胎兒染色體疾病產(chǎn)前篩查中應(yīng)用胎兒頸項透明層聯(lián)合產(chǎn)前無創(chuàng)DNA檢測的臨床應(yīng)用價值考察

林美群??陳瑞妍??謝海燕

[摘要] 目的 探討胎兒頸項透明層聯(lián)合產(chǎn)前無創(chuàng)DNA檢測在胎兒染色體疾病產(chǎn)前篩查中的應(yīng)用。方法 以我院婦產(chǎn)科于2012年1月～2016年1月期間收治的3725例產(chǎn)前篩查孕婦為研究對象，依據(jù)接受的檢測方法分為NT組和聯(lián)合組，NT組1860例，聯(lián)合組1865例，NT組進(jìn)行超聲檢測NT厚度檢查，聯(lián)合組采用超聲測定NT厚度后再進(jìn)行無創(chuàng)DNA檢測，比較兩組胎兒染色體異常檢測結(jié)果和錯誤率。結(jié)果 NT組檢測結(jié)果中NT<2.5mm的胎兒共計1741例，其中有7例通過羊水穿刺檢測到染色體異常；NT≥2.5mm胎兒的共計119例，其中58例通過羊水穿刺檢測為染色體異常；NT組測檢測錯誤率為3.71%。聯(lián)合組檢測發(fā)現(xiàn)21三體綜合征28例，18三體綜合征17例，13三體綜合征14例，性染色體異常8例，與羊水穿刺檢測結(jié)果比較，共發(fā)生3例錯誤，檢測錯誤率0.16%。聯(lián)合組檢測錯誤率顯著低于NT組，兩組檢測錯誤率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=60.66，P<0.05）。結(jié)論 頸項透明層厚度超聲檢查聯(lián)合產(chǎn)前無創(chuàng)DNA檢測在胎兒染色體疾病產(chǎn)前篩查中能顯著降低錯誤率，提高檢出率，安全有效，值得臨床推廣。

[關(guān)鍵詞] 染色體疾??；頸項透明層；無創(chuàng)DNA檢測；臨床應(yīng)用

[中圖分類號] R714.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）05-101-04

[Abstract] Objective To investigate the application of fetal nuchal translucency combined with non-invasive DNA detection on the prenatal screening for chromosomal diseases. Methods 3725 cases of pregnant women from Jan.2012 to Jan.2016 were taken as research object，and they were divided into NT group with 1860 cases and combination group with 1865 cases according to the test methods.patients in NT group were tested by ultrasonic detection of NT thickness，and patients in combination group were tested by fetal nuchal translucency combined with non-invasive DNA detection.The result and error rate of the two groups were compared. Results In the NT group，1741 cases of NT<2.5mm and 7 cases were abnormal according to the amniocentesis.119 cases NT≥2.5mm and 58 cases were abnormal according to the amniocentesis.The error rate was 3.71%.In the combination group，there were 21 cases of Downs syndrome，18 cases of trisomy 18 syndrome，13 cases of trisomy 13 syndrome and 8 cases of sex chromosome abnormality，and 3 cases occurred to be wrong according to the amniocentesis.The error rate was 0.16%.The error rate of combination group were significantly lower than that of NT group（χ2=60.66，P<0.05）. Conclusion Fetal nuchal translucency combined with non-invasive DNA detection can effectively decrease the error rate and increase the detection rate in the prenatal screening for chromosomal diseases.It is safe and effective，and it is worth to be promoted.

[Key words] Chromosomal diseases；Fetal nuchal translucency；Non-invasive DNA detection；Clinical application

因染色體數(shù)目或者結(jié)構(gòu)發(fā)生異常而導(dǎo)致的相關(guān)疾病稱為染色體疾病。人類一共有46條染色體，染色體疾病是由于胎兒某個染色體上的某個基因發(fā)生突變或增減，進(jìn)而影響了整個基因的表達(dá)，使患者生長發(fā)育、智力發(fā)育受阻或者正常生理功能受損[1]。常見的染色體疾病包括唐氏綜合癥（21三體

