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      蒙成藥給喜古訥-3湯對肥胖小鼠的影響△

      2017-05-24 14:49:07桂利斯孟永梅
      中國民族醫(yī)藥雜志 2017年2期
      關鍵詞:成藥高脂血常規(guī)

      桂利斯 孟永梅

      (內蒙古醫(yī)科大學,內蒙古 呼和浩特 010110)

      蒙成藥給喜古訥-3湯對肥胖小鼠的影響△

      桂利斯 孟永梅*

      (內蒙古醫(yī)科大學,內蒙古 呼和浩特 010110)

      目的:建立食源性肥胖小鼠模型,觀察蒙成藥給喜古訥-3湯對肥胖小鼠的體重、肥胖度、Lee’s指數、腹腔脂肪重量、體脂比和血常規(guī)的影響。方法: 實驗分空白組、模型組、陽性給藥組、蒙成藥給喜古訥-3湯高、中、低3個劑量組,共6組;空白組喂養(yǎng)普通飼料,其他5組喂養(yǎng)高脂飼料16周;用體重、Lee’s指數和肥胖度3個指標確定造模成功后,藥物干擾16周,測脂肪重量和體脂比以及剪尾采血法做血常規(guī)檢驗。結果: 喂養(yǎng)高脂飼料16周后,高脂組小鼠的體重和Lee’s指數與空白組小鼠比較有極顯著性差異(P<0.01);肥胖度計算:肥胖率分別是雌鼠為75%、雄鼠為100%;藥物干擾后體重:高劑量組與低劑量組比較有顯著性差異(P<0.05),低劑量組與空白組比較有顯著性差異(P<0.05);脂肪重量:高劑量組與空白組、模型組、陽性給藥組、低劑量組比較有顯著性差異(P<0.05),陽性給藥組和中劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.05);體脂比:高劑量組與空白組、模型組、陽性給藥組、低劑量組比較有顯著性差異(P<0.05),中劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.05);Lee’s指數:6組間沒有顯著性差異;血常規(guī)中單核細胞等9個指標有統計學意義(P<0.05)。結論: 用高脂飼料制作食源性肥胖小鼠模型致肥胖效果極明顯;蒙成藥給喜古訥-3湯對肥胖小鼠的治療有一定的影響。

      食源性肥胖小鼠;蒙成藥;給喜古訥-3湯;血常規(guī)

      肥胖是多種疾病的危險因素,包括心腦血管疾病、2型糖尿病、肌肉骨骼疾病、消化系統疾病、睡眠呼吸暫?;蚝粑系K及某些癌癥等[1],而這些疾病的發(fā)生大多是由慢性炎癥引起的[2]。慢性炎癥是鏈接肥胖、胰島素抵抗和機體代謝紊亂的關鍵機制[3],研究表明,肥胖時脂肪組織為慢性炎癥的主要來源,脂肪組織中巨噬細胞為慢性炎癥的主要效應細胞、炎癥因子的來源[4]。附睪脂肪組織研究還表明巨噬細胞標記物F4/80與脂肪細胞大小和體重有顯著性相關[5]??傊絹碓蕉嗟难芯拷Y果表明,慢性低度炎癥是腹部肥胖的一個關鍵特征。

      血常規(guī)是當前臨床檢測的最常用的方式,主要針對血液中的白細胞、紅細胞、血紅蛋白和血小板等進行檢測,對疾病診斷和治療具有重要的指導意義。隨著現代醫(yī)學的進步和發(fā)展,臨床檢驗結果在疾病的診斷、治療和搶救方面發(fā)揮著重要作用[6]。其中與慢性炎癥有關的指標有淋巴細胞、巨噬細胞、單核細胞、中性粒細胞和嗜酸性粒細胞等。

      蒙成藥給喜古訥-3湯來源于《蒙醫(yī)傳統驗方》[7],具有緩瀉功能,主要用于大便燥結、胃脹、腹痛、閉經。通過研究蒙成藥給喜古訥-3湯治療食源性肥胖小鼠的影響,為臨床使用該藥辨證施治提供實驗依據。

      1 試驗動物、材料及儀器

      1.1 試驗動物:清潔級昆明種小鼠((20±2)g),雌雄各半,100只,由內蒙古大學實驗動物中心提供,合格證號:京東8806M35。

      1.2 實驗材料

      1.2.1 高脂飼料:配方:膽固醇1%、豬膽鹽0.1%、豬油10%、雞蛋黃粉5%、全脂奶粉5%、基礎飼料78.9%。膽固醇:由河南萬嘉生物科技有限公司提供,批號:USP30EP5。豬膽鹽:由廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供,批號:3203091。豬油、雞蛋黃粉、全脂奶粉:由鄭州瑞林食品添加劑有限公司提供?;A飼料:由呼和浩特市金宇保靈生物藥品有限公司提供并制作高脂飼料。

