曲長欣+楊青
摘 要:本實(shí)驗(yàn)對(duì)清熱解毒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。含量測(cè)定方法:采用奧泰公司C18色譜柱(220mm×4.6mm,5μm),乙腈-甲醇-水(5:25:70)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長為277nm,流速為1.0ml/min,柱溫為30℃,連翹苷在0.05~12.8mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。鑒別方法:硅膠G薄層板,甲苯-丙酮(9:1)為展開劑,展開,取出,晾干,8%香草醛無水乙醇溶液與硫酸溶液(7→10)的混合液(0.5:5),在100℃加熱至斑點(diǎn)顏色清晰。結(jié)論:本法簡便、準(zhǔn)確,可作為清熱解毒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
關(guān)鍵詞:清熱解毒顆粒;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);研究
清熱解毒顆粒由金銀花、連翹、水牛角、黃連、地黃、知母、玄參等組成。清熱解毒顆粒具有清熱解毒,養(yǎng)陰生津,瀉火的功效。清熱解毒顆粒常用于風(fēng)熱型感冒、流行性腮腺炎及輕、中型乙型腦炎。連翹具有清熱,解毒,散結(jié),消腫等功效。連翹主要用于溫?zé)帷⒌ざ?、斑疹、癰瘍腫毒、瘰疬等。連翹具改善學(xué)習(xí)記憶障礙、舒張血管、抗氧化、抗菌、抗感染、解熱、防護(hù)耳毒性等廣泛的藥理作用[1-5]。《神農(nóng)本草經(jīng)》記載:“主寒熱,鼠痿,瘰疬,癰腫惡瘡,癭瘤,結(jié)熱?!敝?,性苦寒,具有有滋陰降火、潤燥滑腸、利大小便之效?!端幮哉摗酚涊d:“主治心煩躁悶,骨熱勞往來,生產(chǎn)后蓐勞,腎氣勞,憎寒虛損,患人虛而口干,加而用之。”本實(shí)驗(yàn)對(duì)清熱解毒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。
1 儀器與試藥
1.1 儀器:半自動(dòng)點(diǎn)樣儀LINOMAT Ⅳ(瑞士CAMAG);756PC紫外可見分光光度計(jì)(四川匯巨儀器設(shè)備有限公司);EX1600高效液相色譜儀(上海棱譜儀器儀表有限公司);FR124CN萬分之一電子天平(安慶昌嘉電子產(chǎn)品有限公司);HWY-D28恒溫低溫水?。ㄉ虾S鹜▋x器儀表廠);雙槽展開缸 PF 562C(瑞士CAMAG);DHG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海和呈儀器制造有限公司);實(shí)驗(yàn)室高純水機(jī)(上海技舟化工科技有限公司)。
1.2 色譜柱:奧泰公司C18色譜柱(220mm×4.6mm,5μm)。
1.3 對(duì)照品:連翹苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所),菝葜皂苷元對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所)。
1.4 試劑:甲醇(江蘇聯(lián)海生物科技有限公司)、乙腈(廣州市西隴化工有限公司)、香草醛(深圳市永熙化工有限公司)、苯(北京亞太龍興化工有限公司)、硫酸(上海海曲化工有限公司)、乙醇(北京亞太龍興化工有限公司)、鹽酸(北京亞太龍興化工有限公司)、甲苯(廣州市西隴化工有限公司)、丙酮(北京亞太龍興化工有限公司)、無水乙醇(廣州市西隴化工有限公司)。
1.5 試藥:清熱解毒顆粒
2 測(cè)定方法確定
2.1 色譜條件
依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果,確定色譜條件如下。流動(dòng)相:乙腈-甲醇-水(5:25:70)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長:277nm,流速:1.0ml·min-1。柱溫:30℃。理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。
2.2 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取連翹苷對(duì)照品適量,置容量瓶中,加流動(dòng)相制成每1mL含0.2mg的溶液,即得。
2.3 供試品溶液的制備
取清熱解毒顆粒適量,研細(xì),精密稱定,加20毫升甲醇超聲提取30分鐘,過濾,蒸干濾液,殘?jiān)恿鲃?dòng)溶解轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。
2.4 專屬性試驗(yàn)
取金銀花、水牛角、大青葉、黃連、地黃、知母、玄參等藥材按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品,按上述實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè),結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾,表明本方法專屬性良好。
2.5 精密度試驗(yàn)
取對(duì)照品溶液按上述色譜條件,精密吸取20μl,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積。結(jié)果,RSD=0.65%,表明本方法精密度良好。
2.6 對(duì)照品的線性考察
精密稱取適量連翹苷對(duì)照品,加入流動(dòng)相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8毫克的溶液。分別精密上述溶液吸取20μL,注人液相色譜儀,依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定,記錄色譜峰。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo),對(duì)照品進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明,連翹苷在0.05~12.8mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)
稱取同一批的清熱解毒顆粒樣品6份,按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液,測(cè)定含量,并計(jì)算樣品的RSD值,結(jié)果RSD為0.66%,結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。
2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)
取對(duì)照品適量分別精密加入清熱解毒顆粒中,按含量測(cè)定進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算回收率為99.3%,RSD為0.69%。
3 鑒別
取清熱解毒顆粒適量,加乙醇20ml,加熱回流40min后取上清液,加鹽酸1ml加熱回流1h,取提取液10ml,濃縮至約5ml,加水10ml,用苯20ml振搖提取,提取液蒸干,殘?jiān)颖?ml使溶解,作為供試品溶液。另取知母對(duì)照藥材2g,加乙醇20ml,加熱回流40min后取上清液,加鹽酸1ml加熱回流1h,取提取液10ml,濃縮至約5ml,加水10ml,用苯20ml振搖提取,提取液蒸干,殘?jiān)颖?ml使溶解,作為對(duì)照品溶液。取除知母以外藥材按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品,按上述方法制成陰性對(duì)照樣品。吸取上述溶液,點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮(9:1)為展開劑,展開、取出、晾干,噴以8%香草醛無水乙醇溶液與硫酸溶液(7→10)的混合液(0.5:5),在100℃加熱至斑點(diǎn)顏色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),而陰性對(duì)照無干擾。
4 結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)分離效果好、方法簡便、快捷、準(zhǔn)確、專屬性好,可用于清熱解毒顆粒中連翹苷的含量測(cè)定。樣品與知母對(duì)照藥材對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),陰性無干擾。該鑒別方法專屬性強(qiáng),操作簡單,可用于清熱解毒顆粒中知母的鑒別。
參考文獻(xiàn)
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