閆 征,李雙石,楊國(guó)偉,王越鵬,羅忠智,郝利民,*
(1.北京電子科技職業(yè)學(xué)院生物工程學(xué)院,北京 100176; 2.總后勤部軍需裝備研究所,北京 100010)
擠壓膨化預(yù)處理技術(shù)對(duì)靈芝多糖提取的影響
閆 征1,李雙石1,楊國(guó)偉1,王越鵬2,羅忠智2,郝利民2,*
(1.北京電子科技職業(yè)學(xué)院生物工程學(xué)院,北京 100176; 2.總后勤部軍需裝備研究所,北京 100010)
以靈芝子實(shí)體為原料,在熱水浸提前進(jìn)行雙螺桿擠壓膨化預(yù)處理,以提高靈芝多糖的提取得率。分別采用單因素和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)物料提取前的擠壓膨化預(yù)處理?xiàng)l件進(jìn)行優(yōu)化,然后采用高效凝膠排阻色譜對(duì)比了擠壓膨化預(yù)處理對(duì)水提靈芝多糖分子量分布的影響。在物料粒度60目時(shí),通過(guò)優(yōu)化得到了雙螺桿擠壓膨化預(yù)處理的最優(yōu)工藝:套筒溫度160 ℃,固液比1∶3,螺桿轉(zhuǎn)速150 r/min,采用上述條件進(jìn)行預(yù)處理后,靈芝多糖的提取得率為7.92%,較未擠壓膨化靈芝的多糖提取得率提高了92.7%,表明采用雙螺桿擠壓膨化技術(shù)對(duì)靈芝子實(shí)體進(jìn)行預(yù)處理,可顯著提高靈芝多糖的提取得率,同時(shí)雙螺桿擠壓膨化預(yù)處理會(huì)增加靈芝多糖提取物中低分子量多糖的比例。
擠壓膨化,靈芝,多糖,提取,分子量分布
靈芝是擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、傘菌綱(Agaricomycetes)、多孔菌目(Polyporales)、靈芝菌科(Ganodermataceae)、靈芝屬(Ganoderma)真菌[1-2],作為中國(guó)傳統(tǒng)的名貴滋補(bǔ)藥材,它具有藥、食兩用價(jià)值?,F(xiàn)代科學(xué)研究表明,靈芝中含有多糖、三萜等多種生物活性成分[3];其中,靈芝多糖(Gandermalucidumpolysaccharide,GLP)是靈芝的主要活性成分之一[4-6],與靈芝的多種生理、藥理功能有關(guān),具有抗氧化、調(diào)節(jié)免疫力、抑制腫瘤、刺激胰島素分泌、降血糖、降血脂、抗輻射、促進(jìn)葡萄糖在外周組織的利用、促進(jìn)核酸和蛋白質(zhì)的合成、消炎等功效[7]。因此,靈芝受到國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注,是研究最多的藥食用真菌之一;同時(shí),靈芝多糖成為靈芝研究的熱點(diǎn)之一,其研究與開發(fā)前景廣闊。
靈芝子實(shí)體結(jié)構(gòu)緊密、木質(zhì)化程度高,纖維素、半纖維素和木質(zhì)素的含量高達(dá)70%以上[8-10],這在一定程度上會(huì)影響多糖等活性物質(zhì)的分離與提取。在靈芝多糖的提取過(guò)程中,如何高效、快速地破壞子實(shí)體緊密的結(jié)構(gòu)一直是制約靈芝多糖提取得率的關(guān)鍵因素。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,超聲波、微波、超高壓、酶技術(shù)和超濾等高新技術(shù)廣泛應(yīng)用于天然活性物質(zhì)提取[11-13],顯著提高了天然活性物質(zhì)的提取得率。雙螺桿擠壓膨化技術(shù)是一種先進(jìn)的物料擠壓成型技術(shù),集混合、攪拌、加熱、破碎、蒸煮、噴爆等過(guò)程為一體,對(duì)物料具有高溫、高壓、高剪切力的作用[14-16],在食品加工和飼料加工領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。近年,有研究將擠壓膨化技術(shù)應(yīng)用于細(xì)胞壁破除[17]。顧回美[18]和劉巧紅[19]分別對(duì)銀耳和香菇進(jìn)行擠壓膨化預(yù)處理,顯著提高了真菌多糖提取得率;但擠壓膨化技術(shù)在高度木質(zhì)化原料活性物質(zhì)提取預(yù)處理中的應(yīng)用還未見(jiàn)報(bào)道。本文以靈芝子實(shí)體為原料,研究了不同擠壓膨化預(yù)處理?xiàng)l件對(duì)靈芝多糖提取得率的影響,并對(duì)擠壓膨化預(yù)處理后靈芝多糖分子量分布的變化進(jìn)行了分析。
