羊肉產(chǎn)品中的布魯氏菌污染及其風險傳遞調(diào)查

（重慶市動物疫病預防控制中心，重慶 401120）

羊肉產(chǎn)品中的布魯氏菌污染及其風險傳遞調(diào)查

謝建華，周 莉，汪子淳，葉潔瑩，梁望旺，楊澤林，熊仲良

（重慶市動物疫病預防控制中心，重慶 401120）

[目的]了解羊肉產(chǎn)品的布魯氏菌污染情況和風險傳遞過程。[方法]對養(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)的羊及羊肉產(chǎn)品進行取樣調(diào)查。[結果]屠宰環(huán)節(jié)布魯氏菌檢出率從高到低依次為羊內(nèi)臟（3.14%）、羊肉（2.96%）和環(huán)境（1.11%）；大中型屠宰場布魯氏菌檢出率（6.23%）高于小型屠宰場（0.48%）；控制性結果表明在不發(fā)生二次污染的情況下，僅可從內(nèi)臟中檢出布魯氏菌；子宮（77.78%）和脾臟（46.67%）存在布魯氏菌的風險較大，不表現(xiàn)臨床癥狀的羊子宮也有帶菌風險；屠宰環(huán)節(jié)布魯氏菌感染抗體陽性率為1.13%，羊肉產(chǎn)品和環(huán)境中均存在布魯氏菌污染；屠宰環(huán)節(jié)工作人員對布魯氏菌病防控的認識不到位，本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)2名從業(yè)人員被感染。[結論]存在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)的布魯氏菌病感染羊進入屠宰生產(chǎn)鏈的風險。

布魯氏菌??；羊肉產(chǎn)品；污染；風險傳遞

布魯氏菌?。˙rucellosis），以下簡稱布病，又稱地中海弛張熱、馬耳他熱或波狀熱，是由布魯氏菌（Brucel la）引起的變態(tài)反應性人獸共患傳染病[1]。根據(jù)生物學特性和主要宿 主，將傳統(tǒng)的布魯氏菌為括6個種19個型，即羊種（B. melitensis，3個型）、牛種（B. abortus，8個型）、豬種（B.Suis，5個型）、犬種（B.canis）、綿羊附睪種（B.ovis）和沙林鼠種（B. neotormae）。近年來又相繼分離出鯨種（B.ceti）、鰭種（B.pinnipedialis）、田鼠種（B.microti）和未知宿主的B.inopinata[2]。牛種、羊種和豬種布魯氏菌對人均有很強的致病性，其中尤以羊種的致病力最強，且約80%的感染是由羊型布魯菌引起的[3]。人感染后表現(xiàn)為長期發(fā)熱、多汗、生殖系統(tǒng)疾病、關節(jié)痛、肝脾腫大，以及肌肉-骨骼系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的嚴重并發(fā)癥等，病情嚴重者喪失勞動力[3]。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將該病列為須通報的動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。據(jù)統(tǒng)計，布魯氏菌病每年造成全球經(jīng)濟損失近30億美元，對人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展構成重大威脅[2，4]。

近年來，由于市場一體化等原因，我國活羊及其產(chǎn)品的大范圍流動極其頻繁，疫情極易跨區(qū)域傳播，布病疫情形勢依然嚴峻。由于羊布魯氏菌病臨床上常為隱性感染，除了懷孕母畜出現(xiàn)流產(chǎn)外，其他羊群并無臨床特征，很難從外觀上鑒別。鑒于現(xiàn)行宰前檢疫辦法和實驗室抽檢制度，很難阻止部分帶菌羊進入屠宰環(huán)節(jié)，為驗證羊產(chǎn)品中布魯氏菌污染風險，了解生產(chǎn)鏈條中的布魯氏菌污染風險關鍵點、風險來源以及風險傳遞過程，本研究對羊養(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)進行了取樣調(diào)查，以期找到羊肉產(chǎn)品病原帶毒及生產(chǎn)環(huán)節(jié)污染的證據(jù)，從而獲得控制風險關鍵點，保障羊產(chǎn)品質(zhì)量安全，促進公共衛(wèi)生安全。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 取樣品種及數(shù)量。屠宰環(huán)節(jié)：分別在大中型和小型屠宰場取樣，全年共取羊肉405份、羊內(nèi)臟446份、環(huán)境樣品180份和血清353份?？刂菩詫嶒灒喊l(fā)病期（有臨床癥狀）和隱性感染期（無臨床癥狀）各15只羊，分別取肌肉、血、肝、脾、腎、心、肺、淋巴結、胃、腸和子宮等部位進行帶菌風險驗證。

1.1.2 主要試劑。布氏肉湯，購自BD公司；天隆科技核酸提取試劑盒（磁珠法），購自天隆科技有限公司；布魯氏菌PCR檢測試劑盒，購自北京世紀元亨有限公司；布魯氏菌抗體RID檢測試劑盒，購自INGEZIM IDR；布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗陽性血清、布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗陰性血清和布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗抗原，均購自青島易邦生物工程有限公司；布魯氏菌病抗體競爭ELISA檢測試劑盒，購自SVANOVIR。

