結(jié)核病的熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)診斷及肺功能與炎性因子測定

張忠原

（菏澤市立醫(yī)院，山東菏澤274031）

結(jié)核病的熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)診斷及肺功能與炎性因子測定

張忠原

（菏澤市立醫(yī)院，山東菏澤274031）

目的探討結(jié)核病的熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢驗(yàn)及肺功能和炎性因子的變化。方法疑似結(jié)核病261例，均進(jìn)行熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)和痰涂片檢查，以影像學(xué)檢查聯(lián)合細(xì)菌學(xué)檢查進(jìn)行確診。應(yīng)用SPSS21.0軟件，所獲數(shù)據(jù)采用方差分析和t檢驗(yàn)。結(jié)果確診結(jié)核病患者197例，占75.48%；非結(jié)核病患者64例，占24.52%。熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查結(jié)核病正確診斷197例，其中結(jié)核病診斷136例，占69.03%；陰性診斷61例，占30.96%。非結(jié)核病64例，熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查陽性2例，占3.12%；陰性62例，占96.87%。確診結(jié)核病患者197例中痰涂片檢查結(jié)核病正確診斷106例，占53.81%。陰性96例，占48.73%。非結(jié)核病64例，其中陽性5例，占7.81%，陰性59例，占92.19%。熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查結(jié)核病陽性率比較,P＜0.005；肺結(jié)核陽性率比較P＞0.05。熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查的靈敏度為69.04%，特異度為96.88%、約登指數(shù)0.659、陽性預(yù)測值為98.55%和陰性預(yù)測值為50.41%，均高于痰涂片檢查靈敏度為51.27%、特異度為92.19%、約登指數(shù)0.435、陽性預(yù)測值為95.28%和陰性預(yù)測值為38.06%。非結(jié)核病組與結(jié)核病組比較FEV1%、FEV1/ FEC%、FEF25%、FEF50%比較，P＜0.0005。非結(jié)核病組與結(jié)核病組比較IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-1比較，P＜0.0005。結(jié)論熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查方法對結(jié)核病診斷具有較高價值，肺功能與炎性因子也有一定的輔助診斷作用。

熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)/診斷應(yīng)用；結(jié)核病/診斷；肺功能；炎性因子

結(jié)核病是由結(jié)核桿菌感染引起的傳染病，對患者的身心健康和生命安全危害較大，隨著患病率的提高，其已經(jīng)成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題，在我國也是重大傳染病之一[1]。實(shí)驗(yàn)室檢查對于診斷結(jié)核具有重要意義，目前結(jié)核病常使用痰涂片法進(jìn)行診斷，但是檢查結(jié)果并不十分理想，隨著分子生物技術(shù)的進(jìn)展，在結(jié)核病診斷中發(fā)揮著重要作用，其中利福平耐藥實(shí)時熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)（Xpert Mtb/RIF）是近年來診斷結(jié)核病的新型方法，可為早期診斷提供幫助[2,3]。為此，我們自2014年10月—2015年9月間對疑似結(jié)核病患者進(jìn)行涂片診斷和熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)診斷，并對肺功能和炎性因子的變化進(jìn)行檢測?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料疑似結(jié)核病患者261例，其中男性140例，女性121例，年齡7～72歲，平均年齡（46.82± 8.69）歲，均伴有不同程度的發(fā)熱、咳嗽、胸膜積液或者腹水等臨床癥狀。同時檢測肺功能FEV1、FEV1/ FEC%、FEF25%、FEF50%及炎性因子白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子（TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長因子-1（TGF-1）的水平。所有研究對象均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 檢查方法所有研究對象清晨漱口3次后用力咳痰，取痰液進(jìn)行熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)和痰涂片實(shí)驗(yàn)室檢查：（1）熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查，痰液與前處理液按照1∶2的比例旋渦震蕩混勻，室溫靜置15 min后轉(zhuǎn)移至反應(yīng)盒中，然后將反應(yīng)盒置于Gene Xpert儀器中進(jìn)行全自動檢測（美國Cepheid公司），反應(yīng)結(jié)束后觀察檢查結(jié)果[4]。（2）痰涂片檢查，將采集的痰液在玻璃片上涂片，抗酸染色后在顯微鏡下觀察以進(jìn)行診斷。以影像學(xué)檢查聯(lián)合細(xì)菌學(xué)檢查進(jìn)行確診。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 21.0軟件。所獲數(shù)據(jù)采用方差分析和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩種實(shí)驗(yàn)室檢查診斷準(zhǔn)確率的比較確診結(jié)核病患者197例，占75.48%，非結(jié)核病患者64例，占24.52%，其中熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查正確診斷197例（結(jié)核病診斷136例，非結(jié)核病診斷61例），痰涂片檢查正確診斷160例（結(jié)核病診斷101例，非結(jié)核病診斷96例），熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查準(zhǔn)確率為75.86%，明顯高于痰涂片檢查為61.30%，兩組比較，P＜0.05。熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查結(jié)核病陽性率比較，P＜0.005；肺結(jié)核陽性率比較，P＞0.05。

