茉莉酸甲酯對(duì)生物反應(yīng)器培養(yǎng)高山紅景天愈傷組織有效物質(zhì)積累的影響

管 桐, 李 賀, 王洪秋, 代 月

(1.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林 延吉 133002；2.延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 龍井 133400)

茉莉酸甲酯對(duì)生物反應(yīng)器培養(yǎng)高山紅景天愈傷組織有效物質(zhì)積累的影響

管 桐1, 李 賀1, 王洪秋1, 代 月2*

(1.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林 延吉 133002；2.延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 龍井 133400)

為提高高山紅景天愈傷組織中有效物質(zhì)的積累，試驗(yàn)研究了茉莉酸甲酯(MeJA)的處理時(shí)間及濃度對(duì)生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)的愈傷組織中有效物質(zhì)含量及生產(chǎn)量的影響。結(jié)果表明：MeJA處理對(duì)愈傷組織中有效物質(zhì)的積累有促進(jìn)作用，在反應(yīng)器培養(yǎng)20 d時(shí),加入MeJA 175 μmol處理3 d最有利于紅景天苷、酚類、多糖及黃酮含量的增加； MeJA 275 μmol處理，對(duì)紅景天-苷、酚、多糖及黃酮等有效物質(zhì)的積累效果最佳，其生產(chǎn)量分別為未處理的4.6、1.6、1.3和1.3倍。因此，利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)愈傷組織生產(chǎn)高山紅景天有效物質(zhì)時(shí)，可在培養(yǎng)第20天時(shí)加入275 μmol的MeJA處理3 d,可在短期內(nèi)達(dá)到有效物質(zhì)生產(chǎn)量最大化。

生物反應(yīng)器；愈傷組織；有效物質(zhì)；高山紅景天

高山紅景天(RhodiolasachalinensisA.Bor)是景天科紅景天屬植物[1-2]，又名庫葉紅景天，是長白山珍貴的藥用植物之一[3-5]。具有多種且復(fù)雜的生物活性成分，主要包括鞣質(zhì)、黃酮類化合物、酚類、紅景天苷、多糖及微量發(fā)油等物質(zhì)。紅景天作為一種名貴的中草藥，性涼，滋補(bǔ)元?dú)鈁6]，其在補(bǔ)氣、補(bǔ)血、清熱、解毒、扶正、固本等方面藥用療效顯著[7]，作為強(qiáng)壯劑[8]，具有抗缺氧、抗輻射、抗疲勞、抗病毒、抗抑郁、提高免疫力、促進(jìn)內(nèi)分泌等效果[9]，且對(duì)腫瘤的抑制及神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)也具有顯著的療效,同時(shí)對(duì)老年性心衰病癥也有一定的防護(hù)作用。茉莉酸甲酯(MeJA)是在組織培養(yǎng)中被廣泛應(yīng)用的用于提高次生代謝產(chǎn)物積累的非生物誘導(dǎo)子，是通過刺激植物細(xì)胞而形成的一種抗毒素信號(hào)物質(zhì)[10-11]。適當(dāng)使用MeJA能夠有效解決人工培養(yǎng)的愈傷組織中有效物質(zhì)相比野生的高山紅景天中含量低這一問題。研究顯示，在水飛薊愈傷組織培養(yǎng)中添加茉莉酸甲酯時(shí)，顯著提高了水飛薊素的積累[12]。在人參愈傷組織培養(yǎng)過程中單獨(dú)添加200 μmol/L的茉莉酸甲酯能夠有效的促進(jìn)細(xì)胞中皂苷的積累[13]。因此，本試驗(yàn)研究MeJA對(duì)生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)的高山紅景天愈傷組織內(nèi)生物活性物質(zhì)的含量以及對(duì)DPPH自由基清除能力的影響，旨在為提高高山紅景天內(nèi)次生代謝產(chǎn)物提供新的方法與理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

參照邵春繪等[14]的方法誘導(dǎo)出高山紅景天的愈傷組織。

JA2002電子天平(上海精天電子儀器有限公司)；YHW1103遠(yuǎn)紅外快速干燥箱(天津市華北實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；LG16-B離心機(jī)(北京雷波爾離心機(jī)有限公司)；UV1102紫外分光光度計(jì)(上海天美科學(xué)儀器有限公司)。所有試劑均購于天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 茉莉酸甲酯處理天數(shù)對(duì)反應(yīng)器內(nèi)高山紅景天愈傷組織生物量的影響

