HNL、PCT、CRP及膜聯(lián)蛋白A1對COPD合并呼吸系統(tǒng)感染的診斷價值

黃志衛(wèi)，陸玲

(1欽州市第一人民醫(yī)院，廣西欽州535000；2北海市第四人民醫(yī)院)

HNL、PCT、CRP及膜聯(lián)蛋白A1對COPD合并呼吸系統(tǒng)感染的診斷價值

黃志衛(wèi)1，陸玲2

(1欽州市第一人民醫(yī)院，廣西欽州535000；2北海市第四人民醫(yī)院)

目的 探討血清中性粒細(xì)胞載脂蛋白(HNL)、降鈣素原(PCT)、C反應(yīng)蛋白(CRP)及外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1表達(dá)對慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并呼吸系統(tǒng)感染的診斷價值。方法 選擇COPD患者152例，其中合并呼吸系統(tǒng)病毒感染47例(病毒感染組)、細(xì)菌感染63例(細(xì)菌感染組)、無感染42例(對照組)。分別采用ELISA法、化學(xué)發(fā)光法和免疫速率法檢測各組血清HNL、PCT、CRP，采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法檢測各組外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1 mRNA及蛋白表達(dá)。結(jié)果 細(xì)菌感染組血清HNL、PCT、CRP水平高于病毒感染組和對照組(P均<0.05)，病毒感染組HNL、PCT、CRP水平與對照組比較P均>0.05。細(xì)菌感染組HNL、PCT、CRP陽性率分別為94.58%、85.71%、73.02%，均高于病毒感染組和對照組(P均<0.05)，病毒感染組血清HNL、PCT、CRP陽性率與對照組比較P均>0.05。以對照組為陰性組，以細(xì)菌感染組為陽性組構(gòu)建ROC曲線，HNL、PCT、CRP診斷細(xì)菌感染的靈敏度分別為91.43%、82.91%和78.22%，特異度分別為94.71%、91.35%和82.44%，陽性預(yù)測值分別為90.21%、70.81%和60.73%。細(xì)菌感染組及病毒感染組患者外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1 mRNA及蛋白表達(dá)水平較對照組均升高，病毒感染組高于細(xì)菌感染組(P均<0.05)。結(jié)論 聯(lián)合檢測血清HNL、PCT和CRP有助于COPD合并呼吸系統(tǒng)細(xì)菌感染和病毒感染的鑒別診斷，外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1的表達(dá)可作為其有力補(bǔ)充。

慢性阻塞性肺疾??；中性粒細(xì)胞載脂蛋白；降鈣素原；C反應(yīng)蛋白；膜聯(lián)蛋白A1；呼吸系統(tǒng)感染

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種以氣流阻塞為特征的慢性呼吸道疾病，易出現(xiàn)反復(fù)急性加重，導(dǎo)致肺功能惡化甚至呼吸衰竭[1，2]。COPD急性加重常由微生物感染誘發(fā)[3]，然而病原體培養(yǎng)等手段費(fèi)用較高且耗時較長。因此，早期診斷COPD患者呼吸系統(tǒng)是否并發(fā)微生物感染及感染微生物的類型，有助于早期干預(yù)，預(yù)防感染急性加重。研究顯示，細(xì)菌感染患者血清中性粒細(xì)胞載脂蛋白(HNL)和降鈣素原(PCT)水平明顯升高，可用于細(xì)菌感染的早期診斷、預(yù)后判斷及療效監(jiān)測[4]。膜聯(lián)蛋白A1是近年新發(fā)現(xiàn)的一種抗炎蛋白，在調(diào)節(jié)炎癥代謝產(chǎn)物及單核細(xì)胞黏附過程中發(fā)揮重要作用[5]。本研究根據(jù)COPD患者感染的微生物類型(細(xì)菌感染和病毒感染)進(jìn)行分組，比較其血清HNL、PCT、CRP及外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1 mRNA及蛋白的表達(dá)，探討上述指標(biāo)在COPD患者合并呼吸系統(tǒng)感染的診斷價值，為臨床鑒別診斷提供快速、準(zhǔn)確、方便的實驗室指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2014年6月～2016年6月我院收治的COPD患者152例，男91例、女61例，年齡40～90歲。均符合2014版GOLD中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。合并呼吸系統(tǒng)細(xì)菌感染63例(經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)證實)，男39例、女24例，年齡(67±12)歲；病毒感染47例(經(jīng)相關(guān)病毒抗體檢測證實)，男28例、女19例，年齡(69±10)歲；無感染42例，男24例、女18例，年齡(65±8)歲。入選者近期未給予抗生素或抗病毒藥物治療。排除孕婦、合并其他感染性疾病、惡性腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能不全等疾病患者。