      1.2.2 藥物:試驗藥:蒙成藥給喜古訥-3湯,組份:大黃、堿花、訶子,由濟南人和中藥飲片有限公司統一提供,符合2015年版藥典。陽性對照藥:奧利司他膠囊,由重慶華森制藥有限公司提供,批號:國藥準字H20103180。

      1.2.3 儀器: 血常規(guī)檢測用日本光電工業(yè)株式會社生產的MEX—7222K型全自動血球分析儀。

      2 實驗方法

      2.1 動物分組及造模方法:小鼠隨機分為空白組、模型組、陽性給藥組、蒙成藥給喜古訥-3湯高、中、低3個劑量組,共6組。適應性喂養(yǎng)10天后空白組喂養(yǎng)普通飼料,其他5組喂養(yǎng)高脂飼料16周。用體重、肥胖指數(大于20%視為肥胖成功)和Lee’s指數3個指標判斷制作肥胖模型成功與否并挑出肥胖抵抗體質小鼠,但保證每組的數量。肥胖度和Lee’s指數的公式如下:

      2.2 給藥方法:把大黃、堿花和訶子3種中藥飲片粉碎、過60目篩子,根據蒙藥方劑學里的湯藥做法作出試驗藥[8]后按0.3ml/10g的給藥量灌胃。中劑量定為人的正常用藥量:15g/60kg×10=2.5mg,中劑量的2倍定為高劑量、1/2倍定為低劑量。陽性對照藥按人的正常用藥量換算后灌胃??瞻讓φ战M和模型組灌胃蒸餾水。

      2.3 測血常規(guī)方法:藥物干擾后剪尾采血法取20μL血,用全自動血球分析儀做血常規(guī)檢驗。

      2.4 統計學方法:將收集到的計量資料中制作模型后的體重和Lee’s指數采用SPSS22.0統計軟件進行獨立樣本t檢驗,藥物干擾后的數據組間比較用方差分析和近似方差分析法以及秩和檢驗法,結果用均數和標準差(±s)表示,以P<0.05為有統計學意義。

      3 結果與分析

      3.1 食源性肥胖小鼠模型的建立結果:從表1我們可以看出喂養(yǎng)高脂飼料的5組的體重和Lee's指數與空白組比較都有極顯著性差異(P<0.01),表明高脂飼料制作食源性肥胖小鼠模型致肥胖效果極明顯。

      表1 高脂飼料對小鼠體重和Lee’s指數變化(±s,n=7)

      注:與空白組比較**表示差異極顯著(P<0.01)。

      3.2 藥物干擾后小鼠體重、腹腔脂肪重量、體脂比和Lee’s指數的變化:從表2我們可以看出藥物干擾后體重:高劑量組與低劑量組比較有顯著性差異(P<0.05),低劑量組與空白組比較有顯著性差異(P<0.05);脂肪重量:高劑量組與空白組、模型組、陽性給藥組、低劑量組比較有顯著性差異(P<0.05),陽性給藥組和中劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.05);體脂比:高劑量組與空白組、模型組、陽性給藥組、低劑量組比較有顯著性差異(P<0.05),中劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.05);Lee’s指數:6組間沒有顯著性差異;表明蒙成藥給喜古訥-3湯對肥胖小鼠的體重、脂肪重量和體脂比有一定的影響,對Lee’s指數沒有顯著性影響。

      表2 給藥后體重、脂肪重量、體脂比和Lee’s指數變化(±s,n=7)

      注:*表示方差分析組間比較P<0.05,#表示秩和檢驗組間比較P<0.05,△表示與實驗各組比較P<0.05。

      3.3 蒙成藥給喜古訥-3湯對小鼠血常規(guī)指數的影響:從表3中我們可以看出,藥物干擾后,中性細胞數:高劑量與空白組、模型組、陽性給藥組、中劑量組比較有顯著性差異(P<0.05);淋巴細胞比率:高劑量組與模型組和陽性藥組比較有顯著性差異(P<0.05);血紅蛋白和紅細胞壓積:高劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.05);平均血紅蛋白濃度:高劑量組與中劑量比較有顯著性差異(P<0.05);血小板:高劑量組與空白組比較有顯著性差異(P<0.05);單核細胞比率、單核細胞數和紅細胞分布寬度:高劑量組與其他5組都有顯著性差異(P<0.05);表明蒙成藥給喜古訥-3湯對肥胖小鼠的血常規(guī)指標有一定的影響。