綜合征，Downs syndrome）、13三體綜合征（trisomy 13 syndrome）、18三體綜合征（trisomy 18 syndrome）以及性染色體異常等[2]。這些染色體異常患者大部分患者在幼年夭折，少部分存活的患者不僅生長發(fā)育遲緩造成嚴(yán)重生理缺陷，還會影響大腦發(fā)育造成智力低下，并同時伴有其他多種并發(fā)癥，壽命顯著低于常人[3]。目前對于這類染色體疾病治療困難，在妊娠期對產(chǎn)婦進(jìn)行產(chǎn)前篩查是最有效的預(yù)防措施[4]。胎兒頸項透明層（nuchal translu-cency，NT）是胎兒在妊娠早期和中期時期頸部的淋巴囊和頸靜脈竇相通，導(dǎo)致淋巴液聚集，形成在超聲波下可見的淋巴液暗區(qū)，一般情況NT會隨著妊娠周期逐漸消失[5]。目前研究認(rèn)為頸項透明層厚度與染色體異常有密切聯(lián)系，臨床上常通過對NT厚度的檢測來指導(dǎo)染色體異常胎兒的篩查[6]。許多研究報道隨著NT厚度的增加，胎兒患染色體異常的概率也隨之增加，但是目前尚不能夠僅通過對NT厚度的檢測對胎兒是否發(fā)生染色體異常做出確切的判斷，一般需結(jié)合DNA的檢測來進(jìn)一步確定[7]。產(chǎn)前無創(chuàng)DNA檢測是一種有效的檢測方法，主要通過對孕婦血漿中游離的核苷酸片段進(jìn)行檢測，與超聲檢測相結(jié)合，能有效提高診斷率。本研究采用頸項透明層超聲檢測聯(lián)合無創(chuàng)DNA檢測技術(shù)對產(chǎn)前染色體異常胎兒進(jìn)行篩查，有效提高了檢出率，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院婦產(chǎn)科于2012年1月～2016年1月期間收治的3725例產(chǎn)前篩查孕婦，依據(jù)接受的檢測方法分為NT組和聯(lián)合組，NT組1860例，聯(lián)合組1865例，NT組進(jìn)行超聲檢測NT厚度檢查，聯(lián)合組采用超聲測定NT厚度后再進(jìn)行無創(chuàng)DNA檢測。其中NT組產(chǎn)婦年齡24.1～37.6歲，平均（27.1±2.5）歲；孕周11～（13+6）周，平均（12.6±1.3）周；經(jīng)產(chǎn)婦742例，初產(chǎn)婦1118例；胎兒頭臀長44.1～83.7mm。聯(lián)合組產(chǎn)婦年齡24.4～38.0歲，平均（27.4±2.3）歲；孕周11～13+6周，平均（12.5±1.4）周；經(jīng)產(chǎn)婦746例，初產(chǎn)婦1119例；胎兒頭臀長44.0～83.5mm。所有產(chǎn)婦均為單胎妊娠且已獲得產(chǎn)婦及家屬知情同意書，排除以下情況：（1）雙胎以及多胎妊娠產(chǎn)婦；（2）患有染色體疾病的產(chǎn)婦；（3）在治療前接受過干細(xì)胞移植、異體輸血的產(chǎn)婦；（4）存在精神疾病、不配合的產(chǎn)婦。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)進(jìn)行，兩組產(chǎn)婦年齡、產(chǎn)次、孕周、胎兒頭臀長等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性（P>0.05）。

1.2 方法

NT組采用Aloka（SSD-5500）超聲儀進(jìn)行經(jīng)腹超聲檢測，操作以英國胎兒醫(yī)學(xué)基金會（fetal medicine foundation，F(xiàn)MF）相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，掃描獲得胎兒的正中矢狀切面影像，探頭頻率為3.5MHZ。胎兒自然俯屈，面向探頭，以獲得其頸項處透明層的清晰影像資料并在放大后進(jìn)行測量，重復(fù)測量三次，以NT<2.5mm為正常范圍，NT≥2.5mm視為頸項透明層過厚[8-9]。聯(lián)合組進(jìn)行NT厚度檢測，方法同NT組，再進(jìn)行無創(chuàng)DNA檢測。抽取產(chǎn)婦10mL外周血并置于EDTA抗凝管中，進(jìn)行血漿分離，然后采用高通量基因組測序法進(jìn)行DNA提取和檢測，檢測試劑盒生產(chǎn)廠家為深圳華大基因研究員，測序操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，并將測序結(jié)果與人類參考基因相對照，正常范圍為-3.0～3.0[10]。染色體確診：于16～22孕周期間對兩組產(chǎn)婦中檢查結(jié)果顯示胎兒有染色體疾病高風(fēng)險的產(chǎn)婦進(jìn)行羊膜腔穿刺進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)和核型分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

本研究的數(shù)據(jù)分析采用SPSS19.0軟件進(jìn)行，計數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NT組胎兒頸項透明層厚度檢測與羊水穿刺染色體檢測結(jié)果比較

