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    藏藥“蒂達(dá)”6種原植物抗慢性肝損傷作用比較研究

    2017-05-22 06:49:38郭永強(qiáng)楊曉泉夏從龍
    大理大學(xué)學(xué)報 2017年4期
    關(guān)鍵詞:獐牙菜唐古特虎耳草

    郭永強(qiáng),沈 磊,楊曉泉,夏從龍

    (大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院,云南大理 671000)

    藏藥“蒂達(dá)”6種原植物抗慢性肝損傷作用比較研究

    郭永強(qiáng),沈 磊,楊曉泉,夏從龍*

    (大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院,云南大理 671000)

    目的:比較藏藥“蒂達(dá)”主要來源青葉膽等6種藥用原植物對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)效應(yīng)。方法:采用四氯化碳(CCl4)造成小鼠化學(xué)性肝損傷模型,檢測血清肝損傷指標(biāo)來比較6種藥用植物的保肝作用。結(jié)果:與模型組相比,6種藥用植物均能顯著性降低小鼠血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活性,升高總蛋白(TP)及減少總膽紅素(TBI)的含量。與等劑量青葉膽相比,川西獐牙菜、橢圓葉花錨、印度獐牙菜、紫紅獐牙菜和唐古特虎耳草降低ALT、AST、TBI和升高TP的能力差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:青葉膽和“蒂達(dá)”其他來源的5種藥用植物對于化學(xué)性肝損傷的保護(hù)效應(yīng)差異不顯著。

    藏藥“蒂達(dá)”;青葉膽;CCl4;保肝效應(yīng)

    藏藥“蒂達(dá)”是一類治療肝膽疾病藥物的總稱,以干燥全草入藥,具有清熱利膽、強(qiáng)心、舒肝健胃、解毒等功效,是治療熱癥、肝膽病及血液病的常用藥物〔1〕?!暗龠_(dá)”是藏茵陳片(膠囊)、肝泰舒膠囊、急肝寧、乙肝寧A、B片、藏降脂膠囊、流感丸等多種中成藥的原料〔2-3〕。但是“蒂達(dá)”存在品種繁多,基原復(fù)雜,臨床用藥混亂,沒有系統(tǒng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等問題,根據(jù)前期在云南、四川、西藏等地的民間、藥廠和藥材市場調(diào)查得知,蒂達(dá)主要來源于龍膽科獐牙菜屬植物,目前市場上流通的主流品種為:青葉膽Swertia mileensis、印度獐牙菜Swertia chirayita(Roxb.ex Flemi)Karsten、川西獐牙菜Swertia mussotii、紫紅獐牙菜Swertia punicea、橢圓葉花錨Halenia elliptica和唐古特虎耳草Saxifraga tangutica 6個種,其中青葉膽為自1974年版及以后的歷版中國藥典收載。本研究選擇上述“蒂達(dá)”6種藥用原植物進(jìn)行抗慢性肝損傷作用比較研究,為擴(kuò)大資源、保障臨床用藥安全提供理論依據(jù)。

    1 材料與儀器

    1.1實驗動物昆明種小鼠180只,體重16~22 g,雌雄各半,由昆明醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供,動物許可證號:SCXK(滇)2011-0004。

    1.2儀器冷凍干燥機(jī)(FD-1C-80,北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-2000,上海亞榮生化儀器廠);循環(huán)水式真空磊(SHZ-D(Ⅲ),鞏義市矛華儀器有限責(zé)任公司);3-15型臺式高速離心機(jī)(Sigma公司)。

