活性氧與植物抗氧化系統(tǒng)研究進(jìn)展

白英俊　李國(guó)瑞　黃鳳蘭

摘要活性氧（ROS）是在植物體內(nèi)產(chǎn)生的氧化能力很強(qiáng)的氧。植物體內(nèi)存在著抗氧化系統(tǒng)，對(duì)調(diào)控活性氧的平衡起了關(guān)鍵作用。系統(tǒng)概述了植物活性氧的種類、產(chǎn)生、檢測(cè)、傷害及植物抗氧化系統(tǒng)的清除機(jī)制等方面的研究進(jìn)展，為今后利用生物工程技術(shù)合成同工酶，提高植物對(duì)不良環(huán)境的抗性奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞活性氧；抗氧化系統(tǒng)；抗逆性

中圖分類號(hào)S-3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A文章編號(hào)0517-6611（2017）36-0001-03

AbstractReactive oxygen species （ROS） is a highly oxidizing oxygen produced in plants.Plant antioxidant system played a key role to balance the regulation of active oxygen.The research of active oxygen of species，generation，detection，injury and scavenging mechanism of plant antioxidant system were introduced，which could be used to synthesize isoenzymes and improve plant resistance to adverse environment.

Key wordsReactive oxygen species；Antioxidant system；Plant resistance

活性氧（ROS）簡(jiǎn)單的來(lái)說(shuō)就是氧化能力很強(qiáng)的氧。是由O2 獲得電子轉(zhuǎn)化而來(lái)的一類分子或離子及自由基。一般分為超氧陰離子（O-2）、羥自由基（OH-1）、過(guò)氧化氫（H2O2）、單線態(tài)氧（O2）。植物在進(jìn)行有氧代謝時(shí)必定會(huì)產(chǎn)生活性氧。低濃度的活性氧（ROS）可作為一個(gè)重要的信號(hào)分子來(lái)參與調(diào)控植物的生理反應(yīng)及非生物脅迫反應(yīng)[1]，而高濃度的活性氧（ROS）會(huì)阻礙植物生長(zhǎng)甚至導(dǎo)致死亡。植物為了保持自身的正常的生理代謝，會(huì)通過(guò)酶促和非酶促即表現(xiàn)為抗氧化酶系統(tǒng)和抗氧化劑對(duì)活性氧的清除作用來(lái)維持植物的正常生理活動(dòng)。筆者綜述了活性氧與植物抗氧化系統(tǒng)研究進(jìn)展，旨在為提高植物對(duì)不良環(huán)境的抗性提供參考。

1活性氧的產(chǎn)生及分類

1.1超氧陰離子（O-2）

在物質(zhì)代謝過(guò)程中，大部分進(jìn)入植物的氧被還原為水，其余氧在物質(zhì)代謝過(guò)程中接收到不同數(shù)量的電子，形成不同性質(zhì)的活性氧。氧分子受單一電子形成超氧陰離子。O-2既是陰離子，又是自由基。 它是一種氧化還原活性都很強(qiáng)的活性氧。 植物中O-2生產(chǎn)的途徑主要包括在呼吸鏈轉(zhuǎn)移過(guò)程中形成O-2。葉綠體上的光系統(tǒng) Ⅰ （PSⅠ）、光系統(tǒng) Ⅱ （PS Ⅱ）途徑中的電子傳遞鏈（ETC）泄露電子而生成O-2。此外，通過(guò)酶促反應(yīng)、細(xì)胞核上的電子傳遞鏈會(huì)有電子的側(cè)漏，也會(huì)生成O-2[2-3]。

1.2單線態(tài)氧（O2）

單線態(tài)氧（O2）在植物體內(nèi)產(chǎn)生的途徑很多。葉綠體單線態(tài)氧（O2）的產(chǎn)生主要是以PS Ⅰ為媒介，分2種不同方式產(chǎn)生。第1種是直接還原產(chǎn)生單線態(tài)氧（O2）。例如，當(dāng)存在除草劑時(shí)由于它是光合電子傳遞鏈的電子傳遞轉(zhuǎn)向劑，迫使電流向改變，無(wú)法到達(dá)NADP，從而誘導(dǎo)自由基的形成。第2種由鐵氧還蛋白參與作用是間接還原產(chǎn)生O2[4]。

