（Acrossocheilus）[1]，因其成魚常棲息于石縫間、體側(cè)具有6條明顯的黑色橫斑而被俗稱為“石斑魚”[2]，主要分布在安徽、福建和浙江等地的山區(qū)急流水域，是山區(qū)經(jīng)濟魚類的主要品種之一。在安徽省皖南山區(qū)，光唇魚主要分布于海拔較高、水流湍急、底質(zhì)粗糙的中小型河流及其支流，是該水域的常見種和優(yōu)勢種[3]。

光唇魚肉質(zhì)細(xì)嫩，DHA和EPA含量較高[4]，頗受消費者青睞，棲息地破壞、過度捕撈等造成光唇魚野生資源銳減，價格不斷上升，因此開展人工繁殖是保護光唇魚野生資源、滿足市場需求的迫切需求。目前，有關(guān)光唇魚繁殖的研究主要集中在性腺發(fā)育[5-8]、仿生態(tài)繁殖[9]、人工催產(chǎn)誘導(dǎo)自然產(chǎn)卵[10]，光唇魚屬全人工繁殖僅云南光唇魚[11]見報道。光唇魚作為黃山地區(qū)主要經(jīng)濟魚類之一，由于受山區(qū)小氣候復(fù)雜多變、卵子發(fā)育不同步等因素的影響，全人工繁殖技術(shù)一直未能突破。筆者在總結(jié)前期經(jīng)驗和同步監(jiān)測雌雄魚發(fā)育的基礎(chǔ)上，開展了養(yǎng)殖光唇魚全人工繁殖技術(shù)研究，并于2016年7月12日在該地區(qū)成功實現(xiàn)了養(yǎng)殖光唇魚全人工繁殖，旨在促進今后該地區(qū)光唇魚自然資源的保護及其在天然水域中的人工增殖和人工養(yǎng)殖。

1材料與方法

1.1試驗地概況光唇魚繁育基地位于黃山市休寧縣素有“朱升故里，新安源頭”之稱的陳霞鄉(xiāng)西南向的廻溪村，境內(nèi)山清水秀，環(huán)境優(yōu)美，回溪河橫穿其內(nèi)。該繁育基地位于回溪河上游，海拔較高，水流較為湍急，底質(zhì)為石塊結(jié)構(gòu)，非常適宜光唇魚自然種群的棲息繁衍。繁育基地依河而建，周邊無污染源，水源水質(zhì)清新，溶解氧≥5 mg/L，pH適中，繁、養(yǎng)殖池呈階梯推進式布局，均由水泥沙石鋪砌構(gòu)成， 利用地理落差自引水形成水流，進行光唇魚流水養(yǎng)殖，每個水泥池進出水、水深及排污均能獨立控制。

1.2親本來源與培育

光唇魚親魚來自2014 年7 月采捕自錢塘江源頭水系休寧縣回溪河當(dāng)年自然繁殖的幼魚，在水泥池中進行為期2年的馴化與培育。7月中下旬，當(dāng)回溪河中出現(xiàn)體長1.5～2.0 cm的光唇魚自然群體時，開始人工采集幼魚，按50尾/m2的密度帶水迅速轉(zhuǎn)入6.0 m×4.0 m×1.2 m大小的水泥培育池中，水深保持在50～60 cm，初始階段投喂蛋白含量42%、經(jīng)超微粉碎的粉狀配合飼料，與水混合后潑灑，每日3次，待幼魚主動上游攝食后，改為直接投喂粉料，后期逐漸轉(zhuǎn)換為投喂膨化飼料，粒徑大小依據(jù)魚體大小適時做出調(diào)整，投喂量根據(jù)天氣、攝食情況等酌情增減。經(jīng)過2年的精心培育，光唇魚雌雄個體均達到性成熟，體質(zhì)量為50～100 g/尾，具備開展全人工繁殖親本的條件。

1.3待催產(chǎn)雌、雄魚親本挑選

同池培育的光唇魚親本雌魚較雄魚個體要大，雌魚挑選體質(zhì)量75～100 g的個體，雌魚胸鰭較短，體側(cè)6 條黑色橫斑明顯，選擇腹部膨大且松軟、生殖孔紅潤的雌魚；雄魚挑選體質(zhì)量50～75 g的個體，雄魚胸鰭較長，體側(cè)1 條黑色縱條明顯，吻部珠星突出，且胸鰭附近局部顯紅色，輕壓腹部有少許白色精液流出，遇水會迅速散開。共挑選催產(chǎn)親魚132尾，其中雌魚120尾，雄魚12尾。