1.2 血清HNL、PCT、CRP檢測 采集空腹靜脈血，離心分離血清，使用Rayto RT-6000全自動酶標(biāo)儀檢測HNL，全自動生化分析儀檢測PCT、CRP。所有操作均嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1 mRNA表達(dá)檢測 采用實時熒光定量PCR方法。使用總RNA提取試劑盒提取外周血單個核細(xì)胞中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板，按照qPCR試劑盒說明書配制反應(yīng)體系，進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。采用Premer Premier軟件設(shè)計引物，引物序列：上游5′-CCTGGATCGCATAATGAAGA-3′；下游5′-CTAAGCCACCCATCAGATTGAGA-3′。反應(yīng)條件：95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，59 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40個循環(huán)。以GAPDH為參照進(jìn)行相對定量分析，用2-ΔΔCt法計算目的基因相對表達(dá)量。

1.4 外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1蛋白表達(dá) 使用蛋白提取試劑盒提取外周血單個核細(xì)胞全蛋白，取20 μL進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺SDS-PAGE凝膠電泳，半干轉(zhuǎn)15 V 6 min，5%脫脂奶粉封閉2 h，加入一抗4 ℃搖床孵育過夜，加入HRP標(biāo)記的二抗，室溫?fù)u床孵育2 h。凝膠成像分析儀上成像并進(jìn)行分析。以β-actin為內(nèi)參，計算膜聯(lián)蛋白A1與β-actin內(nèi)參灰度值的比值。

2 結(jié)果

2.1 三組血清HNL、PCT、CRP水平比較 細(xì)菌感染組血清HNL、PCT、CRP較病毒感染組和對照組升高(P均<0.05)，病毒感染組各指標(biāo)與對照組比較，P均>0.05。見表1。

表1 各組血清HNL、PCT、CRP水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與病毒感染組比較，#P<0.05。

2.2 各組HNL、PCT、CRP陽性率比較 以HNL>55.9 μg/L、PCT>0.05 μg/L、CRP>10 mg/L為陽性。各組HNL、PCT、CRP陽性率見表2。細(xì)菌感染組HNL、PCT、CRP陽性率高于病毒感染組和對照組(P均<0.05)，病毒感染組與對照組比較，P均>0.05。

表2 各組HNL、PCT、CRP陽性率比較(%)

注：與對照組比較，*P<0.05；與病毒感染組比較，#P<0.05。

2.3 HNL、PCT、CRP對COPD合并呼吸系統(tǒng)感染的診斷價值 由于病毒感染組血清HNL、PCT、CRP水平及陽性率與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異，故本研究以細(xì)菌感染組為陽性組、對照組為陰性組構(gòu)建ROC曲線，結(jié)果顯示，HNL和PCT的敏感性、特異性和陽性預(yù)測值均高于傳統(tǒng)檢測指標(biāo)CRP，具有更好的診斷價值。見表3。

表3 血清HNL、PCT、CRP對COPD合并呼吸系統(tǒng)細(xì)菌感染的診斷價值

2.4 各組外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1 mRNA及蛋白表達(dá)比較 細(xì)菌感染組及病毒感染組外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1 mRNA及蛋白表達(dá)較對照組升高(P<0.05或<0.01)，病毒感染組高于細(xì)菌感染組(P均<0.01)。見表4。

表4 各組外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1 mRNA及蛋白表達(dá)比較±s)