1.3過(guò)氧化氫（H2O2）

植物在正常生理情況或在各種逆境情況（如干旱、低溫、紫外照射、強(qiáng)光）下都會(huì)產(chǎn)生H2O2。H2O2產(chǎn)生的途徑主要有線粒體、葉綠體的電子鏈傳遞、脂肪酸β氧化、光呼吸、木質(zhì)化和栓化等。與其他活性氧不同的是，它沒(méi)有不成對(duì)的電子，所以可自由透過(guò)生物膜迅速擴(kuò)散從而損傷植物細(xì)胞?；钚匝酰≧OS）中低濃度的H2O2是可以用作調(diào)節(jié)植物環(huán)境脅迫的信號(hào)分子之一。而高濃度的H2O2會(huì)導(dǎo)致一些酶失活，進(jìn)一步造成植物的程序性死亡[5]。

1.4羥自由基（OH-1）

在所有的活性氧中OH-1的氧化能力是最強(qiáng)的，半衰期極短。由于極強(qiáng)的氧化特性及植物體內(nèi)沒(méi)有特定的清除OH-1的機(jī)制，所以它對(duì)植物細(xì)胞有極大損傷。OH-1的產(chǎn)生途徑有很多種：①H2O2與O-2通過(guò)Haber-Weiss反應(yīng)。②H2O2與水（H2O）光解作用。③H2O2與鐵離子（Fe2+）通過(guò)Fenton反應(yīng)[6]。在植物體中OH-1的氧化反應(yīng)可能主要通過(guò)從有機(jī)分子上提取1個(gè)氫原子、與具有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的分子進(jìn)行加成反應(yīng)、與氨基酸進(jìn)行氧化分解反應(yīng)完成。

2植物抗氧化系統(tǒng)的清除機(jī)制

2.1抗氧化酶類-酶促清除系統(tǒng)

2.1.1超氧化物歧化酶（SOD）。

SOD是一種含金屬的酶，對(duì)植物中的超氧陰離子具有特異的清除作用，可根據(jù)不同的的金屬輔助因子分為3類，即Cu/Zn-SOD、Fe-SOD、Mn-SOD。其中Cu/Zn-SOD由2個(gè)金屬亞基組成。在細(xì)胞質(zhì)、葉綠體、植物幼葉中含量較多。Fe-SOD、Mn-SOD由含有1個(gè)金屬離子亞基組成，主要存在于線粒體和葉綠體以及老葉中。SOD可以催化植物體內(nèi)的O-2生成H2O2和O2[7]。此外，SOD可以防止Fe3+被還原成Fe2+，間接阻止通過(guò)Fenton反應(yīng)生成OH-1。

2.1.2過(guò)氧化氫酶（CAT）。

CAT是一種包含血紅素四聚體酶且主要存在于細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化體中一種單功能酶[8]。它主要清除由光呼吸過(guò)程中產(chǎn)生的H2O2，分解為H2O和O2，間接降低了OH-1的產(chǎn)生。由于過(guò)氧化氫的親和力小，所以需要大量的CAT才能實(shí)現(xiàn)對(duì)H2O2的完全清除。

2.1.3抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）。

APX也是清除H2O2的主要酶之一。APX是利用抗壞血酸（AsA）為電子供體清除H2O2[9-10]。H2O2除了自身可以對(duì)植物細(xì)胞造成傷害之外，還可以被O-2還原通過(guò)Haber-Weiss反應(yīng)生成危害性更大的活性氧OH-1，所以對(duì)維持植物體內(nèi)H2O2的相對(duì)水平有重要意義。

2.1.4谷胱甘肽還原酶（GR）。

植物細(xì)胞中的GR也是清除H2O2的關(guān)鍵酶。它主要存在于葉綠體基質(zhì)中與APX形成抗壞血酸-谷胱甘肽（AsA-GSH）循環(huán)發(fā)揮作用[11]。對(duì)植物來(lái)說(shuō)，逆境如干旱、高溫、鹽害、蟲(chóng)害等，都會(huì)使GR的濃度提高，從而增加葉片中還原性谷胱甘肽的表達(dá)量，對(duì)避免細(xì)胞毒害以及環(huán)境脅迫起著重要作用。

2.2抗氧化劑類-非抗氧化酶促清除系統(tǒng)