1.4催產(chǎn)藥物的選擇與配伍設(shè)計

養(yǎng)殖光唇魚全人工繁殖試驗在對以前催產(chǎn)效果進行比較的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了催產(chǎn)藥物和配伍，催產(chǎn)藥物采用絨毛膜促性腺激素（HCG）、促黃體素釋放激素類似物（LHRH-A3）和地歐酮（DOM）3種，其具體配伍設(shè)計如表1所示。根據(jù)不同催產(chǎn)藥物配伍，分為T1、T2、T3、T4、T5、T6共6個試驗組。

1.5催產(chǎn)

催產(chǎn)前，定期監(jiān)測卵巢發(fā)育情況。當(dāng)卵巢發(fā)育至Ⅳ期末，準(zhǔn)備催產(chǎn)。采用胸腔注射法，針頭沿胸鰭基部與魚體呈45°角，由于此次試驗雌魚親本發(fā)育良好，卵子發(fā)育較為同步，故采用1次注射，雌魚按0.3 mL/尾注射，雄魚無需注射，可直接擠出精液，每個配伍注射試驗魚20尾，置于1 m×1 m×1 m的密致網(wǎng)箱中，微流水刺激，同時預(yù)留1網(wǎng)箱暫養(yǎng)一定量發(fā)育良好的雄魚，以供人工授精用，催產(chǎn)溫度26 ℃。

1.6人工授精

經(jīng)過15 h的效應(yīng)時間后，開始人工授精，精子均采用腹部節(jié)律按摩法進行活體采集[12]，采用干法授精，雌雄魚比例為10∶1。

1.7孵化

將人工授精后獲得的受精卵迅速用水稀釋，均勻鋪于大小為40 cm×30 cm×6 cm、底部為密眼網(wǎng)布的“抽屜型”孵化裝備內(nèi)，平置于水深30～40 cm的微流水中孵化，孵化池上方加蓋遮陽網(wǎng)，孵化進水經(jīng)100目網(wǎng)布過濾，以防敵害生物混入。受精卵遇水后迅速膨脹，卵為沉性，淡黃色，弱黏性。水溫（26±1）℃下，經(jīng)過歷時41 h的孵化，仔魚即可出膜。

2結(jié)果與分析

2.1養(yǎng)殖光唇魚雌魚親本個體繁殖力測定

經(jīng)測定，養(yǎng)殖光唇魚雌魚親本個體體長為（17.52±0.89）cm，體質(zhì)量為（73.57±13.51）g，絕對懷卵量（1 655±442）粒，體長相對繁殖力（93±21）粒/cm，體重相對繁殖力（22±2）粒/g。

2.2不同催產(chǎn)藥物配伍對養(yǎng)殖光唇魚催產(chǎn)效果的影響

由表2可知，在水溫 （26±1）℃條件下，試驗共催產(chǎn)120尾雌魚，其中54尾催產(chǎn)成功，共獲得卵粒60 131粒，受精卵50 435粒，孵出仔魚數(shù)35 466尾。各試驗組催產(chǎn)率在35.0%～85.0%，其中T2試驗組催產(chǎn)成功率最高，達85.0%；各試驗組受精率變化不大，為80.5%～86.1%，其中T2試驗組受精率最高，為86.1%；各試驗組受精卵孵化率在68.3%～72.5%，其中T1試驗組受精率最高，為72.5%。

3討論

3.1黃山回溪河養(yǎng)殖光唇魚個體繁殖力

雌魚個體繁殖力的測定結(jié)果表明，黃山回溪河養(yǎng)殖光唇魚個體絕對懷卵量896～2 975粒，平均1 655粒，遠(yuǎn)低于王宇希等[13]測定的結(jié)果（458～1 4254 粒），亦低于北江側(cè)條光唇魚（578～12 621粒）[14]；體長、體重相對繁殖力分別為61～156粒/cm和19～29粒/g，遠(yuǎn)低于王宇希等[13]測定的結(jié)果，也低于北江側(cè)條光唇魚[14]。究其原因，可能與光唇魚屬種類繁雜有關(guān)，除虹彩光唇魚、厚唇光唇魚、長鰭光唇魚、半刺光唇魚、溫州光唇魚、云南光唇魚等，尚有部分地理種群，不同種類的光唇魚在個體繁殖力上差異較大。此外，樣本采樣的容量、規(guī)格、養(yǎng)殖環(huán)境、親本培育情況等都與光唇魚個體繁殖力息息相關(guān)。