1.1 材料與儀器
靈芝子實(shí)體 安徽喬康藥業(yè)有限公司提供;無(wú)水乙醇、濃硫酸、苯酚、葡萄糖等 均為分析純。
SYSLG32-Ⅱ雙螺桿擠壓膨化機(jī) 山東濟(jì)南賽百諾科技有限公司;TYS-100高速多功能粉碎機(jī) 浙江省永康市紅太陽(yáng)機(jī)電有限公司;PB-10酸度計(jì) 德國(guó)Sartorius公司;BS200S電子天平 德國(guó)Sartorius公司;TGC-16C臺(tái)式離心機(jī) 上海精密科學(xué)儀器有限公司;HH.SY21-NY水浴鍋 北京長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司;TU-1901紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器廠。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 靈芝粗多糖提取 工藝流程:靈芝→粉碎過(guò)篩→與水混合→擠壓膨化→熱水浸提→分離。
熱水浸提條件:準(zhǔn)確稱取一定量經(jīng)擠壓膨化預(yù)處理的靈芝粉,按料液比1∶25與蒸餾水混合,在100 ℃條件下浸提4 h。
靈芝粗多糖分離:提取液8000 r/min下離心10 min后收集上清液,準(zhǔn)確度量5 mL粗提物并按1∶4的比例加入無(wú)水乙醇,4 ℃醇沉12 h后抽濾收集醇析物,再經(jīng)冷凍干燥既得粗多糖。
1.2.2 擠壓膨化預(yù)處理?xiàng)l件 對(duì)靈芝子實(shí)體粉末進(jìn)行擠壓膨化預(yù)處理單因素實(shí)驗(yàn);擠壓膨化機(jī)的螺桿直徑為32 mm,長(zhǎng)徑比18∶1。
在螺桿轉(zhuǎn)速為150 r/min,固液比為1∶2 g/mL,套筒溫度為150 ℃的條件下,考察物料粒度(40、60、80、100、120目)對(duì)靈芝多糖提取得率的影響。
在螺桿轉(zhuǎn)速為150 r/min,物料粒度為60目,套筒溫度為150 ℃的條件下,考察固液比(1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5 g/mL,以干物質(zhì)量計(jì))對(duì)靈芝多糖提取得率的影響。
在物料粒度為60目,固液比為1∶2,套筒溫度為150 ℃的條件下,考察螺桿轉(zhuǎn)速(100、125、150、175、200 r/min)對(duì)靈芝多糖提取得率的影響。
在螺桿轉(zhuǎn)速為150 r/min,物料粒度為60目,固液比為1∶2的條件下,考察套筒溫度(130、140、150、160、170 ℃)對(duì)靈芝多糖提取得率的影響。
在單因素方差分析基礎(chǔ)上進(jìn)行三因素三水平正交實(shí)驗(yàn),確定最佳工藝條件。正交實(shí)驗(yàn)各因素水平如表1所示。
表1 正交實(shí)驗(yàn)因素及水平表Table 1 Factors and levels table of orthogonal test
1.2.3 靈芝粗多糖含量測(cè)定及提取得率計(jì)算 取按1.2.1處理獲得的醇析物,加水復(fù)容至5 mL,采用苯酚-硫酸法[8]測(cè)其多糖濃度,然后按公式(1)計(jì)算多糖提取得率。
多糖提取得率(%)=(多糖濃度×樣液體積)/樣品干重×100
式(1)
1.2.4 多糖分子量測(cè)定 采用高效凝膠排阻色譜-多角度激光光散射(SEC-MALLS/RID)法[20]。
SEC-MALLS/RID法是將樣品通過(guò)SEC進(jìn)行分離,然后用MALLS和RID分別在線收集樣品的激光散射信號(hào)和示差折光信號(hào),通過(guò)配套Astra軟件(Version 5.1,Wyatt Technology,Santa Barbara,CA,USA)對(duì)光散射數(shù)據(jù)進(jìn)行采集和分析,直接獲得樣品的重均分子量(weight-average molecular weight,Mw)。其中SEC條件如下:
色譜柱:TSK-GELG-6000PwxL色譜柱(7.8 mm×300 mm)與TSK-GELG-3000PwxL色譜柱(7.8 mm×300 mm)串聯(lián);檢測(cè)器:多角度激光光散射、示差檢測(cè)器;流動(dòng)相:0.9% NaCl溶液;流速:0.5 mL/min;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:100 μL。