2.2.1抗壞血酸（AsA）。

AsA，即維生素C（Vc），廣泛存在于各種細(xì)胞器中，在葉綠體基質(zhì)中積累濃度最高，可以清除植物體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧[12]。它還可以清除膜脂過(guò)氧化過(guò)程中產(chǎn)生的多聚不飽和脂肪酸（PUFA）自由基，又可作為酶的底物對(duì)活性氧的清除發(fā)揮著重要作用[13]。由于AsA有多種氧化功能，因此認(rèn)為可以將AsA的降低作為植物抗氧化能力衰退的指標(biāo)。

2.2.2谷胱甘肽（GSH）。

GSH是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）聚合形成的三肽化合物。GSH是植物體內(nèi)重要的活性氧清除劑，可溶于水?？箟难?谷胱甘肽（AsA-GSH）循環(huán)是植物體內(nèi)清除活性氧的重要途徑[9]。此外，GSH還是植物中重要的解毒劑[14]。它與金屬離子有較強(qiáng)的親和力，可以與金屬離子有效地結(jié)合，形成無(wú)毒的化合物從而起到解毒的作用。

3植物自身抗氧化系統(tǒng)對(duì)活性氧的調(diào)節(jié)

3.1不同植物種類之間的差異

由于不同植物的基因型差別較大，所以在植物細(xì)胞程序性死亡與逆境條件下抗氧化酶的含量及活性有一定的差異。通常C4植物因獨(dú)特的花環(huán)結(jié)構(gòu)比C3植物逆境中適應(yīng)性要強(qiáng)。例如，玉米（C4）與小麥（C3）同時(shí)受到水分脅迫時(shí)，小麥植物體細(xì)胞中H2O2的積累要比玉米的多、快，且小麥抗氧化酶的含量略低于玉米，所以C4植物獨(dú)特的花環(huán)結(jié)構(gòu)增加了其對(duì)逆境的適應(yīng)性。

3.2同種植物不同生育時(shí)期之間的差異

同種植物抗氧化酶的活性在不同生育時(shí)期也有所不同[15]。一般在幼葉中ROS的含量較低，隨著發(fā)育成熟ROS的含量逐漸升高，在到達(dá)衰老時(shí)期ROS的含量達(dá)到最大，與此同時(shí)抗氧化酶的含量隨之增大。在植物的生長(zhǎng)周期中，果實(shí)成熟期ROS含量一般高于開(kāi)花期，開(kāi)花期含量高于營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期。

3.3同種植物不同植物器官之間的差異

在同一植物不同組織和器官中，抗氧化酶活性也不同。植物體內(nèi)不同植物器官的抗氧化酶的活性不同。不同植物器官抗逆性有著明顯的差異，主要是由植物體內(nèi)不同組織器官抗氧化酶的含量活性變化所致。對(duì)于大部分植物，根中的抗氧化酶活性變化最為敏感，其次是葉片[16]。

4不同逆境植物抗氧化系統(tǒng)對(duì)清除活性氧的影響

4.1低溫、高溫脅迫對(duì)抗氧化酶活性的影響

無(wú)論何種植物都有其最適宜的生長(zhǎng)溫度范圍，超出或低于這個(gè)溫度范圍都會(huì)對(duì)植物形成溫度脅迫，造成不良影響[17-18]。在同一種溫度脅迫下，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，不同抗氧化酶會(huì)呈現(xiàn)出不同的活性變化，有些抗氧化酶會(huì)呈現(xiàn)出先上升后下降的活性變化。也有些抗氧化酶的活性處于持續(xù)降低的狀態(tài)。因?yàn)榭寡趸副旧砭褪且环N蛋白質(zhì)，會(huì)受到溫度的影響，所以會(huì)呈現(xiàn)出不同的活性。

4.2水分脅迫對(duì)抗氧化酶活性的影響植物在生長(zhǎng)過(guò)程中需要一定的水分。當(dāng)水分高于或低于植物的正常需求范圍時(shí)，會(huì)對(duì)植物造成水分脅迫。當(dāng)水分虧缺時(shí)，植物體內(nèi)很多生理反應(yīng)無(wú)法正常進(jìn)行。水分脅迫使植物體內(nèi)丙二醛（MDA）含量急劇增加，導(dǎo)致膜脂的過(guò)氧化[19]，破壞細(xì)胞膜系統(tǒng)。這種情況下植物通常會(huì)通過(guò)調(diào)節(jié)葉片氣孔的開(kāi)關(guān)程度控制水分蒸騰，進(jìn)行自我保護(hù)[20]。