將鮮重20 g的愈傷組織接種到工作體積為2 L的3 L反應(yīng)器中，培養(yǎng)基為MS+BA 3.0 mg/L+ NAA 0.3 mg/L+ 蔗糖30 g/L，pH值為5.8，將MeJA(175 μmol)在愈傷組織反應(yīng)器培養(yǎng)至20 d時(shí)添加，處理時(shí)間分別設(shè)置為2、3、4、5、6、8和10 d。反應(yīng)器通氣量為0.1 vvm，以未加入誘導(dǎo)子的為對(duì)照組，培養(yǎng)相對(duì)應(yīng)的天數(shù)后將愈傷組織取出，用自來水沖洗干凈，瀝干水分后稱取鮮物重(FW)，然后分別放入標(biāo)記好的培養(yǎng)皿中并置于45 ℃恒溫烘干箱(YHW1103，天津市華北實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，中國)中烘干至恒重后稱量其干物重(DW)，并記錄數(shù)據(jù)，收集烘干后的材料放入冰箱中,待測定紅景天苷、酚類、多糖、黃酮含量。

1.2.2 茉莉酸甲酯處理濃度對(duì)反應(yīng)器內(nèi)高山紅景天愈傷組織生物量的影響

將鮮重為20 g的愈傷組織接種到工作體積為2 L的3 L反應(yīng)器中，培養(yǎng)基為MS+BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L，PH值為5.8。為篩選出適宜的MeJA濃度，將MeJA在愈傷組織反應(yīng)器培養(yǎng)至20 d時(shí)添加，分別加入75，125，175，225，275，325 μmol的MeJA。反應(yīng)器通氣量為0.1 vvm，根據(jù)上述試驗(yàn)篩選出的MeJA最佳處理時(shí)間，以未加入誘導(dǎo)子的為對(duì)照組(0 μmol)，培養(yǎng)方式及材料收獲方式同1.2.1。記錄鮮物重、干物重后將烘干后的材料放入冰箱中,待測定紅景天苷、酚類、多糖、黃酮含量。

1.2.3 抗氧化活性的測定

將鮮重為20 g的愈傷組織接種到工作體積為2 L的3 L反應(yīng)器中，培養(yǎng)基為MS+BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+ 蔗糖30 g/L，pH值為5.8。在反應(yīng)器培養(yǎng)愈傷組織20 d時(shí)，加入MeJA 275 μmol，以未經(jīng)MeJA處理作為對(duì)照組，培養(yǎng)3 d后收獲材料并烘干，培養(yǎng)方式及材料收獲方式同1.2.1，收集干粉待用。

1.2.4 生物量的測定

將在反應(yīng)器中培養(yǎng)25 d時(shí)收獲的愈傷組織過篩，使之與培養(yǎng)基分離，然后用自來水沖洗2～3次后，用濾紙吸干愈傷組織表面上的水分，稱取鮮物重。烘干后稱取干物重，方法同1.2.1。

增殖系數(shù)= (收獲時(shí)愈傷組織鮮物重/g-接種時(shí)愈傷組織鮮物重/g) /接種時(shí)愈傷組織鮮物g。

1.2.5 紅景天苷含量的測定

紅景天苷的提取與測定參考許劍鋒[15]的方法。精確稱取紅景天愈傷組織的干燥粉末0.5 g于50 mL三角瓶中，并向其中加入10 mL甲醇進(jìn)行溶解并搖勻，在125 W的超聲波中進(jìn)行超聲提取，時(shí)間為30 min，再放入75 ℃的恒溫水浴鍋中加熱5 h，待冷卻后補(bǔ)充以上過程中缺失的甲醇至原質(zhì)量。用0.22 μm的過濾器對(duì)上清液進(jìn)行過濾，濾液保存至無光低溫條件下，以備高效液相色譜檢測。設(shè)置高效液相色譜檢測波長為275 nm；流動(dòng)相甲醇-水(85∶15)；流速1 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；溫度30 ℃；保留時(shí)間11.8 min。

1.2.6 多糖含量的測定

多糖的提取與含量的測定參考胡彥武[16]的方法。多糖的提取：稱取愈傷組織干燥粉末0.2 g，加入適量的90%乙醇浸泡洗滌6 h，重復(fù)浸泡2次后將濾渣于通風(fēng)櫥中揮干，加入蒸餾水20 mL，在45 ℃條件下超聲處理30 min，過濾，收集濾液，重復(fù)3次后合并濾液，并將濾液定容至100 mL，即得待測樣品溶液。以苯酚-濃硫酸法在490 nm處測定葡萄糖的吸光值，計(jì)算愈傷組織中多糖的含量。