3.2養(yǎng)殖光唇魚產(chǎn)卵時間與產(chǎn)卵類型研究表明，微流水養(yǎng)殖的光唇魚卵巢可以自然發(fā)育至Ⅳ期和Ⅴ期，少部分個體在養(yǎng)殖池中可以自然產(chǎn)卵，但這種產(chǎn)卵受不確定因素的影響較多，如山區(qū)小氣候、卵巢發(fā)育不同步、養(yǎng)殖密度、水溫等，絕大部分個體卵巢發(fā)育至Ⅴ期后，卵未能及時排出，導(dǎo)致卵子過熟，重新進入下一個發(fā)育周期，產(chǎn)卵時間與產(chǎn)卵量均無法掌控。通過多年觀察發(fā)現(xiàn)，由于有效積溫不同，回溪河上、中、下游光唇魚自然種群產(chǎn)卵時間不一，通過研析歷年繁育基地所處地段外河光唇魚繁殖期，初步判定該段養(yǎng)殖光唇魚產(chǎn)卵時間始于每年的7月初，因此從6月底開始，每日對親本的活動進行細(xì)心觀察，并檢查親魚的發(fā)育情況，從親本培育池隨機捕撈親魚解剖觀察卵巢發(fā)育，進而準(zhǔn)確把握了養(yǎng)殖光唇魚的催產(chǎn)時間，這也可能是該區(qū)域光唇魚全人工繁殖一直未能突破的癥結(jié)所在。同時，在催產(chǎn)成功的親魚卵巢中，尚有一定比例Ⅱ、Ⅲ時相的卵母細(xì)胞，結(jié)合繁殖實踐中2個產(chǎn)卵高峰的出現(xiàn)，據(jù)此推斷養(yǎng)殖光唇魚為分批產(chǎn)卵類型，這與甌江光唇魚[15]的研究結(jié)果相一致。

3.3養(yǎng)殖光唇魚對催產(chǎn)藥物的敏感性

目前，魚類催產(chǎn)藥物主要有鯉魚腦垂體（PG）、絨毛膜促性腺激素（HCG）、促黃體素釋放激素類似物（LHRH-A3）和地歐酮（DOM）。該試驗中采用HCG、LHRH-A3和DOM復(fù)合配伍的催產(chǎn)組合，保持DOM劑量不變，主要探索外源性促性腺激素HCG和LHRH-A3對養(yǎng)殖光唇魚催產(chǎn)效果的影響。在多個藥物配伍中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)配伍中的HCG劑量從1 000 IU/kg 提高至1 500 IU/kg 時，即HCG、LHRH-A3和DOM注射劑量分別為1 500 IU/kg、5 μg/kg和5 mg/kg的T2組合在所有催產(chǎn)組合中獲得最高的催產(chǎn)率，其余5組催產(chǎn)率均較低，初步分析認(rèn)為養(yǎng)殖光唇魚對HCG有著較高的敏感性，可能是由于HCG的作用機理為直接作用于己經(jīng)生長成熟的卵母細(xì)胞外周的濾泡細(xì)胞，誘導(dǎo)濾泡細(xì)胞分泌孕酮，促使卵核破裂，進而誘導(dǎo)性腺成熟或排卵，而當(dāng)HCG劑量從1 500 IU/kg 再提高至2 000 IU/kg 時，催產(chǎn)率卻又明顯降低，可能為催產(chǎn)劑量過大所致。與HCG相比，通過誘導(dǎo)垂體分泌促性腺激素的LHRH-A3敏感性就要差許多，這與陳禮強等[11]有關(guān)云南光唇魚人工繁殖的結(jié)果相一致。

4結(jié)論

養(yǎng)殖光唇魚在人工繁殖過程中，當(dāng)催產(chǎn)藥物配伍中HCG為1 500 IU/kg、LHRH-A3為5 μg/kg、DOM為 5 mg/kg時，催產(chǎn)率最高，達到85.0%，且受精率和孵化率分別達到86.1%和71.2%。因此，人工養(yǎng)殖光唇魚可完全實現(xiàn)全人工繁殖。

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