      4 討論

      2013年6月18日,美國醫(yī)學會協會(American Medical Association,AMA) 在其歷史上第一次正式宣稱肥胖為一種疾病,需要醫(yī)學干預措施來預防和治療[9]。2016年4月2日,英國《柳葉刀》雜志刊登的一項大型研究結果表明,現今全球人口首次肥胖者多于羸瘦者而且以原因以不良的生活方式更為重要。不良生活方式指的是不良的飲食和生活習慣,包括運動較少,攝食大量的脂肪和蛋白質,主要是動物性食物,以及氫化油[10]。劉芳等的實驗研究還表明高脂飼料誘導所致的單純性肥胖模型與人類肥胖最為接近,應用最為廣泛,國外研究使用小鼠作為肥胖動物模型時主要選擇C57BL/6J和ICR小鼠,而國內除使用這2種品系小鼠外,還大量使用 KM 小鼠建立肥胖模型[11]。因此在本次試驗中,我們用食源性肥胖小鼠模型來研究蒙成藥給喜古訥-3湯對肥胖的影響,而體重、肥胖度、Lee’s 指數、腹腔脂肪重量、體脂比等指標是判斷肥胖的主要標準。從結果中我們得到喂養(yǎng)高脂飼料小鼠的體重和Lee’s指數與空白組比較有極顯著性差異,肥胖度計算,雌鼠肥胖率為75%、雄鼠肥胖率為100%,但是雌鼠的肥胖率不如雄鼠,原因可能與雌激素或雌性小鼠的生理機能有某種聯系,亦或是其他原因,有待下一步繼續(xù)研討。藥物干擾后我們得出蒙成藥給喜古訥-3湯對肥胖小鼠的體重、腹腔脂肪重量和體脂比有顯著性影響,而對Lee’s 指數沒有顯著性影響,原因可能是給藥時間太長導致空白組小鼠的Lee’s指數隨著體重和體長增大而增大最后與實驗組的Lee’s指數無明顯差異,再者空白組里也有易胖體質小鼠而隨著長時間的自由飲食而體重和體長過分增加導致與模型組小鼠的體質量差別不大。

      表3 給藥后血常規(guī)指數變化(±s,n=7)

      注:*表示方差分析組間比較P<0.05,#表示近似方差分析組間比較P<0.05,△表示與實驗各組比較P<0.05。

      脂肪組織是最先被發(fā)現炎癥與肥胖癥有關的部位[12],而炎癥的一個重要特征就是炎癥組織的免疫細胞如中性粒細胞、嗜酸細胞和巨噬細胞的浸潤[13]。從血常規(guī)檢驗結果中我們得到高劑量組的淋巴細胞比率、血紅蛋白、紅細胞壓積、平均血紅蛋白濃度、血小板等5個指標的指數顯著低于其他5組,而這些指標與肥胖可能沒有直接關系。中性細胞數、單核細胞比率、單核細胞、紅細胞分布寬度等4個指標的指數顯著高于其他5組,這種直接原因可能與給藥后長期腹瀉導致電解質紊亂或者感染引起,而內在機制等原因我們尚未檢測,有待進一步研究。

      肥胖是一種慢性疾病,而藥物治療目前仍是肥胖癥治療的輔助手段并且其安全性也有很大的研究空間。沒有藥物可以產生永久的減肥療效,或許只有長期服藥才能降低或者保持體重。另外不同機理的減肥藥物聯合使用,增加療效,減少各自的副作用,也是未來的發(fā)展方向。面對數量持續(xù)上升的肥胖患者,用藥需求顯然未被滿足,減肥藥的市場仍十分巨大。因此本著蒙成藥給喜古訥-3湯的緩瀉功能做了此次的試驗研究,相信隨著對肥胖機制不斷深入的研究,更多新的藥物靶點會被發(fā)現,更加安全有效的減肥藥物會被研發(fā)和使用。

      [1] 崔家玉,謝曉慧.肥胖癥的藥物治療進展[J].中國新藥雜志,2016(25)2,163-169.

      [2] 詹莉莉,楊志秋,傅正偉.肥胖與慢性炎癥的研究進展[J].中國細胞生物學學報,2011,33(3):297-305.