    1.3藥品及試劑四氯化碳(CCl4)分析純(汕頭市西隴化工廠有限公司);聯(lián)苯雙酯(浙江萬邦藥業(yè)股份有限公司,批號:A02131017)。

    除唐古特虎耳草來自西藏外,其他5種藥材均來自云南,由大理大學(xué)夏從龍教授鑒定。將藥用植物粉碎,稱取粗粉1 kg,蒸餾水熱浸提取5次,過濾,合并濾液并離心,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮上清液,冷凍干燥,得到藥物干燥粉末,密封保存。青葉膽1 g干燥粉末相當(dāng)于6.0 g生藥,紫紅獐牙菜1 g干燥粉末相當(dāng)于6.5 g生藥,橢圓葉花錨1 g干燥粉末相當(dāng)于7.0 g生藥,唐古特虎耳草1 g干燥粉末相當(dāng)于7.5 g生藥,川西獐牙菜1 g干燥粉末相當(dāng)于7.0 g生藥,印度獐牙菜1 g干燥粉末相當(dāng)于5.5 g生藥。給藥前用生理鹽水配制成所需濃度,藥物劑量以g生藥/kg表示。以上6種蒂達(dá)高、低劑量組劑量分別為3.0、1.5 g生藥/kg。

    2 方法

    2.1分組及實驗方法將180只小鼠按體重隨機(jī)分15組(每組雌雄各半),分別為正常組、模型組,陽性藥聯(lián)苯雙酯組(0.1 g/kg),青葉膽、紫紅獐牙菜、橢圓葉花錨、唐古特虎耳草、川西獐牙菜、印度獐牙菜的高(3.0 g/kg)、低劑量(1.5 g/kg)組。除正常組給等體積生理鹽水外,其余各組均皮下注射20%CC140.02 mL/10 g,每3 d 1次,連續(xù)5周。造模同時給藥,除正常組和模型組灌胃等體積生理鹽水外,其余各組灌胃給予相應(yīng)的藥物,每天1次,連續(xù)5周。末次給藥后對各組小鼠禁食不禁水,24 h后眼內(nèi)眥靜脈叢取血,靜置4 h后3 000 r/min離心10 min,分離血清。將血清送至大理白族自治州人民醫(yī)院檢驗谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總蛋白(TP)及總膽紅素(TBI)。

    2.2統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,數(shù)據(jù)用(xˉ±s)表示,計數(shù)資料組間差異比較使用非參數(shù)t檢驗。

