復方黃參術制劑配合豬瘟免疫的應用研究

文│楊軍（遼寧省建平縣動物疫病預防控制中心）

復方黃參術制劑配合豬瘟免疫的應用研究

文│楊軍（遼寧省建平縣動物疫病預防控制中心）

多年來，養(yǎng)豬場豬瘟免疫失敗是一個現實存在的問題。很多疫苗廠家、獸藥經銷商甚至有些專家建議提高免疫劑量，從實際效果分析，短期效果顯著。但由于現在國內廠家生產的各種疫苗多為活毒，會出現超量免疫動物排毒現象，把疫苗毒排到豬舍內，因為飼養(yǎng)環(huán)境差，毒株經過幾代繁衍會變強，或者有的病毒發(fā)生變異，成為造成豬瘟免疫失敗的一個主要因素。筆者多年研究使用中藥制劑提高動物自身的免疫能力，以期達到免疫效果，對于豬瘟的試驗如下。

一、材料與方法

1.豬瘟試劑盒。IDEXX豬瘟病毒抗體檢測試劑盒，購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；豬瘟脾淋疫苗，購自遼寧省益康生物技術有限公司。

表1 篩選優(yōu)化生產母豬免疫程序設計與分組

2.中藥配方。中藥方劑：黃芪15克、黨參8克、白術（炙）8克、茯苓6克、肉蓯蓉4克、菟絲子4克，板藍根7克、連翹7克、沙參（玄參）7克、甘草8克等。以上按比例用水煎熬制成60毫升，飼喂仔豬40頭（50千克以下），成年豬30頭（或者應用粉劑劑量）。

2012年5月至2015年7月，分別在遼寧省朝陽市建平縣萬壽街道東村李志剛、深井鎮(zhèn)章吉營子村侯偉、鐵南街道南溝村丁福豬場進行對比試驗。

3.試驗方法。

（1）豬瘟病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）檢測原理。該試劑盒豬瘟病毒抗原包被的微量反應板，利用阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理檢測豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體。如果被檢血清中存在豬瘟病毒抗體，它們就會阻斷辣根過氧化物酶標記（HRPO）的抗豬瘟病毒的單克隆抗體。該抗體與豬瘟病毒抗原結合通過辣根過氧化物酶與底物的顯色程度進行判斷，即用酶標儀在單波長450納米或雙波長450納米與650納米測定該反應體系的吸光度。當被檢血清樣品中含有豬瘟病毒抗體（結果為陽性）時，顯色就會變淺，樣品中沒有豬瘟抗體（結果為陰性）時，顯色就會變深。樣品的阻斷率可以通過450納米波長樣本吸光度與陰性對照吸光度的比值來確定。

表2 篩選優(yōu)化生長育肥仔豬免疫程序設計與分組

（2）分組及實驗方法。分組說明：分別對試驗母豬組和試驗仔豬組的免疫時間、免疫劑量分別進行篩選。每組實驗分別在建平縣萬壽街道東村李志剛和深井鎮(zhèn)章吉營子村侯偉、鐵南街道南溝村丁福家豬場進行。

三戶分別選擇日齡相近的經產母豬各10頭，隨機分成2組，于產后30天在頸部肌肉注射疫苗，免疫劑量依次為1頭份、2頭份，每年免疫一次。采血、分離血清分別在免疫7天后進行，分別在4個時間段用IDEXX豬瘟病毒抗體檢測試劑盒檢測豬瘟抗體。以觀測其在30天、100天、200天、300天抗體水平。

（3）試驗生產母豬組、育肥仔豬組和對照組設計。從上述三戶1頭份試驗組母豬中分別選擇抗體較高，產仔數在10頭以上的4頭，待其產仔后，從其4窩仔豬中每窩選擇10頭進行跟蹤采血，檢測豬瘟抗體水平。跟蹤采血日齡為35、60、80、100。

