紫丁香蘑液體培養(yǎng)基營養(yǎng)成分初探

張梅琳 徐濟責(zé)

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林132101）

紫丁香蘑（Lepista nuda）別名裸口蘑、紫晶蘑。隸屬擔(dān)子菌亞門（Basidiomycotina）、層菌綱（Hymenomycetes）、傘菌目（Agaricales）、白蘑科（Tricholomtaceae）、香蘑屬Lepista。有記載顯示紫丁香蘑與松、榛、山楊等形成外生菌根，是森林生態(tài)系統(tǒng)的必要組成部分[1]。紫丁香蘑主要分布于我國黑龍江、福建、青海、新疆、西藏、山西等地區(qū)，秋季在林中地上群生，有時近叢生或單生。紫丁香蘑不僅味道鮮美，還具有很高的藥用價值，用此菌抗癌試驗效果表明：對小白鼠肉瘤S180的抑制為90%，對艾氏癌的抑制率為100%[2]。該蘑菇含有維生素B1，能調(diào)節(jié)機體糖代謝。李凡[3]等對四種香蘑屬真菌子實體抗氧化活性比較分析，其中發(fā)現(xiàn)了紫丁香蘑子實體提取物對超氧陰離子亦有一定的清除作用。羅正明[4]等對幾種野生食用菌蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值評價中提到紫丁香蘑子實體蛋白質(zhì)含量較高，且氨基酸種類齊全，必需氨基酸占氨基酸總量的百分比為38.82%。

關(guān)于紫丁香蘑液體發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)的研究較少。試驗以菌絲干重為指標通過單因素試驗，篩選紫丁香蘑液體發(fā)酵的最適碳源，最適氮源，最適無機鹽?，F(xiàn)將試驗結(jié)果初報如下。

1材料和方法

1.1供試材料菌種來源：供試紫丁香蘑菌種為吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院保藏，菌種編號：2016010；主要儀器和設(shè)備：電子天平，高壓蒸汽滅菌鍋，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，搖床。培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基（PDA）為馬鈴薯 200 g，葡萄糖20 g，水1000 mL，pH自然。120℃滅菌30 min。種子培養(yǎng)基為馬鈴薯 200 g，蔗糖 20，蛋白胨 4 g，加水 1000 mL，pH自然。

1.2試驗方法

1.2.1 碳源試驗 分別以蔗糖、可溶性淀粉、乳糖、麥芽糖、葡萄糖五種碳源，代替馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中的葡萄糖（試驗為了排除對碳源的影響，故不加入馬鈴薯）。在250 mL的錐形瓶中加入100 mL培養(yǎng)基，冷卻，按5%的量接種。25℃、150 r/min的恒溫搖床培養(yǎng)。每組五個重復(fù)，培養(yǎng)10 d后測定不同碳源培養(yǎng)基中菌絲體的生物量，并測量菌絲球的直徑：用藥勺隨機的將菌絲球從錐形瓶中撈出，放入盛有蒸餾水的干凈平板中，菌絲球處于自然狀態(tài)，用游標卡尺測量菌絲球的直徑。測量完后將菌絲球放入瓶中，然后使用定性濾紙過濾培養(yǎng)液，分離菌絲體和發(fā)酵液。菌絲體經(jīng)蒸餾水沖洗數(shù)次，將沉淀的菌絲體于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（50℃）內(nèi)烘干至恒重，電子天平稱重。數(shù)據(jù)采用Spss19.0進行差異顯著性分析。

1.2.2 氮源試驗 分別以蛋白胨、牛肉膏、尿素、硝酸銨、酵母膏為供試氮源，以馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基為準。以不加氮源為對照。培養(yǎng)基配制、接種、培養(yǎng)、數(shù)據(jù)觀測、記錄以及數(shù)據(jù)的分析方法同碳源試驗。

1.2.3 無機鹽試驗 不同無機鹽試驗：分別以硫酸銅、硫酸鐵、硫酸鎂、硫酸銨、硫酸鋅為供試無機鹽，以馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基為標準，以不加無機鹽為對照。培養(yǎng)基配制、接種、培養(yǎng)、數(shù)據(jù)觀測、記錄以及數(shù)據(jù)的分析方法同碳源試驗。

2 結(jié)果與分析

2.1碳源對紫丁香蘑液體培養(yǎng)菌絲體生長的影響碳源對菌絲體生長的影響如表1。由表1顯示蔗糖為最優(yōu)，日均生物增長量達到0.0115 g。其次葡萄糖、果糖、麥芽糖為碳源菌絲體生物量比較接近，在以可溶性淀粉為碳源的液體培養(yǎng)基中，菌絲體不生長。

表1 不同碳源對紫丁香蘑液體培養(yǎng)菌絲生長的影響

2.2氮源對紫丁香蘑液體培養(yǎng)菌絲體生長影響氮源對菌絲體生長影響見表2。試驗菌株對氮源選擇性廣泛，但菌絲的生長速度存在較大差異，其中以蛋白胨做氮源時菌絲長速最快，長勢最好，日均菌絲生物量達到0.0083 g，明顯優(yōu)于其它氮源。牛肉膏次之，之后依次為酵母膏、硝酸銨。菌絲體在加尿素培養(yǎng)基中，不生長。

表2 不同氮源對紫丁香蘑液體培養(yǎng)菌絲生長的影響

2.3無機鹽對紫丁香蘑液體培養(yǎng)菌絲體生長影響無機鹽對紫丁香蘑菌絲生長影響見表3。由表3可知硫酸銨做無機鹽時菌絲生長速度快，硫酸鎂次之，在加入硫酸銅，硫酸鋅，硫酸鐵液體培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲均不生長。

表3 不同無機鹽對菌絲生長結(jié)果影響

3 小結(jié)與討論

對紫丁香蘑菌絲體液體發(fā)酵培養(yǎng)基營養(yǎng)條件初步篩選結(jié)果表明，最適碳源為蔗糖，最適無機鹽為硫酸鎂，最適氮源為蛋白胨，這一結(jié)果與趙婷[5]紫丁香蘑的菌絲體培養(yǎng)特性及人工馴化研究中的最適碳源最適氮源研究結(jié)論相符。當(dāng)培養(yǎng)基只加入相應(yīng)碳源，排除其他有效碳源干擾的情況下，可以更準確的得到最適碳源。分析幾種氮源，蛋白胨和牛肉膏菌絲生長量相對較多，以尿素為氮源培養(yǎng)基中菌絲不生長，尿素在高溫條件下可以發(fā)生水解，且隨溫度升高，水解更加劇烈。因此在培養(yǎng)基滅菌的過程中使尿素水解，液體培養(yǎng)基呈弱堿性，而大多數(shù)真菌適于偏酸性，因此加入尿素不利于紫丁香蘑菌絲生長。

試驗僅對紫丁香蘑的營養(yǎng)要求做了初步篩選，進一步將對液體發(fā)酵液的pH、溫度、光照條件做進一步研究。試驗為紫丁香蘑的液體菌種培養(yǎng)和菌絲的發(fā)酵工藝提供參考。