    3 結(jié)果

    對于CCl4誘導(dǎo)的小鼠慢性肝損傷實驗中,模型組ALT、AST含量明顯升高,與正常組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),說明造模成功。與模型組比較,陽性藥組、青葉膽、紫紅獐牙菜、橢圓葉花錨、唐古特虎耳草、川西獐牙菜、印度獐牙菜6種藥用原植物各高、低劑量組的ALT、AST含量均明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與陽性藥組AST含量進(jìn)行比較,橢圓葉花錨3.0 g/kg組含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),橢圓葉花錨1.5 g/kg組和其他5種蒂達(dá)高、低劑量組的含量差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與陽性藥組ALT含量進(jìn)行比較,青葉膽3.0 g/kg組、橢圓葉花錨1.5 g/kg組、川西獐牙菜3.0 g/kg組和印度獐牙菜1.5 g/kg組含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),紫紅獐牙菜1.5 g/kg組、3.0 g/kg組、橢圓葉花錨3.0 g/kg組、唐古特虎耳草1.5 g/kg組和3.0 g/kg組的含量差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),青葉膽1.5 g/kg組、川西獐牙菜1.5 g/kg組和印度獐牙菜3.0 g/kg組含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與青葉膽1.5 g/kg組ALT、AST含量進(jìn)行比較,紫紅獐牙菜1.5 g/kg組和唐古特虎耳草1.5 g/kg組ALT、AST含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);橢圓葉花錨1.5 g/kg組和印度獐牙菜1.5 g/kg組ALT含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);川西獐牙菜1.5 g/kg組AST含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與青葉膽3.0 g/kg組ALT含量進(jìn)行比較,紫紅獐牙菜3.0 g/kg組、橢圓葉花錨3.0 g/kg、唐古特虎耳草3.0 g/kg組、川西獐牙菜3.0 g/kg組、印度獐牙菜3.0 g/kg組ALT含量差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);與青葉膽3.0 g/kg組AST含量進(jìn)行比較,橢圓葉花錨3.0 g/kg組、唐古特虎耳草3.0 g/kg組、川西獐牙菜3.0 g/kg組、印度獐牙菜3.0 g/kg組AST含量差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P< 0.01)。紫紅獐牙菜3.0 g/kg組AST含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    對總蛋白(TP)的影響,與正常組比較,模型組TP含量降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與模型組比較,陽性藥組、青葉膽、紫紅獐牙菜、橢圓葉花錨、唐古特虎耳草、川西獐牙菜、印度獐牙菜6種藥用原植物各高、低劑量組的TP含量均明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與陽性藥組TP含量進(jìn)行比較,青葉膽1.5 g/kg組、紫紅獐牙菜3.0 g/kg組、橢圓葉花錨1.5 g/kg、川西獐牙菜1.5 g/kg組、印度獐牙菜1.5 g/kg組的TP含量差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),青葉膽3.0 g/kg組和唐古特虎耳草1.5 g/kg組TP含量差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),紫紅獐牙菜1.5 g/kg組、橢圓葉花錨3.0 g/kg組、唐古特虎耳草3.0 g/kg組、川西獐牙菜3.0 g/kg組和印度獐牙菜3.0 g/kg組TP含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與青葉膽1.5 g/kg組的TP含量進(jìn)行比較,紫紅獐牙菜、橢圓葉花錨、唐古特虎耳草1.5 g/kg組TP含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),川西獐牙菜、印度獐牙菜1.5 g/kg組TP含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與青葉膽3.0 g/kg組TP含量進(jìn)行比較,紫紅獐牙菜、唐古特虎耳草、川西獐牙菜、印度獐牙菜3.0 g/kg組TP含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),橢圓葉花錨3.0 g/kg組TP含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    CCl4損傷小鼠模型組血液中TBI含量與正常組相比明顯升高(P<0.01),橢圓葉花錨3.0 g/kg組與模型組相比,TBI含量顯著降低(P<0.01),其他組TBI含量與模型組TBI含量相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P> 0.05),但TBI含量下降。與陽性藥組TBI含量進(jìn)行比較,青葉膽1.5 g/kg組、紫紅獐牙菜1.5 g/kg組、紫紅獐牙菜3.0 g/kg組、橢圓葉花錨1.5 g/kg組、川西獐牙菜1.5 g/kg組、川西獐牙菜3.0 g/kg組、唐古特虎耳草1.5 g/kg組、唐古特虎耳草3.0 g/kg組、印度獐牙菜1.5 g/kg組和印度獐牙菜3.0 g/kg組的TBI含量差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),橢圓葉花錨3.0 g/kg組TBI含量相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),青葉膽3.0 g/kg組TBI含量相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P> 0.05)。青葉膽高、低劑量組與紫紅獐牙菜、橢圓葉花錨、唐古特虎耳草、川西獐牙菜、印度獐牙菜5種藥用原植物各高低劑量組的TBI含量相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    表1 “蒂達(dá)”6種藥用植物對小鼠慢性肝損傷指標(biāo)的影響

    表1 “蒂達(dá)”6種藥用植物對小鼠慢性肝損傷指標(biāo)的影響

    注:與正常組比較**P<0.01;與模型組比較#P<0.05,##P<0.01;與青葉膽1.5 g/kg組比較□P<0.05,□□P<0.01;與青葉膽3.0 g/kg組比較●●P<0.01;與陽性藥組比較▲P<0.05,▲▲P<0.01。