（4）生產母豬豬瘟免疫及其中藥給藥方法。見表1，對以上3戶9組母豬進行跟蹤采血檢測抗體水平，跟蹤采血日齡為30、100、200、300，連續(xù)4年。

（5）育肥仔豬豬瘟免疫及其中藥給藥方法（表2）。從1頭份劑量免疫組母豬所產仔豬中每窩隨機選擇4頭，每組共10頭，最后獲得4組試驗豬，共40頭。對以上4個組試驗豬分別進行跟蹤采血檢測抗體水平，跟蹤采血日齡為35、60、80、100。

二、結果分析

1.判斷標準。陰性對照的平均OD450值大于0.5，陽性對照的阻斷率大于50%。樣品的阻斷率=（陰性對照的OD450平均值－樣品OD450值）÷陰性對照的OD450平均值x100%）。通過計算每個樣品的阻斷率判斷豬瘟病毒（CSFV）抗體，如果被檢樣品的阻斷率大于50%，判斷為CSFV抗體陽性或有效保護；如果被檢樣品的阻斷率在40%～50%，判斷為CSFV抗體陽性或合格；如果被檢樣品的阻斷率在30%～40%，判斷為CSFV抗體為疑似；如果被檢樣品的阻斷率小于30%，判斷為CSFV抗體陰性或沒有保護。

2.篩選母豬免疫程序。從表1生產母豬免疫程序設計與分組進行試驗，試驗母豬豬瘟抗體檢測阻斷率結果見表3。結果表明，2頭份免疫組母豬抗體阻斷率水平，平均略高于1頭份免疫組，抗體水平差異不顯著（p＞0.05）。1頭份免疫組和2頭份免疫組的母豬抗體持續(xù)時間差異不顯著（p＞0.05）。

表3 母豬豬瘟抗體跟蹤檢測抗體阻斷率結果 天、頭

表4 仔豬豬瘟抗體跟蹤檢測抗體阻斷率結果 天、頭

表5 篩選母豬和生長育肥豬抗體檢測合格率 頭

3.篩選仔豬免疫程序。從表2篩選優(yōu)化生長育肥豬免疫程序設計與分組試驗，試驗仔豬豬瘟抗體檢測阻斷率結果情況見表4。結果表明， 2頭份免疫組母豬抗體阻斷率水平，平均略高于1頭份免疫組，抗體水平差異不顯著（p＞0.05）。1頭份免疫組和2頭份免疫組的母豬抗體持續(xù)時間差異不顯著（p＞0.05）。

4.篩選優(yōu)化生產母豬免疫程序結果。2倍量組和1倍量組免疫抗體陽性率沒有明顯區(qū)別（表5）。2倍量組在試驗中出現1頭為陰性，沒有保護力。所以，應用豬瘟脾淋疫苗免疫沒有必要加量免疫注射，這樣雖然1倍量組被檢豬瘟病毒抗體阻斷率略大于50%，但完全能夠起到保護作用；而2倍量組被檢豬瘟病毒抗體阻斷率多在于70%左右，但是從表3中看出抗體持續(xù)時間上不夠穩(wěn)定。由此得出結論是從節(jié)省開支，減少浪費上看，1倍量組優(yōu)于2倍量組。

5.篩選優(yōu)化生長育肥豬免疫程序結果。試驗生長育肥豬跟蹤采血檢測抗體水平見表4。結果表明，2倍量組和1倍量組比較，前者不如后者，因為2倍量組在從其跟蹤100天檢測時出現1頭抗體陰性。從表5可以看出，免疫抗體陽性率沒有明顯區(qū)別。2倍量組和1倍量組在試驗中出現2頭陰性，沒有保護力。所以在應用豬瘟脾淋疫苗免疫沒有必要加量免疫注射，表3對比發(fā)現，2倍量組較1倍量組抗體持續(xù)時間短。

三、結論

第一，生產母豬通過試驗檢測豬內的豬瘟抗體水平，通過應用中藥研究制定了適合于不同養(yǎng)殖模式的豬瘟免疫程序，即應用豬瘟脾淋常規(guī)劑量配合中藥進行免疫，母豬每年免疫一次，免疫抗體持續(xù)時間達到一年。

第二，仔豬常規(guī)免疫，應用豬瘟脾淋首免日齡35日齡，加強免疫時間為60日齡，免疫劑量1頭份較為合適。