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與細(xì)菌感染組比較，#P<0.01。

3 討論

COPD急性加重指疾病過程中，患者短期內(nèi)咳嗽、咳痰、氣喘和(或)喘息加重，痰量增多，呈膿性或黏液膿性，可伴發(fā)熱等炎癥明顯加重的表現(xiàn)，易導(dǎo)致肺功能惡化，甚至呼吸衰竭，危及患者的生命[6]。COPD的急性加重常由微生物感染誘發(fā)，主要包括細(xì)菌、病毒和真菌等[7，8]。病原體的分離培養(yǎng)是診斷細(xì)菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但細(xì)菌培養(yǎng)操作復(fù)雜，需要特定的生長時間和生長環(huán)境；對標(biāo)本要求高，臨床上以不合格標(biāo)本居多；檢出率較低，需多次留取樣本反復(fù)送檢，給患者和醫(yī)務(wù)人員造成負(fù)擔(dān)。由于以上種種原因，導(dǎo)致醫(yī)務(wù)人員不能及時制定治療方案，錯過最佳治療時間，延誤病情。病原體抗原或抗體檢測的敏感性和特異性均較高，但檢測試劑只針對一種病原體，臨床應(yīng)用具有一定的局限性。因此，早期診斷COPD患者呼吸系統(tǒng)是否并發(fā)微生物感染及感染微生物的類型，有助于在感染早期對COPD患者進(jìn)行診斷和干預(yù)，預(yù)防COPD急性加重。

HNL是載脂蛋白超家族成員，是中性粒細(xì)胞的脫顆粒產(chǎn)物，在天然免疫的鐵消耗抑菌策略中主要作為乳鐵蛋白的抗菌作用的補(bǔ)充[9]。文獻(xiàn)報道，HNL比WBC、ESR、CRP等更能用于細(xì)菌感染的早期診斷和動態(tài)監(jiān)測，是近年來備受關(guān)注的感染性指標(biāo)。PCT由116個氨基酸組成活性的降鈣素前體，主要在肝臟產(chǎn)生，其他如單核細(xì)胞也可產(chǎn)生。文獻(xiàn)報道，PCT能夠有效預(yù)測院內(nèi)感染患者的病死率，與感染密切相關(guān)[10，11]。CRP的臨床應(yīng)用廣泛，主要用于細(xì)菌和病毒感染的鑒別診斷，但其峰值出現(xiàn)常常滯后于炎癥的發(fā)生，且在類風(fēng)濕活動期、腫瘤等疾病患者的體內(nèi)亦有增高，因此CRP臨床應(yīng)用效果并不理想。本研究結(jié)果顯示，COPD合并細(xì)菌感染組HNL、PCT、CRP水平顯著高于COPD合并病毒感染組及對照組，說明三者可用于細(xì)菌感染的早期診斷，并可用于COPD合并細(xì)菌感染和病毒感染的鑒別診斷。細(xì)菌感染組血清HNL和PCT的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值均高于CRP，說明HNL和PCT對COPD合并細(xì)菌感染的診斷價值優(yōu)于CRP，且以HNL更優(yōu)。

膜聯(lián)蛋白A1是一種重要的炎癥調(diào)控蛋白，在炎性代謝產(chǎn)物生成、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附的過程中起重要作用[5，12]，但膜聯(lián)蛋白A1的表達(dá)在COPD合并細(xì)菌或病毒感染患者外周血單個核細(xì)胞中的表達(dá)變化如何未見報道。本研究顯示，細(xì)菌感染組和病毒感染組外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1 mRNA及蛋白表達(dá)均較對照組升高，且病毒感染組高于細(xì)菌感染組。說明膜聯(lián)蛋白A1的表達(dá)變化可作為鑒別細(xì)菌和病毒感染的指標(biāo)。由于病毒感染時HNL、PCT、CRP表達(dá)無明顯變化，而膜聯(lián)蛋白A1表達(dá)顯著升高，因此膜聯(lián)蛋白A1可作為病毒性感染診斷的有力補(bǔ)充。文獻(xiàn)報道，miRNA、p38磷酸化狀態(tài)等可調(diào)控膜聯(lián)蛋白A1表達(dá)[13，14]，但在COPD合并細(xì)菌或病毒感染患者外周血單個核細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A1的表達(dá)變化機(jī)制尚未可知，需進(jìn)一步研究。

綜上所述，血清HNL、PCT聯(lián)合外周血單個核細(xì)胞膜聯(lián)蛋白A1檢測，有利于COPD合并細(xì)菌或病毒感染的鑒別診斷；且三者檢測操作簡單、耗時較短、適用性強(qiáng)，值得臨床推廣應(yīng)用。

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2016-07-28)