1.2 方法

1.2.1 病原學檢測。對羊肉、羊內(nèi)臟和環(huán)境拭子，先經(jīng)布氏肉湯37 ℃增菌培養(yǎng)72 h，按照細菌基因組DNA提取試劑盒說明提取核酸，用于布魯氏菌病原學PCR檢測。

1.2.2 血清抗體檢測。采用虎紅平板凝集試驗（RBT）（GB/T 18646）初篩，競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗（cELISA）確診，對以上任何一種方法檢測呈陽性的樣品，用布病放射免疫擴散試驗（RID）方法進一步檢測，區(qū)分是否為野毒感染。

1.2.3 檢測數(shù)據(jù)分析。采用t檢驗方法，對樣品檢測數(shù)據(jù)進行生物學統(tǒng)計分析。

2 結果

2.1 羊產(chǎn)品布魯氏菌污染調(diào)查結果

2.1.1 布病血清抗體檢測結果。從不同地區(qū)來看，西北地區(qū)布病免疫抗體（RBT和cELISA）陽性率最高，與其他地區(qū)相比差異顯著，同時還存在布魯氏菌感染抗體（表1）。

表1 屠宰環(huán)節(jié)羊布病血清抗體檢測結果

2.1.2 不同屠宰規(guī)模和樣品類型布魯氏菌檢測結果。從屠宰規(guī)模來看，大中型屠宰場存在布魯氏菌的風險較高（6.23%），與小型屠宰場相比差異顯著；從樣品類型來看，羊內(nèi)臟、羊肉和環(huán)境中都有存在布魯氏菌的風險（表2）。

2.1.3 不同地區(qū)羊產(chǎn)品中布魯氏菌檢測結果。從不同地區(qū)來看，來自一類地區(qū)（西北和華北）的動物存在布魯氏菌的風險較高（表3）。

2.2 布魯氏菌病控制性試驗檢測結果

2.2.1 急性發(fā)病期與隱性感染期間布魯氏菌檢測結果。急性發(fā)病期（其中母羊9只）布魯氏菌檢測結果顯示：子宮（77.78%）和脾臟（46.67%）存在布魯氏菌的風險較大，與其他臟器相比差異顯著，其次是腎臟和抗凝血，其他部位均未檢測到布魯氏菌。確診已感染，但近期無臨床癥狀 的15只隱性 感染期間的羊（其中母羊8只）中，在4只母羊的子宮內(nèi)檢測到布魯氏菌核酸，其他羊均未檢出，說明這些羊表面無臨床癥狀，但其子宮仍存在帶菌風險（表4）。

表2 不同屠宰規(guī)模和樣品類型布魯氏菌檢測結果

表3 不同地區(qū)羊產(chǎn)品中布魯氏菌檢測結果

表4 急性發(fā)病期和隱性感染期布魯氏菌檢測結果

2.2.2 從業(yè)人員的風險調(diào)查結果。屠宰環(huán)節(jié)從業(yè)人員問卷調(diào)查顯示，屠宰企業(yè)部分相關人員，尤其是少數(shù)民族地區(qū)的人員，對布魯氏菌病不知曉且無個人防護意識；存在屠宰人員私自攜帶未經(jīng)處理的羊產(chǎn)品（如羊胎盤）回家食用的現(xiàn)象。通過問卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在取樣的屠宰和養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中，各有1名從業(yè)人員感染布病。

3 風險分析

3.1 屠宰環(huán)節(jié)羊產(chǎn)品布魯氏菌風險分析

不同地區(qū)來源的羊產(chǎn)品取樣調(diào)查結果表明，來自西北地區(qū)的產(chǎn)品帶菌率為4.94%，而來自西南地區(qū)的未檢出，說明西北地區(qū)作為我國布病防控一類地區(qū)，羊產(chǎn)品帶菌風險相對較高。通過取樣調(diào)查發(fā)現(xiàn)，屠宰環(huán)節(jié)的羊產(chǎn)品和環(huán)境均存在布魯氏菌污染風險；從不同規(guī)模來看，大中型屠宰場的污染風險（6.23%）高于小型屠宰場（0.48%），原因主要是小型屠宰場清洗消毒徹底，羊的來源主要局限于當?shù)?，而大中型屠宰場待宰羊多、工作量較大，可能存在清洗不徹底、消毒不到位的問題；另一方面，羊需求量大、來源廣，尤其是從一類地區(qū)來源的羊較多，從而加大了污染的概率。

3.2 風險傳遞過程分析

控制性試驗結果表明：發(fā)病期子宮、脾臟、腎臟和血液中均有布魯氏菌被檢出，與2012年趙兵等[5]的報道相似，說明發(fā)病期內(nèi)臟和血液帶菌風險較大，這可能與布魯氏菌多寄生于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)有關[1]；對于隱性感染期的羊，僅在其子宮中檢出布魯氏菌，其他部位未檢出，說明對于無臨床癥狀的感染羊，其子宮是帶菌的最大風險源。