多糖含量/(mg/g)=(C·D·f)/W

式中,C為樣品溶液中葡萄糖的濃度/(g/L)；D為樣品溶液的稀釋因素；f為換算因子；W為樣品的質(zhì)量/g。

1.2.7 黃酮含量的測定

參照改良的Chang等[17]有方法測定黃酮的含量。稱取0.1 g干燥粉末于50 mL三角瓶中，加入10 mL 70 %乙醇，在60 ℃恒溫水浴鍋中加熱3 h后取出，待液體冷卻至室溫后倒入離心管中，在轉(zhuǎn)速為5 000 r/min、溫度4 ℃下離心15 min，精密抽取上清液，定容至25 mL，取上述溶液1 mL稀釋至5 mL(用蒸餾水稀釋)。取1 mL該溶液為待測樣品。按標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟操作，測定吸光值，并計(jì)算愈傷組織中黃酮含量。

黃酮含量/(mg/g)=C·V·D × 10

式中,C為樣品溶液濃度/(mg/mL)；V為樣品溶液體積/mL；D為稀釋倍數(shù)。

1.2.8 酚類含量的測定

參照改良的Singleton等[18]的方法測定總酚的含量，稱取0.1 g干燥粉末于50 mL三角瓶中，加入10 mL 80%甲醇，在80 ℃恒溫水浴鍋中加熱1 h后取出，待液體冷卻至室溫后倒入離心管中，在轉(zhuǎn)速為5 000 r/min、溫度為4 ℃下離心15 min，精密抽取上清液，定容至25 mL，取上述液體1 mL稀釋至2 mL即為待測樣品溶液(用蒸餾水稀釋)。按標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟操作，測定吸光值，并計(jì)算愈傷組織中酚含量。

酚含量/(mg/g)=C·V·D × 10

式中,C為樣品溶液濃度/(mg/mL)；V為樣品溶液體積/mL；D為稀釋倍數(shù)。

1.2.9 抗氧化活性的測定

參考并改進(jìn)Sarikurkcu[19]等的方法，稱取20 mg DPPH并定容至500 mL容量瓶中，即得到0.1 mM DPPH溶液，避光保存待用。將0.05 g愈傷組織干粉定容至25 mL，即得濃度為2 mg/mL樣品溶液，再分別將樣品溶液稀釋為0.10、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 mg/mL。分別取上述樣品溶液和DPPH溶液各2 mL于試管中，均勻混合后室溫避光靜置30 min。設(shè)置2 mL甲醇+2 mL DPPH溶液作為空白對(duì)照組，在波長為517 nm處測定各組吸光值。

DPPH自由基清除率/(I %)=(Ai-Aj)/ Ai×100

式中,Ai為對(duì)照組；Aj為樣品組。

1.2.10 數(shù)據(jù)整理及軟件分析

利用SPSS11.5程序中的方差分析對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用鄧肯氏新復(fù)極差法進(jìn)行比較，顯著水平為0.05，每個(gè)處理3次重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 茉莉酸甲酯處理天數(shù)對(duì)反應(yīng)器內(nèi)高山紅景天愈傷組織生物量的影響

高山紅景天愈傷組織在氣升式生物反應(yīng)器中培養(yǎng)20 d后，加入175 μmol的MeJA，分別處理0、2、3、4、5、6、8和10 d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加入MeJA 0～3 d時(shí)，愈傷組織的生物量均呈逐漸增加的趨勢(shì)，在3 d時(shí)愈傷組織的鮮物重以及干物重均達(dá)到最大值，分別是298和11.7 g/L，而在4～10 d生物量呈下降趨勢(shì)(圖1)。

圖1 茉莉酸甲酯處理天數(shù)對(duì)反應(yīng)器內(nèi)