    組別正常組模型組陽性藥組青葉膽組低劑量組青葉膽組高劑量組紫紅獐牙菜低劑量組紫紅獐牙菜高劑量組橢圓葉花錨低劑量組橢圓葉花錨高劑量組唐古特虎耳草低劑量組唐古特虎耳草高劑量組川西獐牙菜低劑量組川西獐牙菜高劑量組印度獐牙菜低劑量組印度獐牙菜高劑量組TBI/(μmol/L)1.17±0.38 11.05±2.71**8.27±1.48#10.53±2.22▲9.71±2.31 10.84±2.29▲10.74±3.04▲10.11±1.91▲5.84±0.57##▲▲10.40±3.00▲10.34±1.42▲10.88±2.51▲10.32±1.69▲10.74±5.41▲10.11±2.32▲ALT/(U/L)135.00±23.69 10 778.89±2 474.60**5 045.45±861.19##5 862.00±1 222.50##6 978.08±920.43##▲9 047.30±933.53##□□▲▲7 362.00±749.04##●●▲▲6 240.01±630.14##□▲2 606.36±639.80##●●▲▲9 738.57±878.02##□□▲▲8 520.00±303.81##●●▲▲5 684.44±879.22##4 195.71±1 244.59##●●▲6 768.33±1 802.16##□▲4 900.00±1 683.07##●●AST/(U/L)34.00±5.16 13 108.75±2 766.30**1 551.82±342.75##6 396.36±1 208.46##▲▲8 359.96±1 281.43##▲▲10 051.54±1 303.21##□□▲▲8 630.00±1 267.32##▲▲6 981.25±1 434.67##▲▲2 573.00±297.99##●●▲11 172.86±884.11#□□▲▲9 006.00±948.20##●●▲▲5 326.67±1 215.71##□□▲▲4 024.28±973.87##●●▲▲6 795.00±1 846.25##▲▲4 297.50±1 131.62##●●▲▲TP/(g/L)76.57±5.84 55.80±2.44**68.13±2.49##61.98±5.27##▲58.12±8.01##▲▲72.41±7.97##□□73.99±6.77##●●▲73.38±5.39##□□▲59.45±3.88##58.63±17.47##□□▲▲65.54±3.99##●●63.00±4.08##□▲64.69±2.57##●●63.32±5.04##□▲66.76±4.37##●●

    4 討論

    CCl4誘導(dǎo)的肝損傷是廣泛應(yīng)用于肝病防治藥物篩選的經(jīng)典模型〔2-4〕。化學(xué)性肝損傷導(dǎo)致肝細(xì)胞受損,使肝細(xì)胞膜通透性增強(qiáng),導(dǎo)致存在于肝細(xì)胞內(nèi)的ALT,AST通過細(xì)胞膜進(jìn)入血液的量大大增加。所以血清中轉(zhuǎn)氨酶水平的高低是反應(yīng)肝損傷的敏感指標(biāo),可直接反應(yīng)肝受損傷程度〔5〕。實驗中,在成功復(fù)制化學(xué)性肝損傷的病理模型上,以藥典中規(guī)定的藥用植物——青葉膽為參照,評價其他5種藥用原植物同青葉膽的藥效等同性和差異性?!暗龠_(dá)”6種植物藥可以降低由CCl4導(dǎo)致的血液中ALT,AST升高的水平。1.5 g/kg組川西獐牙菜對ALT、AST的降酶作用效果好于青葉膽。3.0 g/kg組橢圓葉花錨、川西獐牙菜、印度獐牙菜對ALT、AST的降酶作用效果好于青葉膽。青葉膽1.5 g/kg組、川西獐牙菜1.5 g/kg組和印度獐牙菜3.0 g/kg組對于ALT的降酶作用效果和陽性藥相當(dāng)。

    肝臟也是蛋白質(zhì)合成和分解代謝的重要場所,肝臟受損時,由于其結(jié)構(gòu)和功能破壞,蛋白質(zhì)含量也受影響。血清總蛋白(TP)是血清白蛋白與球蛋白的總和,肝功能損傷可導(dǎo)致肝臟合成蛋白質(zhì)的能力下降,引起低蛋白血癥〔6-7〕。陽性藥聯(lián)苯雙酯可以升高TP的含量。6種藥用原植物均有升高TP的趨勢。表明6種藥用原植物在促進(jìn)肝臟蛋白合成中起到了一定的作用。