4.3重金屬離子對(duì)抗氧化酶活性的影響

重金屬會(huì)對(duì)植物正常生長(zhǎng)產(chǎn)生一定影響，不同植物對(duì)不同的金屬元素有著不同的敏感度[21]。某些金屬離子是植物生長(zhǎng)的必需元素，直接參與植物體中的生理生化反應(yīng)，例如Cu/Zn-SOD是一種含銅和鋅的同型二聚體酶。另外的一類重金屬元素不是作物生長(zhǎng)的必需元素，如鉛、鎘、汞等有害重金屬長(zhǎng)期大量的積累會(huì)降低植物抗氧化酶的活性，甚至?xí)?dǎo)致植物的死亡[22]。

5活性氧的檢測(cè)

5.1O-2的檢測(cè)

紫外-可見(jiàn)吸收分光光度法是最常用的檢測(cè)O-2的方法。常用的方法有細(xì)胞色素C還原法和氮藍(lán)四唑（NBT）還原法[23]。細(xì)胞色素C還原法，是通過(guò)把一定量的氧化性細(xì)胞色素C還原為還原性細(xì)胞色素C，在λ550 nm處有最大吸收峰，測(cè)定還原性細(xì)胞色素C的產(chǎn)量，間接得出O-2的含量。該方法的不足之處在于對(duì)細(xì)胞色素C的純度要求較高且細(xì)胞色素C容易被其他物質(zhì)所還原，故靈敏度較低。NBT還原法是在 O2的作用下還原生成不溶于水的藍(lán)色甲臢[24]。該方法測(cè)定靈敏度高，常用于 O-2的組織化學(xué)定位。

5.2OH-1的檢測(cè)

OH-1在活性氧中最為活潑，半衰期極短，檢測(cè)起來(lái)較為困難。后來(lái)發(fā)現(xiàn)DMSO 為OH-1的分子探針，以 DMSO 與 OH-1的反應(yīng)產(chǎn)物甲基亞磺酸（methanesulfinic acid，MSA） 作為OH-1形成的標(biāo)志[25]。但是該方法操作比較煩瑣，且所用藥物毒性較大，有待更進(jìn)一步探究。

5.3H2O2的檢測(cè)

H2O2與其他活性氧相比相對(duì)穩(wěn)定。在弱酸環(huán)境下， H2O2 可將 Fe氧化為Fe3+，F(xiàn)e3+ 和硫氰酸鹽或二甲酚橙反應(yīng)，利用分光光度計(jì)比色法即可測(cè)得以上2種有色產(chǎn)物的含量。在辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）催化下，TMB （3，5，3′5′-四甲基聯(lián)苯胺）與H2O2 反應(yīng)生成有色產(chǎn)物，可通過(guò)分光光度計(jì)檢測(cè)，但靈敏度不高[26]。在 HRP 催化下，Amplex Red與 H2O2 反應(yīng)產(chǎn)生氧化產(chǎn)物 RSF（resorufin），發(fā)出紅色熒光Amplex Red高度特異和靈敏，RSF 非常穩(wěn)定，且熒光不易受到生物樣品自發(fā)熒光的干擾。除此之外，可利用綠色熒光蛋白的 H2O2 的熒光探針[27]、H2O2 的特異性熒光探針 HyPer等新技術(shù)[28]。

5.4O2的檢測(cè)

用于測(cè)定O2的方法主要有化學(xué)發(fā)光法、電子順磁共振法（ESR）、色譜分光光度法等[29]?；瘜W(xué)發(fā)光法是利用探針?lè)肿优c單線態(tài)氧反應(yīng)生成高化合物，生成的產(chǎn)物會(huì)迅速分解并伴隨這些能量的釋放，對(duì)發(fā)出的信號(hào)可進(jìn)行檢測(cè)。色譜法是利用高效液相色譜法（HPLC），依據(jù)探針捕獲單線態(tài)氧前后吸光度變化進(jìn)行測(cè)定。ESR 探針的檢測(cè)原理是單線態(tài)氧的ESR 自旋捕獲劑與1O 作用后導(dǎo)致ESR信號(hào)的變化，該方法被大量用于光敏化過(guò)程中O2的測(cè)定[30]。

5.5MDA的檢測(cè)