由圖2可知,在茉莉酸甲酯處理時(shí)間對(duì)有效物質(zhì)含量影響的試驗(yàn)中，MeJA處理3 d時(shí)，紅景天苷的含量和生產(chǎn)量達(dá)到最大值,為2.41和25.26 mg/L，之后隨著處理天數(shù)的增加，紅景天苷的含量和生產(chǎn)量均呈下降趨勢(shì)；隨著處理天數(shù)的增加多糖含量和生產(chǎn)量也呈上升趨勢(shì)，在3 d時(shí)多糖含量達(dá)到最大值,為326.22 mg/g，而多糖生產(chǎn)量在MeJA處理6 d時(shí)達(dá)到最大值2.19 g/L；而酚含量和生產(chǎn)量則隨著處理時(shí)間的增加整體呈下降趨勢(shì)，在0～3 d緩慢下降，3 d后急劇下降，在6～10 d時(shí)趨于平緩；黃酮含量和生產(chǎn)量與酚有著相同的變化趨勢(shì)，整體呈下降趨勢(shì)，不同的是黃酮的生產(chǎn)量在MeJA處理8 d后仍處于下降趨勢(shì)(圖2)。由此得出結(jié)論，MeJA處理3 d最有利于高山紅景天愈傷組織內(nèi)有效物質(zhì)的積累。

圖2 茉莉酸甲酯處理天數(shù)對(duì)反應(yīng)器內(nèi)高山紅景天愈傷組織中有效物質(zhì)積累的影響

2.2 茉莉酸甲酯處理濃度對(duì)反應(yīng)器內(nèi)高山紅景天愈傷組織生物量的影響

在愈傷組織培養(yǎng)20 d后，分別加入不同濃度的MeJA(0～325 μmol)處理3 d后發(fā)現(xiàn)，隨著MeJA濃度的增加,高山紅景天愈傷組織的鮮物重以及干物重均呈下降趨勢(shì)(圖3)。

經(jīng)MeJA處理后的高山紅景天愈傷組織，比未經(jīng)MeJA處理組的顏色淡，但是生物量無明顯差異(圖4)。

圖3 茉莉酸甲酯處理濃度對(duì)反應(yīng)器內(nèi)

圖4 茉莉酸甲酯處理濃度對(duì)反應(yīng)器內(nèi)

愈傷組織中紅景天苷含量和生產(chǎn)量均在MeJA濃度為275 μmol時(shí)達(dá)到最大值，分別為3.52和38.6 mg/L。酚含量和生產(chǎn)量與紅景天苷有著相同變化趨勢(shì)，在MeJA濃度為275 μmol時(shí)出現(xiàn)最大值,分別為6.88和72.8 mg/L。而黃酮含量和生產(chǎn)量總體趨勢(shì)較為平緩，在MeJA濃度為275 μmol時(shí)達(dá)到最大值,分別為13.79和158.6 mg/L。多糖含量和生產(chǎn)量隨著MeJA濃度的增加而增加，在MeJA濃度為275和325 μmol時(shí)無明顯差異，均達(dá)到最大值。因此，MeJA濃度為275 μmol時(shí)，最有利于高山紅景天內(nèi)生物活性物質(zhì)的積累且不影響愈傷組織的生長(圖5)。

圖5 茉莉酸甲酯處理濃度對(duì)反應(yīng)器內(nèi)高山紅景天愈傷組織中有效物質(zhì)積累的影響

2.3 抗氧化活性的測定

抗氧化活性的研究是采用DPPH自由基清除能力來評(píng)價(jià)。經(jīng)過MeJA處理組(MeJA)和對(duì)照組(CK)的DPPH自由基清除能力的測試結(jié)果(圖6)，隨著樣品濃度的升高，2組的清除能力也呈逐漸升高的趨勢(shì)，其中,處理組IC50為0.45 mg/mL，對(duì)照組IC50則明顯高于處理組，為0.7 mg/mL。因此，經(jīng)過MeJA處理后的高山紅景天愈傷組織的抗氧化能力明顯增強(qiáng)，在某種程度上可以緩解自由基對(duì)機(jī)體造成的氧化損傷，能夠起到對(duì)生物體的保護(hù)作用。