NT檢測以NT厚度小于2.5mm視為正常范圍，大于等于2.5視為異常。NT組檢測結(jié)果中NT<2.5mm的胎兒共計1741例，其中有7例通過羊水穿刺檢測到染色體異常；在2.5mm≤NT<3.0mm范圍內(nèi)，有26例胎兒羊水穿刺染色體檢測正常，在3.0mm≤NT<5.0mm范圍內(nèi)，有28例胎兒羊水穿刺染色體檢測正常，在5.0mm≤NT范圍內(nèi)，有7例羊水穿刺染色體檢測正常；NT≥2.5mm胎兒的共計119例，其中58例為染色體異常。NT組測檢測錯誤率為3.71%。見表1。

2.2 聯(lián)合組聯(lián)合檢驗結(jié)果與羊水穿刺染色體檢驗結(jié)果比較

聯(lián)合組檢測結(jié)果：21三體綜合征28例，18三體綜合征17例，13三體綜合征14例，性染色體異常8例，與羊水穿刺檢測結(jié)果比較，共發(fā)生3例錯誤，檢測錯誤率0.16%；對NT組和聯(lián)合組檢測錯誤率進(jìn)行比較，聯(lián)合組檢測錯誤率為0.16%，低于NT組3.71%，兩組檢測錯誤率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=60.66，P<0.05）。見表2。

3 討論

頸項層厚度檢測與染色體異常的關(guān)系最早由Nicolaides提出，認(rèn)為當(dāng)NT的厚度超過2.5mm時NT 厚度越高胎兒發(fā)生染色體異常疾病的風(fēng)險越高[11]。NT厚度檢測一般是在11～13+6孕周時采用超聲波，對胎兒保持自然姿勢時頸項處的皮膚之間的區(qū)域進(jìn)行檢測。但是NT檢測對操作要求較高，需保證胎兒的頭臂長在45～84mm范圍內(nèi)，胎兒必須占據(jù)影像的3/4以上，須避免胎兒臍帶纏繞，而且要結(jié)合高分辨率的超聲波檢測器和精確的游標(biāo)尺[12-13]。但是NT厚度檢測的影響因素眾多，臨床發(fā)現(xiàn)有些胎兒的染色體正常，NT厚度卻發(fā)生異常，這可能與胎兒的靜脈壓過高導(dǎo)致淋巴液回流困難而在頸項部產(chǎn)生積液有關(guān)[14]，另有的胎兒染色體正常但檢測時顯示NT厚度超過2.5mm卻在后續(xù)發(fā)育中透明層自然減薄或消失，這可能與胎兒發(fā)育過程中淋巴系統(tǒng)的完善相關(guān)，加強(qiáng)了淋巴液的循環(huán)和排泄[15]。所以NT檢測可以為臨床胎兒染色體檢測提供指導(dǎo)，卻不能僅通過NT厚度的檢測來判斷胎兒的是否發(fā)生染色體異常。

當(dāng)超聲提示胎兒可能存在染色體疾病風(fēng)險時，臨床一般采用血清學(xué)檢驗來進(jìn)一步確診[16]。傳統(tǒng)的血清學(xué)篩查相對羊水檢測更加簡便和安全，而且價格便宜，適用于進(jìn)一步確診也適用于大規(guī)模人群篩查[17]。但傳統(tǒng)的血清檢測方法存在假陽性高的缺點，而羊水檢測又有導(dǎo)致胎兒流產(chǎn)的風(fēng)險[18]，產(chǎn)前無創(chuàng)DNA檢測則是通過對產(chǎn)婦外周靜脈血中胎兒的游離DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過高通量檢測技術(shù)對擴(kuò)增片段進(jìn)行測序，并與正常人基因進(jìn)行比對，以確定是否存在異常基因和相關(guān)染色體疾病，準(zhǔn)確率高，對產(chǎn)婦安全無影響[19]。高明雅[20]采用產(chǎn)前無創(chuàng)DNA技術(shù)對934例孕婦產(chǎn)前檢查，發(fā)現(xiàn)該法對于非整倍染色體的檢驗具有非常高的靈敏度和特異度，耗時短，無創(chuàng)傷。本研究采用胎兒頸項曾厚度檢測聯(lián)合產(chǎn)前無創(chuàng)DNA檢測發(fā)現(xiàn)能有效提高檢出率，降低錯誤率，對于胎兒染色體的產(chǎn)前篩查有重要應(yīng)用。

采用超聲診斷胎兒頸項層厚度與產(chǎn)前無創(chuàng)DNA聯(lián)合檢驗?zāi)苡行岣弋a(chǎn)前的胎兒染色體疾病篩查檢出率，但是無創(chuàng)DNA技術(shù)價格偏高，需要相應(yīng)的技術(shù)支持，對于相對偏遠(yuǎn)的基層醫(yī)院，建議臨床應(yīng)用首先對NT厚度進(jìn)行篩查，再進(jìn)一步對于可疑對象進(jìn)行無創(chuàng)DNA檢測，減少患有染色體異常疾病胎兒的出生率。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 黃燕儀.染色體疾病的產(chǎn)前診斷[J].中華臨床醫(yī)師雜志，2012，6（11）：2853-2856.