脂類過(guò)氧化產(chǎn)生的最終產(chǎn)物MDA可作為脂類過(guò)氧化的指標(biāo)。在實(shí)驗(yàn)室中常用硫代巴比妥酸（TBA）與其反應(yīng)，生成的化合物為粉紅色，可在λ532 nm處被檢出。該方法應(yīng)用廣泛，經(jīng)濟(jì)、便捷，但是由于TBA對(duì)MDA專一性不強(qiáng)，造成一定誤差。HPLC可以專一地直接測(cè)定MDA[31]。HPLC雖然專一、靈敏、快速，但不能短時(shí)間內(nèi)同時(shí)測(cè)量很多樣品，且儀器價(jià)格昂貴。

6展望

ROS在植物中主要是在自然衰老階段和逆境大量積累。ROS具有“兩面性”。清除植物體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧主要通過(guò)抗氧化酶與抗氧化劑。它們?cè)趨f(xié)同合作，清除自身代謝與逆境產(chǎn)生的活性氧?？寡趸割愔饕谐趸锲缁福⊿OD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）、谷胱甘肽還原酶（GR）?？寡趸瘎╊愔饕锌箟难?、谷胱甘肽、甘露醇和黃酮類等物質(zhì)。在植物細(xì)胞的研究中，抗氧化酶類的活性與植物的自身代謝、植物逆境脅迫有著密切的相關(guān)性。但是目前對(duì)ROS產(chǎn)生及檢測(cè)尚未完全探知，對(duì)植物抗氧化清除機(jī)制利用有待發(fā)展。因此，正確了解植物體中活性氧的生成和性質(zhì)及植物抗氧化系統(tǒng)的作用機(jī)理不僅對(duì)植物的自身及逆境的生理代謝有著重要作用，對(duì)生物工程轉(zhuǎn)抗氧化基因有著深遠(yuǎn)的意義。

參考文獻(xiàn)

[1]

BAILEYSERRES J，MITTLER R.The roles of reactive oxygen species in plant cells[J].Plant physiology，2006，141（2）：311.

[2] 黃亞成，秦云霞.植物中活性氧的研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，28（36）：219-226.

[3] 李國(guó)婧.超氧陰離子的產(chǎn)生及其在植物體內(nèi)作用的研究[J].生物技術(shù)世界，2012（4）：24-25.

[4] TRIANTAPHYLIDS C，KRISCHKE M，HOEBERICHTS F A，et al.Singlet oxygen is the major reactive oxygen species involved in photooxidative damage to plants[J].Plant physiology，2008，184（2）：960-968.

[5] 張夢(mèng)如，楊玉梅，成蘊(yùn)秀，等.植物活性氧的產(chǎn)生及其作用和危害[J].西北植物學(xué)報(bào)，2014，34（9）：1916-1926.

[6] BHATTACHARJEE W.The language of reactive oxygen species signaling in plants[J].Journal of botany，2012，4：99-103.

[7] MIURA C，SUGAWARA K，NERIYA Y，et al.Functional characterization and gene expression profiling of superoxide dismutase from plant pathogenic phytoplasma[J].Gene，2012，510（2）：107-112.

[9] 薛鑫，張芊，吳金霞.植物體內(nèi)活性氧的研究及其在植物抗逆方面的應(yīng)用[J].生物技術(shù)通報(bào)，2013（10）：6-11.

[8] 謝曉紅.植物抗氧化酶系統(tǒng)研究進(jìn)展[J].化工管理，2015（32）：99-100.

[9] 尹永強(qiáng)，胡建斌，鄧明軍.植物葉片抗氧化系統(tǒng)及其對(duì)逆境脅迫的影響研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2007，23（1）：105-110.

[10] 孫衛(wèi)紅，王偉青，孟慶偉.植物抗壞血酸過(guò)氧化物酶的作用機(jī)制、酶學(xué)及分子特性[J].植物生理學(xué)通訊，2005，41（2）：143-147.

[11] 程華，李琳玲，常杰，等.植物抗氧化酶的研究進(jìn)展[C]//2008園藝學(xué)進(jìn)展（第八輯）——中國(guó)園藝學(xué)會(huì)第八屆青年學(xué)術(shù)討論會(huì)暨現(xiàn)代園藝論壇論文集.上海：中國(guó)園藝學(xué)會(huì)，2008.

[12] BOATRIGHT W L.Oxygen dependency of oneelectron reactions generating ascorbate radicals and hydrogen peroxide from ascorbic acid[J].Food chemistry，2016，196：1361.