1.3 數(shù)據(jù)處理
每組設(shè)三個(gè)平行實(shí)驗(yàn),然后應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0對(duì)各因素進(jìn)行方差分析,p<0.05認(rèn)為差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 擠壓膨化預(yù)處理單因素實(shí)驗(yàn)
2.1.1 物料粒度的影響 用未擠壓膨化預(yù)處理的靈芝物料作為對(duì)照,考察不同物料粒度對(duì)靈芝多糖提取得率的影響,結(jié)果如圖1所示。
圖1 物料粒度對(duì)多糖提取得率的影響Fig.1 Effects of granularity of material on the yield of soluble polysaccharides
由圖1可知,經(jīng)擠壓膨化預(yù)處理的靈芝物料較相同粒度未膨化的物料,其多糖提取得率提高20%~30%;未膨化和膨化處理的靈芝物料,其多糖提取得率均隨物料粒度的變化而變化,經(jīng)單因素方差分析,物料粒度對(duì)靈芝多糖提取得率的影響不顯著(p>0.05)。靈芝子實(shí)體的致密結(jié)構(gòu)會(huì)影響提取過(guò)程中的傳質(zhì),適當(dāng)粉碎可增加物料的比表面積,保證物料與水充分混合,促進(jìn)多糖溶出,但物料粒度過(guò)大時(shí),會(huì)造成物料傳輸困難,影響擠壓膨化效果。結(jié)合設(shè)備條件和實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本研究選擇物料粒度為60目,在此條件下,靈芝物料未膨化和膨化處理的多糖提取得率分別為4.11%、5.34%。
2.1.2 固液比的影響 固液比對(duì)靈芝多糖提取得率的影響如圖2所示。
圖2 固液比對(duì)多糖提取得率的影響Fig.2 Effects of water addition on the yield of soluble polysaccharides
在擠壓膨化過(guò)程中,水具有增塑和導(dǎo)熱等作用,會(huì)對(duì)物料在擠壓機(jī)套筒內(nèi)的混合程度和流動(dòng)方式產(chǎn)生影響[21]。由圖2可知,隨著固液比增加,靈芝多糖提取率呈先增后減的趨勢(shì);固液比為1∶3時(shí),多糖提取得率為6.12%,達(dá)到峰值。固液比較低時(shí),靈芝粉擠出前潤(rùn)濕度低,擠出過(guò)程中產(chǎn)生的蒸汽量過(guò)少,無(wú)法有效破壞靈芝子實(shí)體的致密結(jié)構(gòu),擠壓膨化的作用效果較差;而固液比過(guò)高時(shí),擠壓過(guò)程中物料流動(dòng)性加快,物料與螺桿之間摩擦減小,所收到的壓力、摩擦力和剪切力減小,導(dǎo)致物料未經(jīng)充分改性處理即被擠出,降低了擠壓膨化的作用效果。經(jīng)單因素方差分析,固液比對(duì)靈芝多糖提取得率的影響顯著(p<0.05)。
2.1.3 螺桿轉(zhuǎn)速的影響 螺桿轉(zhuǎn)速對(duì)靈芝多糖提取得率的影響如圖3所示。
圖3 螺桿轉(zhuǎn)速對(duì)多糖提取得率的影響Fig.3 Effects of screw speed on the yield of soluble polysaccharides
螺桿轉(zhuǎn)速會(huì)影響物料在套筒內(nèi)的滯留時(shí)間,進(jìn)而影響擠壓膨化過(guò)程中的擠壓和剪切作用[22]。由圖3可知,隨著螺桿轉(zhuǎn)速增加,靈芝多糖提取得率呈先增后減的趨勢(shì),螺桿轉(zhuǎn)速為175 r/min時(shí),多糖提取得率為6.81%,達(dá)到峰值。在雙螺桿擠壓膨化機(jī)腔內(nèi),兩根螺桿相互嚙合,物料在螺桿推動(dòng)作用下沿軸向前曲折前進(jìn),物料被分散后又重新組合,轉(zhuǎn)速過(guò)低時(shí),螺桿對(duì)靈芝物料的剪切和摩擦力度較小且易返料,熱能轉(zhuǎn)化少,擠壓膨化效果較差;而轉(zhuǎn)速過(guò)快時(shí),物料在膨化機(jī)腔內(nèi)停留時(shí)間過(guò)短,不易形成高壓,降低了擠壓膨化處理對(duì)物料致密結(jié)構(gòu)的改性效果。經(jīng)單因素方差分析,螺桿轉(zhuǎn)速的影響p<0.05,說(shuō)明其對(duì)靈芝多糖提取得率的影響顯著。