    綜上所述,本實驗研究青葉膽和“蒂達(dá)”其他5種藥用原植物的保肝作用在化學(xué)性肝損傷的保肝效應(yīng)上差異不顯著,由于本研究只用了一個肝損傷模型觀察,是否在其他模型上作用有差異,有待進(jìn)一步研究。

    〔1〕文檢,張藝,劉川,等.藏藥“蒂達(dá)”的基原、藥性及功效的考證〔J〕.中國中藥雜志,2016,41(4):609-612.

    〔2〕鐘國躍,王昌華,劉翔,等.常用藏藥“蒂達(dá)(藏茵陳)”的資源與使用現(xiàn)狀調(diào)查〔J〕.世界科學(xué)技術(shù)(中醫(yī)藥現(xiàn)代化),2010(1):122-128.

    〔3〕王偉晶,白亞東,陶勁.藏藥獐牙菜屬植物的研究進(jìn)展〔J〕.青海科技,2011(1):18-20.

    〔4〕黃鐵軍,余瓊?cè)A,戴列軍.蝦青素對四氯化碳誘導(dǎo)的慢性肝損傷大鼠的保護(hù)作用〔J〕.實用肝臟病雜志,2014,17(4):404-407.

    〔5〕張東梅,黃欣,閆春雷,等.實驗性肝損傷模型的研究進(jìn)展〔J〕.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2013,33(22):1871-1874.

    〔6〕WEN T,GUAN L,ZHANG Y L,et al.Dynamic changes of heme oxygenase-1 and carbon monoxide production in acute liver injury induced by carbon tetrachloride in rats〔J〕.Toxicology,2006,228(1):51-57.

    〔7〕盧冰賢,陳淑貞,周云英.血清前白蛋白檢測在肝臟疾病診斷中的應(yīng)用〔J〕.中國校醫(yī),2011,25(5):373-374.

    Comparative Study on Six Kinds of Medicinal Plants in Tibetan Medicine"Dida"on Preventing Chronic Hepatic Injury

    Guo Yongqiang,Shen Lei,Yang Xiaoquan,Xia Conglong*
    (College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China)

    Objective:To compare the protective effect of six kinds of medicinal plants in Tibetan medicine"Dida"on chemical hepatic injury.Methods:Carbon tetrachloride(CCl4)was used to cause chemicalhepatic injury in mice to form the modelgroup.The serum hepatic injury index was used to detected the hepatoprotective effect of six medicinal plants of liver injury induced by serum indicators to compare the effect of 6 species of medicinal plants.Results:Compared with the model group,six medicinal plants can significantly reduce serum alanine transaminase(ALT)and aspartate aminotransferase(AST)activity,and increase total protein(TP)and totalbilirubin reduction(TBI)content.Compared with equivalentdose Swertia mileensis,Swertia chirayita(Roxb.ex Flemi)Karsten,Swertia mussotii,Swertia punicea,Halenia elliptica,Saxifraga tangutica reduced ALT,AST,TBI and increased TP without significant difference.Conclusion:Hepatoprotective effect on chemical hepatic injury of Swertia mileensis and other five kinds of medicinalplants in"Dida"had no significantdifference.

    Tibetan medicine"Dida";S wertia mileensis;CCl4;hepatoprotective effect

    R285

    A

    2096-2266(2017)04-0016-04

    10.3969/j.issn.2096-2266.2017.04.005

    (責(zé)任編輯 李 楊)

    國家自然科學(xué)基金資助項目(81260677)

    2016-11-29

    2016-12-20

    郭永強(qiáng),碩士研究生,主要從事天然藥物資源調(diào)查與品質(zhì)評價研究.

    *通信作者:夏從龍,教授.

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