2.2 兩種實(shí)驗(yàn)室檢查診斷價值的比較熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查的靈敏度為69.04%、特異度為96.88%、約登指數(shù)為0.659、陽性預(yù)測值為98.55%和陰性預(yù)測值為50.41%，痰涂片檢查靈敏度為51.27%、特異度為92.19%、約登指數(shù)為0.435、陽性預(yù)測值為95.28%和陰性預(yù)測值為38.06%。

2.3 結(jié)核病與非結(jié)核病肺功能見表1。

表1 結(jié)核病與非結(jié)核病呼吸功能指標(biāo)比較

表1 結(jié)核病與非結(jié)核病呼吸功能指標(biāo)比較

兩組FEV1%、FEV1/FEC%、FEF25%、FEF50%比較，t=26.510、23.970、6.0581、10.230，P＜0.0005。

2.4 結(jié)核病與非結(jié)核病炎性因子檢測比較見表2。

表2 結(jié)核病與非結(jié)核病炎性因子檢測比較

表2 結(jié)核病與非結(jié)核病炎性因子檢測比較

兩組IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-1比較，t=42.065、90.680、56.537、20.844，P＜0.0005。

3 討論

早期發(fā)現(xiàn)和治療結(jié)核病是防治工作的重要內(nèi)容，傳統(tǒng)痰涂片實(shí)驗(yàn)室檢查雖然操作簡單，但檢查結(jié)果容易受到檢驗(yàn)人員的技術(shù)水平以及收集痰液標(biāo)本的質(zhì)量的影響，常出現(xiàn)漏診和誤診情況，很難滿足臨床診治的需要，導(dǎo)致病情延誤[5]。臨床應(yīng)用熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)技術(shù)診斷肺結(jié)核已趨于成熟，有效避免其他因素的感染，敏感性較高[6,7]，同時熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)具有自動化、時間短、生物安全性等優(yōu)點(diǎn)，較易應(yīng)用于臨床結(jié)核病的診斷[8]。

本研究發(fā)現(xiàn)熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查正確診斷198例（結(jié)核病診斷136例，非結(jié)核病診斷62例），痰涂片檢查正確診斷160例（結(jié)核病診斷101例，非結(jié)核病診斷59例），熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查準(zhǔn)確率（75.86%）明顯高于痰涂片檢查（61.30%），并且熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查的靈敏度（69.04%）、特異度（96.88%）、約登指數(shù)（0.659）、陽性預(yù)測值（98.55%）和陰性預(yù)測值（50.41%）均高于痰涂片檢查（分別為51.27%、92.19%、0.435、95.28%和38.06%），這與以往研究結(jié)果一致[9,10]，說明熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查方法較傳統(tǒng)痰涂片具有較高的靈敏度和特異度，對結(jié)核病的診斷價值更高，并且也較為方便快速，有助于結(jié)核病的早期診斷和治療。

非結(jié)核病組與結(jié)核病組比較FEV1%、FEV1/FEC%、FEF25%、FEF50%比較，P＜0.0005,有非常顯著性差異，說明在結(jié)核病沒有明確診斷之前肺功能已有影響。非結(jié)核病組與結(jié)核病組比較IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-1比較，P＜0.0005，有非常顯著性差異，說明結(jié)核病沒有明確診斷之前炎性因子已經(jīng)有了變化。與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11，12]。

[1]張艷芳，郭箭，王玉霞.抗結(jié)核感染免疫療法治療肺結(jié)核的療效及對免疫功能和生活質(zhì)量的影響[J].醫(yī)學(xué)綜述，2016,22（21）：4326-4331.

[2]陳志，林明貴，梁建琴，等.活動性肺結(jié)核患者血清炎性因子變化特點(diǎn)及與免疫狀態(tài)的關(guān)系[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28（11）：1234-1236.

[3]張愛梅，李鋒，劉旭暉，等.結(jié)核分枝桿菌/利福平耐藥實(shí)時熒光定量核酸擴(kuò)增檢測在肺外結(jié)核中的診斷價值[J].中華傳染病雜志, 2016,34(3)：174-179.