圖6 茉莉酸甲酯處理和未處理的

3 討論與結(jié)論

在植物生長發(fā)育過程和應(yīng)對(duì)外界不良環(huán)境時(shí)，植物體內(nèi)能產(chǎn)生一種次生代謝產(chǎn)物來抵御外干擾，以達(dá)到植物體本身新陳代謝的平衡。在植物組織培養(yǎng)工程中，利用誘導(dǎo)子提高藥用植物體內(nèi)代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量是一個(gè)行之有效的被廣泛應(yīng)用的方法。其中，MeJA被認(rèn)為是一種內(nèi)源信號(hào)分子，能夠激活植物次生代謝機(jī)制過程中相關(guān)途徑間酶的活性，能夠有效提高植物組織、細(xì)胞以及器官中次生代謝產(chǎn)物的合成，目前是藥用植物細(xì)胞培養(yǎng)中常用的方法。研究表明，在組織培養(yǎng)過程中添加MeJA作為誘導(dǎo)子，對(duì)提高有效物質(zhì)的含量有顯著的效果。于丹[20]在篩選MeJA處理時(shí)間對(duì)反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)東北刺人參不定根中活性物質(zhì)積累的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，MeJA處理第8 d時(shí)，其多糖、酚、黃酮含量達(dá)到最大值；段永波[21]等在半夏懸浮細(xì)胞培養(yǎng)21 d時(shí)，用150 μmol/L MeJA處理后生物堿含量是未處理組的3.6倍，且sAMP合成酶活力是對(duì)照組的2.6倍。由此可見，誘導(dǎo)子的添加對(duì)提高生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)的藥用植物組織或細(xì)胞中有效物質(zhì)含量具有重要意義，且誘導(dǎo)子處理時(shí)間以及處理濃度的不同對(duì)有效物質(zhì)的積累影響有所不同。本試驗(yàn)中，在MeJA處理3 d時(shí)，紅景天苷的含量和生產(chǎn)量達(dá)到最大值，分別為2.41和25.26 mg/L。同時(shí)，MeJA濃度為275 μmol時(shí)，最有利于高山紅景天內(nèi)生物有效物質(zhì)的積累。本研究采用了DPPH自由基清除能力對(duì)高山紅景天愈傷組織的抗氧化能力進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明，經(jīng)過MeJA處理后高山紅景天愈傷組織的抗氧化活性明顯得到提升，而愈傷組織內(nèi)起到抗氧化作用的物質(zhì)可能為黃酮和多糖，二者均為植物體內(nèi)具有抗氧化[22-23]、抗病毒、抗癌的天然活性物質(zhì)，被許多學(xué)者從植物中提取出來并得到廣泛應(yīng)用[24-27]，但對(duì)于高山紅景天愈傷組織內(nèi)起抗氧化作用的主要物質(zhì)還有待于做進(jìn)一步的討論與研究。

[1] 邵春繪.利用氣升式生物反應(yīng)器生產(chǎn)高山紅景天活性物質(zhì)的研究[D].延吉:延邊大學(xué),2014.

[2] 孫世國.高山紅景天的開發(fā)應(yīng)用[J].特產(chǎn)研究,1993(01):24.

[3] 趙偉.長白山高山紅景天保護(hù)遺傳學(xué)研究[D].長春:吉林大學(xué),2014.

[4] 許建峰,應(yīng)佩青,蘇志國.高山紅景天資源應(yīng)用與開發(fā)研究進(jìn)展[J].中草藥,1998,29(03):202-205 .

[5] 段志強(qiáng),高雪濤.紅景天研究進(jìn)展[J].黑龍江醫(yī)藥,2003,16(02):144.

[6] 宇陀寧瑪·元丹貢布.四部醫(yī)典[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1985:54.

[7] 李偉,黃勤妮.紅景天屬植物的研究及應(yīng)用[J].首都師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2003,24(01):55-59 .

[8] 卜媛媛,金東淳,劉憲虎,等.高山紅景天RAPD反應(yīng)體系的優(yōu)化研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(30):13057-13058,13063.

[9] 張雨舟.紅景天藥理作用研究進(jìn)展及應(yīng)用前景分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(25):77-79,82.

[10] 王紅,葉春國,李國鳳.誘導(dǎo)子的作用方式及其在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用[J].植物學(xué)通報(bào),1999,16(01):11-18.

[11] He X R,Yu Z N,Jiang S J,et al.Finding new elicitors that induce resistance in rice to the white-backed planthopperSogatellafurcifera[J].Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,2015,25:5601-5603.

[12] Sánchez-Sampedro M A,Fernández-Tárrago J,Corchete P.Elicitation of silymarin in cell cultures ofSilybummarianum:effect of subculture and repeated addition of methyl jasmonate[J].Biotechnology Letters,2009,31(10):1633-1637.

[13] Kim Y S,Hahn E J,Murthy H N,et al.Adventitious root growth and ginsenoside accumulation inPanaxginsengcultures as affected by methyl jasmonate[J].Biotechnology Letters,2004,26(21):1619-1622.