[2] American College of Obstericians Gynecologists Committee on Geneti.Committe Opinion No.545：noninvasive prenatal testing for fetal aneuploidy[J].Obstet Gynecol，2012，120（6）：1532-1534.

[3] Liao C，Yin AH，Peng CF，et al.Noninvasive prenatal diagnosis of common aneuploidies by semiconductor sequencing[J].Proc Natl Acad Sci USA，2014，111（20）：7415-7420.

[4] Alamillo CM，Krantz D，Evans M，et al.Nearly a third of abnormalities found after first-trimester screening are different than expected：10-year experience from a single center[J].Pranat Diagn，2013，33（3）：251-256.

[5] 陳曉薇，王麗娜.NT值異常與胎兒心臟畸形及染色體異常之間的相關(guān)性[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2012，11（13）：1047-1049.

[6] 劉麗華，盧小青，劉聰慧，等.胎兒頸項透明層厚度聯(lián)合血清學(xué)檢測在唐氏綜合征篩查中的應(yīng)用[J].中國婦幼保健，2013，28（17）：2715-2717.

[7] 馬婷婷，劉華平，侯朝暉，等.無創(chuàng)DNA檢測技術(shù)對胎兒染色體非整倍體疾病的篩查效果[J].空軍醫(yī)學(xué)雜志，2015，31（4）：235-239.

[8] Song K，Musci TJ，Caughy AB.Clinical utility and cost of non-invasive prenatal testing with cf DNA analysis in high-risk women based on a US population[J].J Matern Fetal Neonatal Med，2013，26（12）：1180-1185.

[9] 鄧洪梅，山丹.孕婦超聲下胎兒頸項透明層篩查的臨床分析[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志，2013，14（5）：421-423.

[10] 李玉芝，任景慧，林琳華，等.大規(guī)模并行基因組測序技術(shù)應(yīng)用于無創(chuàng)產(chǎn)前診斷染色體非整倍體的研究[J].華中科技大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2012，41（4）：475-480.

[11] Xu Z，Li B，Liao C，et al.Results of prenatal screening for fetal chromosome abnormality during the first trimester pregnancy in Guangzhou[J].US National Library of Medicine National Institutes of Health，2014，31（5）：632-635.

[12] Srinivasan A，Bianchi DW，Huang H，et a1.Noni nvasive detection of fetal subch room some abnormalities via deep sequencing of maternal plasma[J].Am J Hum Genet，2013，92（2）：167-176.

[13] 周林.胎兒頸項透明層在產(chǎn)前超聲篩查中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2014，12（12）：163-164.

[14] Laicolaides GH.Fetal translucency ultrasound screening for chromosomal defects in first trimester of pregency[J].BMJ，2013，304（6831）：867-869.

[15] Yu SC，Jiang P，Choy KW.Noninvasive prenatal molecular karyotyping from matermal plasma[J].Plos One，2014，8（4）：960-968.

[16] 喻瓊，鄧志群.利用孕婦血漿中胎兒游離DNA進(jìn)行無創(chuàng)性產(chǎn)前基因診斷的研究進(jìn)展[J].實驗和檢驗醫(yī)學(xué)，2012，30（1）：1-3.

[17] Jiang F，Ren J，Chen F，et a1.Noninvasive Fetal Tr isomy（NIFTY）test：an advanced noninvasive prenatal diagnosis metholodogy for fetal autosomal and sex chromosomal aneuploidies[J].BMC Med Genomics，2012，5（12）：57-60.

[18] 向萍霞，劉翎，冷培，等.游離胎兒DNA高通量基因測序技術(shù)在產(chǎn)前篩查的臨床應(yīng)用[J].實用婦產(chǎn)科雜志，2013，29（10）：777-780.

[19] 徐夏苑，金克勤，楊姍姍.產(chǎn)前無創(chuàng)DNA檢測在診斷胎兒非整倍染色體病中的應(yīng)用[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2015，23（2）：31-32.

[20] 高明雅，趙柏麗，王亞男.934例孕婦無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測結(jié)果分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2016，24（11）：36-38.

（收稿日期：2017-01-22）