[4]鄒遠(yuǎn)嫵，劉尚武，朱蕾，等.Xpert MTB/RIF檢測結(jié)核分枝桿菌及其耐藥性在結(jié)核病輔助診斷中的臨床價值[J].臨床肺科雜志, 2015,20(3)：568-570.

[5]王怡心，陳雄豪，林惠玲，等.Xpert Mtb/RIF技術(shù)在基層實(shí)驗(yàn)室結(jié)核病診斷中的應(yīng)用研究[J].分子診斷與治療雜志,2015,7(3)：176-179.

[6]李光才，馬慶慶，朱昭平，等.肺灌洗對煤工塵肺合并穩(wěn)定期肺結(jié)核的療效及對炎性因子的影響[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2016,22（6）：4-6.

[7]王訓(xùn)霞.Xpert Mtb/RIF實(shí)驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的價值分析[J].河南醫(yī)學(xué)研究,2016,25(7)：1313-1314.

[8]李妍，張?zhí)烊A，鮮小萍，等.Xpert MTB/RIF技術(shù)在MTB檢測中的應(yīng)用價值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2016,31(1)：52-55.

[9]李輝，萬旭.青中年咳嗽變異性哮喘患者肺功能及變應(yīng)原檢測分析[J].臨床肺科雜志,2014,19（6）：1026-1028.

[10]劉佳慶，張麗霞，孫海柏，等.Xpert Mtb／RIF在結(jié)核病診斷中的研究進(jìn)展[J].廣東醫(yī)學(xué),2016,37(12)：1894-1899.

[11]韓丹，段慧楠，饒有益.纖維支氣管鏡灌洗液Xpert MTB/RIF檢測對肺結(jié)核診斷和利福平耐藥菌株篩選的臨床價值[J].醫(yī)學(xué)綜述, 2016,22(16)：3243-3246.

[12]鄒琳琳，黎友倫.γ-干擾素釋放試驗(yàn)在免疫損傷并肺結(jié)核患者中的應(yīng)用[J].中國免疫學(xué)雜志，2016，32(6)：878-881.

Fluorescence Quantitative Techniques for Nucleic Acid Amplification Diagnosis of Tuberculosis and Pulmonary Function and Inflammatory Factor Determination

Zhang Zhongyuan
(The Municipal Hospital of Heze City,Heze 274031,Shandong)

ObjectiveTo study the fluorescence quantitative nucleic acid amplification techniques for TB diagnosis value.Methods261 cases with suspected tuberculosis(TB),fluorescence quantitative techniques for nucleic acid amplification and sputum smear examination,confirmed with imaging examination combined bacteriology examination. SPSS21.0 application software,the data obtained using analysis of variance andttest.ResultsThe diagnosis of TB patients 197 cases,accounting for 75.48%,than 64 cases of patients with tuberculosis,accounting for 24.52%.Which Mtb/ RIF check TB correct diagnosis of 197 cases with tuberculosis diagnosis in 136 cases,accounting for 69.03%.Negative in the diagnosis of 61 cases,accounting for 30.96%.Of 64 cases of tuberculosis,fluorescence quantitative techniques for nucleic acid amplification check positive in 2 cases,accounting for 3.12%.Negative 62 cases,accounting for 96.87%. Confirmed 197 cases of patients with tuberculosis in sputum smears correct diagnosis of 106 cases of tuberculosis,accounting for 53.81%.Negative 96 cases,accounting for 48.73%.Of tuberculosis in 64 cases,of which the positive in 5 cases,accounted for 7.81%,negative 59 cases,accounting for 92.19%.Fluorescence quantitative techniques for nucleic acid amplification testing TB positive rate comparisons,P＜0.005.Tuberculosis positive rate comparisons,P＞0.05.Fluorescence quantitative technical inspection for nucleic acid amplification sensitivity of 69.04%,96.88%,and an index of 0.659,the positive predictive value was 98.55%and negative predictive value was 98.55%,were higher than in sputum smear examination sensitivity was 51.27%,92.19%,and an index of 0.435,the positive predictive value was 95.28%and negative predictive value was 95.28%.Non tuberculosis and tuberculosis group comparison FEV1%,FEV1/FEC, FEF25%,FEF50%,P＜0.0005.Non tuberculosis and tuberculosis(TB)group is IL-6,IL-8,TNF-αcompared to de-cide a and TGF-1,P＜0.0005.ConclusionThe fluorescence quantitative inspection method for nucleic acid amplification of TB diagnosis with high value,pulmonary function and inflammatory factor also to have certain auxiliary diagnosis function.

Fluorescence quantitative nucleic acid amplification technique/diagnosis;TB/diagnosis;Lung function; Inflammatory cytokines

R725.1

：A

：1008-4118（2017）01-0025-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2017.01.008

2016-10-09