2.1.4 套筒溫度的影響 套筒溫度對(duì)靈芝多糖提取得率的影響如圖4所示。
圖4 套筒溫度對(duì)多糖提取得率的影響Fig.4 Effects of barrel temperature on the yield of soluble polysaccharides
套筒內(nèi)溫度是物料吸收熱量的來(lái)源,直接影響擠壓膨化的作用效果[23]。由圖4可知,隨著套筒溫度增加,靈芝多糖提取得率先逐漸增加,溫度到160 ℃時(shí),多糖提取得率為6.36%,達(dá)到峰值。隨著溫度繼續(xù)增加,靈芝多糖提取得率又逐漸減少。套筒溫度較低時(shí),水分子與物料作用不夠充分,物料膨化程度不高,靈芝子實(shí)體致密結(jié)構(gòu)無(wú)法得到有效破壞。適當(dāng)高溫可促進(jìn)水分子與物料相互作用,促進(jìn)靈芝纖維質(zhì)超聚結(jié)構(gòu)解體,有利于多糖溶出;但當(dāng)套筒溫度過(guò)高時(shí),擠出程度過(guò)于劇烈,水分蒸發(fā)速度過(guò)快,部分多糖可能會(huì)出現(xiàn)降解,使大分子多糖降解為小分子多糖,甚至寡糖[16],從而降低了多糖提取得率。經(jīng)單因素方差分析,套筒溫度的影響p<0.05,說(shuō)明其對(duì)靈芝多糖提取得率的影響顯著。
2.2 正交實(shí)驗(yàn)
正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。
表2 擠壓膨化預(yù)處理正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of orthogonal test on extrusion conditions
由表2可知,在物料粒度為60目時(shí),各因素對(duì)靈芝多糖提取得率的影響程度由高到低依次為:A>B>C,即套筒溫度>固液比>螺桿轉(zhuǎn)速;正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到雙螺桿擠壓膨化預(yù)處理提取靈芝多糖最佳工藝條件為:A2B2C1即套筒溫度160 ℃,固液比1∶3,螺桿轉(zhuǎn)速150 r/min。在最優(yōu)組合條件下進(jìn)行提取,實(shí)際的靈芝多糖提取得率為7.92%,與同粒度未經(jīng)擠壓膨化預(yù)處理的靈芝多糖提取得率(4.11%)相比,擠壓膨化預(yù)處理后靈芝多糖提取得率提高了92.7%。
2.3 粗多糖分子量分布對(duì)比
不同靈芝多糖樣品的SEC色譜圖如圖5所示。
圖5 靈芝多糖樣品的SEC圖譜Fig.5 Chromaogram of different GLP by SEC注:GLP-W:未經(jīng)擠壓膨化預(yù)處理的靈芝多糖;GLP-E:擠壓膨化預(yù)處理后的靈芝多糖。
由圖5可知,兩種靈芝多糖的SEC色譜圖具有相似的色譜峰。GLP-W峰1的重均分子量為7.813×104,GLP-E峰1的重均分子量為1.321×104;同時(shí),GLP-W和GLP-E峰2的重均分子量均較小(分子量低于5000 Da),無(wú)法有效分離和準(zhǔn)確測(cè)定。結(jié)果說(shuō)明,擠壓膨化預(yù)處理會(huì)增加靈芝多糖中低分子量多糖的比例,這可能是由于擠壓膨化預(yù)處理對(duì)靈芝多糖的分子量有一定的降低作用,或是擠壓膨化預(yù)處理促進(jìn)了低分子量靈芝多糖的有效溶出,從而增加了低分子量多糖的比例,結(jié)果和原因還有待進(jìn)一步研究。
在物料粒度為60目的條件下,通過(guò)對(duì)靈芝子實(shí)體雙螺桿擠壓膨化預(yù)處理?xiàng)l件摸索的單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn),獲得靈芝子實(shí)體擠壓膨化預(yù)處理的最佳參數(shù)為:套筒溫度160 ℃,固液比1∶3,螺桿轉(zhuǎn)速150 r/min;擠壓膨化各參數(shù)對(duì)靈芝多糖提取得率影響的顯著性次序依次為:套筒溫度>固液比>螺桿轉(zhuǎn)速。在最佳工藝條件下,靈芝多糖提取得率為7.92%,較同粒度未預(yù)處理靈芝物料的多糖提取得率(4.11%)提高了92.7%。這表明,在提取前對(duì)靈芝子實(shí)體進(jìn)行雙螺桿擠壓膨化預(yù)處理,可顯著提高靈芝多糖的提取得率。通過(guò)SEC-MALLS/RID法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),擠壓膨化預(yù)處理會(huì)增加靈芝多糖中低分子量多糖的比例,其原因還有待進(jìn)一步研究。