[13] 陳坤明，宮海軍，王鎖民.植物抗壞血酸的生物合成、轉(zhuǎn)運(yùn)及其生物學(xué)功能[J].西北植物學(xué)報(bào)，2004，24（2）：329-336.

[14] 閆慧芳，毛培勝，夏方山.植物抗氧化劑谷胱甘肽研究進(jìn)展[J].草地學(xué)報(bào)，2013，21（3）：428-434.

[15] 康璐瑤，崔海峰，邢阿寶，等.龍茭2號(hào)不同發(fā)育階段莖部活性氧的檢測(cè)分析[J].長(zhǎng)江蔬菜，2015（22）：92-94.

[16] 王永軍，楊今勝，袁翠平，等.超高產(chǎn)夏玉米花粒期不同部位葉片衰老與抗氧化酶特性[J].作物學(xué)報(bào)，2013，39（12）：2183-2191.

[17] YANG Q Z，ZHANG Z K，RAO J P，et al.Lowtemperature conditioning induces chilling tolerance in ′Hayward′ kiwifruit by enhancing antioxidant enzyme activity and regulating endogenous hormones levels[J].Journal of the science of food & agriculture，2013，93（15）：3691.

[18] 杜朝昆，李忠光，龔明.水楊酸誘導(dǎo)的玉米幼苗適應(yīng)高溫和低溫脅迫的能力與抗氧化酶系統(tǒng)的關(guān)系[J].植物生理學(xué)通訊，2005，41（1）：19-22.

[19] 仵小南，沈曾佑，張志良，等.水分脅迫對(duì)植物線粒體結(jié)構(gòu)和脯氨酸氧化酶活性的影響[J].植物生理學(xué)報(bào)，1986，12（4）：388-395.

[20] 阮志平，唐源江，曾美涓.干旱脅迫對(duì)4種棕櫚植物幼苗光合特性及抗氧化酶活性的影響[J].熱帶植物學(xué)報(bào)，2016，37（10）：1914-1919.

[21] 羅潔文，李瑩，蘇爍爍，等.類蘆根系抗氧化酶和植物螯合肽對(duì)Cd、Pb脅迫的應(yīng)答[J].生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào)，2016，25（6）：1047-1053.

[22] 楊雨嘉，支崇遠(yuǎn)，李培林，等.重金屬Cd2+和Cu2+對(duì)一種曲殼藻生長(zhǎng)情況及其抗氧化酶活性的影響[J].生態(tài)科學(xué)，2015，34（6）：75-80.

45卷36期白英俊等活性氧與植物抗氧化系統(tǒng)研究進(jìn)展

[23] 趙曉玉，薛嫻，盧存福，等.植物中活性氧信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及其檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].電子顯微學(xué)報(bào)，2014（2）：188-196.

[24] DRIEVER S M，F(xiàn)RYER M J，MULLINEAUX P M，et al. Plant signal transduction[M]. Hatfield：Humana Press，2009：109-116.

[25] MCRAC D G，THOMPSON J E，et al.Senescene dependent changes in superoxide anion production in illuminatedchlo ro plasts from bean leaves[J].Planta ，1983 ，158（3）：185.

[26] GRISHAM M B. Methods to detect hydrogen peroxide in living cells：Possibilities and pitfalls[J].Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol，2013，165（4）：429-438.

[27] HERNNDEZBARRERA A，QUINTO C，JOHNSON E A，et al.Chapter Fifteenusing hyper as a molecular probe to visualize hydrogen peroxide in living plant cells：A method with virtually unlimited potential in plant biology[J].Methods in enzymology，2013，527（527）：275-290.

[28] BARTOSZ G.Use of spectroscopic probes for detection of reactive oxygen species[J].Clinica chimica acta，2006，368（1/2）：53-76.

[29]BELOUSOV V V，F(xiàn)RADKOV A F，LUKYANOV K A，et al.Genetically encoded fluorescent indicator for intracellular hydrogen peroxide[J].Nat Methods，2006，3（4）：281-286.

[30] FISCHER B B，HIDEG ，KRIEGERLISZKAY A.Production，detection，and signaling of singlet oxygen in photosynthetic organisms[J].Antioxidants & redox signaling，2013，18（16）：2145-2162.

[31] 左玉.脂質(zhì)過(guò)氧化及抗氧化劑抗氧化活性檢測(cè)方法[J].糧食與油脂，2009（2）：39-42.