      [3] 賀強,季瀏.一次急性耐力游泳運動對DIO小鼠脂肪組織巨噬細胞介導的慢性炎癥的影響[J].北京體育大學學報,2016,(39)2:61-68.

      [4] Hotamisligil GS. Inflammation and metabolic disorders[J].Nature,2006,444(7121):860-867.

      [5] CHEN Ying-Ying,YAN Yan,ZHAO Zheng,Bofutsushosan ameliorates obesity in mice through modulating PGC-1αexpression in brown adipose tissues and inhibiting inflammation in white adipose tissues[J].Chinese Journal of Natural Medicines 2016, 14(6): 0449-0456.

      [6] 鄧艷玲,劉又嘉,肖新云,等.抗生素相關性腹瀉對小鼠血常規(guī)的影響[J].湖南農業(yè)科學,2016(10):23-25

      [7] 內蒙古衛(wèi)生廳.內蒙古蒙成藥標準[S].赤峰:內蒙古科學技術出版社,1987:26.

      [8] 巴根那.蒙藥方劑學[M].內蒙古人民出版社,2007:21-22.

      [9]http://www.ama-assn.org/ama/pub/news/news/2013/2013-06-18-new-ama-policies-annual-meeting[EB/OL].(2013-06-18).page.

      [10] 李蕓蕓.這是肥胖的時代也是贏瘦的時代[J].百科知識,2016(10):4-7

      [11] 劉 芳,高南南,楊潤梅,等.不同品系小鼠肥胖模型比較及C57BL/6J小鼠肥胖機制研究[J].中國藥理學通報,2013(3):360-365.

      [12]方思佳,周時高,何頌華,等.單純性肥胖中醫(yī)藥治療進展[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報.2016(4):142-145.

      [13]孫鑫,新鞠消膏方治療單純性肥胖癥的臨床研究及機制探討[J].中國中醫(yī)科學院,2011.5(17):1-98.

      2016年12月8日收稿

      Blood routine examination

      Effect of Mongolian medicine geixigune-3 decoction on obese mice

      Guilisi MENG Yong-mei*

      Inner Mongolia Medical University, Inner Mongolia, Huhhot (010110)

      Objective: Build obese mice model by fat diet,then observe the effect of the Mongolian medicine Geixigune—3Tang on body weight、Lee's index、 obesity、fat weight、body fat ratio and blood routine of the obese mice.Method: First,the obese mice are divided into six groups include the blank control group、the model group、the positive drug control group、the Mongolian medicine Geixigune—3Tang high、medium and low dose group.Second,these groups are all feeded with high fat diets for 16 weeks,except the blank control group,which is feed by normal diet for equal time.Then,make evalution of the model by body weight、Lee's index and obesity to make sure the model are successfully made.Finally,give Geixigune—3Tang to certain groups according to the design for another 16 weeks,then measure fat weight and body fat ratio by tail-cut blood sampling method.Result: After 16 weeks, the body weight and Lee's index of high fat group mice were significantly higher than those of the blank group(P<0.01);The obesity rate was 75% in the female and 100% in the male;After taking Geixigune—3Tang,body weight: the high dose group and low dose group had significant difference(P<0.05),low dose group and the control group had significant difference(P<0.05);fat weight: high dose group and blank group, model group, positive drug group, low dose group had significant differences(P<0.05),positive drug group、medium dose group and model group had significant differences(P<0.05);body fat ratio: the high dose group and blank group, model group,positive drug group,low dose group had significant differences(P<0.05),middle dose group and model group had significant difference(P<0.05);Lee’s index:there was no significant difference between the 6 groups;Blood mononuclear cells and other 9 indicators were statistically significant(P<0.05).Conclusion: The obese mice model can be made successfully with fat diet.The Mongolian medicine has a certain effect on the treatment of obesity mice.

      Diet-induced obesity mice;Mongolian medicine Geixigune—3Tang;

      內蒙古醫(yī)科大學博士啟動基金項目—“三味大黃湯對肥胖小鼠的藥理實驗研究”(YKD2013BQ03); 國家自然基金項目—“利用microRNA芯片技術尋找慢性心衰血瘀證素相關的血清標志物研究”(81260596)。

      R291.2

      A

      1006-6810(2017)02-0061-04

      *通訊作者:孟永梅,博士,教授,碩士研究生導師,從事中蒙醫(yī)藥研究工作。7063@qq.com.

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