[14] 邵春繪,廉美蘭,李鐵軍,等.幾種因素對(duì)高山紅景天愈傷組織誘導(dǎo)和增殖的影響[J].延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào),2013,35(4):289-292.

[15] Xu J F,Ying P Q,Han A M,et al.Enhanced salidroside production in liquid-cultivated compact callus aggregates of Rhodiola sachalinensis:Manipulation of plant growth regulators and sucrose[J].Plant Cell Tissue and Org Culture,1999, 55(01):53-58.

[16] 胡彥武,趙國志,曲迪.東北刺人參莖中多糖的提取及含量的測定[J].北方園藝,2011(12):161-162.

[17] Chang C C,Yang M H,Wen H M,et al.Estimation of total flavonoid content in propolis by two complementary colorimetric methods[J]. Journal of Food and Drug Analysis,2002,10(03):178-182.

[18] Singleton V L,Orthofer R,Lamuela Raventos R M.Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of folin-ciocalteu reagent[J].Methods In Enzymology,1999,299:152-178.

[][]

[19] Sarikurkcu C,Tepe B,Daferera D,et al.Studies on the antioxidant activity of the essential oil and methanol extract ofMarrubiumglobosumsubsp.globosum(lamiaceae) by three different chemical assays[J].Bioresource Technology,2008,99(10):4239-4246.

[20] 于丹.誘導(dǎo)子對(duì)東北刺人參不定根中有效物質(zhì)含量的影響及抗氧化活性研究[D].延吉:延邊大學(xué),2015.

[21] 段永波,魯放,崔婷婷,等.非生物誘導(dǎo)子茉莉酸甲酯和水楊酸對(duì)半夏懸浮細(xì)胞中生物堿代謝的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2017,24(01):87-90.

[22] 李世燕,閆公昕,牛廣財(cái),等.三氯化鋁比色法測定毛酸漿果中總黃酮的研究[J].黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào),2016,28(04):45-48.

[23] 陳宇,董映雪,鄭璐,等.竹葉黃酮類物質(zhì)的抗氧化性能研究[J].赤峰學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2015,31(06): 4-8.

[24] 朱欣婷.植物多糖的生物活性研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(28):12076-12077.

[25] 鐘靈,王振富,文德鑒.黃芪多糖抗衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志,2013,29(04):350-352.

[26] 李偉,程超.不同產(chǎn)地火棘果實(shí)黃酮體外抗氧化作用[J].湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2013,31(04):382-385.

[27] 楊天佑,張蕾,田靜,等.黃酮類化合物的添加對(duì)啤酒品質(zhì)的影響[J].河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2016,44(01):15-19,27.

Effect of Methy Jasmonate (MeJA) on effective compound accumulation ofRhodiolasachalinensisduring callus bioreactor culture

GUAN Tong1, LI He1, WANG Hongqiu1, DAI Yue2*

(1.AgriculturalCollegeofYanbianUniversity,YanjiJilin133002,China;2.AcademyofAgriculturalSciencesofYanbian,LongjingJilin133400,China)

In order to enhance effective compound accumulation of Rhodiola sachalinensis during callus bioreactor culture, the effects of concentration and treatment days of Methy Jasmonate (MeJA) on effective compound accumulation were studied. The results showed that the effect of treatment days of MeJA had a great influence on effective compound accumulation in callus with increase of salidroside, phenol, flavonoid and polysaccharides contents. The bioreactor compound accumulation was promoted when the medium was supplemented with MeJA 175 μmol after 20 days of bioreactor culture and the optimal treatment days was 3 d. The maximum productivities of effective compound (salidroside, phenol, flavonoid and polysaccharides) were measured maximum value at 275 μmol MeJA. Their levels were 4.6, 1.6, 1.3 and 1.3-fold greater than control. During bioreactor culture ofRhodiolasachalinensiseffective compound, adding 275 μmol MeJA in medium to induce 3 days could maximized the production of effective compound in short time. The present study could provide a reference for commercialization and development ofRhodiolasachalinensisproduction.

bioreactor; callus; effective compound;Rhodiolasachalinensis

2017-01-06 基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81160497)

管桐(1994—)，女，吉林和龍人，在讀碩士，研究方向?yàn)橹参锝M織培養(yǎng)及生物反應(yīng)器的應(yīng)用。代月為通信作者，E-mail: mllian@ybu.edu.cn

1004-7999(2017)01-0023-06

10.13478/j.cnki.jasyu.2017.01.004

S567.239

A