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Effect of twin-screw extrusion on polysaccharide extraction fromGanodermalucidum
YAN Zheng1,LI Shuang-shi1,YANG Guo-wei1,WANG Yue-peng2,LUO Zhong-zhi2,HAO Li-min2,*
(1.College of Bioengineering,Beijing Polytechnic,Beijing 100176,China;2.Institute of Quartermaster Equipment,General Logistics Department of People’s Liberation Army,Beijing 100010,China)
In order to increase the yield of soluble polysaccharides,the fruit body ofGanodermalucidumwas subjected to twin-screw extrusion before hot-water extraction. The solid-liquid ratio,rotary speed and barrel temperature of screw were optimized through single factor and orthogonal experiment according to the yield of soluble polysaccharides. The comparison between screw effects on polysaccharides molecular weight distribution were carried out using high performance size exclusion chromatography coupled with multiangle laser light scattering(SEC-MALLS/RID).When the particle diameter was 60 mesh,the optimum conditions were as follows,the barrel temperature 160 ℃,solid-liquid ratio 1∶3,rotary speed of screw 150 r/min. Under this condition,the yield of soluble polysaccharides was 92.7% higher than before,reached 7.92%. It means that the yield of solubleGandermalucidumpolysaccharides can be increased by twin-screw extrusion to a great extent,and the ratio of low-molecular weight polysaccharides increased after twin-screw extrusion.
twin-screw extrusion;Ganodermalucidum;polysaccharides;extraction;molecular weight distribution
2016-10-18
閆征(1978-),男,博士,講師,研究方向:食品生物技術(shù),E-mail:bioyanzheng@163.com。
*通訊作者:郝利民(1969-),男,博士,教授,研究方向:食品生物技術(shù)與軍用功能食品,E-mail:hlm2005@163.com。
軍隊(duì)科研項(xiàng)目(AX110C002);軍需所科研項(xiàng)目(HX-04-13-022);軍隊(duì)科研項(xiàng)目(BX115C007);北京市屬高等學(xué)校人才強(qiáng)教計(jì)劃資助項(xiàng)目(PXM2016_014306_000005)。
TS255.1
B
1002-0306(2017)08-0280-05
10.13386/j.issn1002-0306.2017.08.046