從控制性試驗結果可見，無論是急性發(fā)病期，還是隱性感染期的羊，在不發(fā)生二次污染的情況下，僅可從內(nèi)臟中檢出布魯氏菌；但屠宰環(huán)節(jié)布病感染抗體陽性率為1.13%，且羊產(chǎn)品和屠宰環(huán)境中均存在布魯氏菌污染，可見存在布病感染羊只因宰前檢疫漏檢而進入屠宰生產(chǎn)鏈的風險。

3.3 從業(yè)人員的風險分析

結合問卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)的從業(yè)人員大多不了解布病，也沒有個人防護意識，更沒有采取個人防護措施，且養(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)均出現(xiàn)人感染布病病例，說明養(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)的從業(yè)人員是高風險人群，若防護措施不當極易導致布病感染[6-8]。

4 建議

近幾年，布病疫情有上升趨勢，動物發(fā)病數(shù)逐年增多，人間發(fā)病數(shù)也隨之增高。人間布病與動物布病密切相關，呈一定的線性關系[3]。因此，畜牧獸醫(yī)部門除了要加強與衛(wèi)生計生、工商等部門的協(xié)作，強化信息溝通和聯(lián)防聯(lián)控外，還應做好宰前檢疫，防止布魯氏菌從養(yǎng)殖環(huán)節(jié)進入屠宰環(huán)節(jié)。然而傳統(tǒng)意義上的宰前檢疫無法檢出隱性感染期的帶菌羊只，因此應該考慮引入敏感性較高的檢測方法，盡可能檢出帶菌羊只。在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)應繼續(xù)強化布病的監(jiān)測凈化工作，尤其是加強對羊的監(jiān)測凈化，優(yōu)先從種羊開始，爭取減少源頭上的布病傳播風險。同時還應加強對從業(yè)人員的職業(yè)培訓，尤其是布病認知和防護知識培訓，提升個人防護意識和水平，使其保持健康正確的工作和生活習慣，并定期體檢，一旦發(fā)現(xiàn)感染布病，應緊急就醫(yī)，以獲得良好治療預期。

[1] 李長友，李明. 動物布魯氏菌病防治指導手冊[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012：134-137.

[2] 邱宇鶴，王錦何，淑云. 人布魯氏菌病的流行、檢測與防治研究進展[J]. 實用檢驗醫(yī)師雜志，2015，7（3）：187-188.

[3] 田克恭，李明. 動物疫病診斷技術理論與應用[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2014：209-218.

[4] 吐爾洪·努爾，谷文喜. 布魯菌病研究進展[J]. 動物醫(yī)學進展，2007，28（7）：82-87.

[5] 趙兵，彭傳真，張志新，等. 布魯氏菌弱毒疫苗粘膜免疫及檢測方法的研究[J]. 中國預防獸醫(yī)學報，2012，34（8）：658-661.

[6] 周莉，侯權書，黃誠，等. 布魯氏菌病的危害與個人防護[J]. 中國動物檢疫，2016，33（6）：52-54.

[7] 張衛(wèi)源，陳俊生，董軍青，等. 鶴壁市人間布魯氏菌病疫情分析及控制策略探討[J]. 河南預防醫(yī)學雜志，2014，25（5）：404-405.

[8] 陳虎英，葛興農(nóng). 延安市畜間布魯氏菌病流行概況、防治現(xiàn)狀與對策[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志，2014，5（33）：93-94.

（責任編輯：杜憲）

Investigation on Brucella Contamination in Mutton Products and Its Risk Transmission

Xie Jianhua，Zhou Li，Wang Zichun，Ye Jieying，Liang Wangwang，Yang Zelin，Xiong Zhongliang
（Chongqing Animal Disease Prevention and Control Center，Chongqing 401120）

[Objective]In order to recognizeBrucellacontamination in mutton and fi nd out its risk transmission process.[Methods]An investigation was carried out towards sheep and mutton products in the links of sheep breeding and slaughtering.[Results]From high to low，the detection rates ofBrucellawere 3.14%（samples were from viscera），2.96%（mutton），and 1.11%（environment）. Otherwise，the detection rates in large and medium slaughterhouses（6.23%）were higher than that in small slaughterhouses（0.48%）. The control test results showedBrucellacould only be detected in viscera in the absence of secondary contamination. Probability of detectingBrucellafrom uteri and spleens was high，the ratios of which were 77.78% and 46.67%，respectively. It was worth noting that，sheep uteri without clinic symptoms also had infection risk. The antibody positive rate ofBrucellain the slaughtering link was 1.13%，andBrucellawas found in mutton products and the environment. Besides，the staffs in slaughtering link lacked enough awareness in protecting themselves to avoidBrucellainfection，and 2 practitioners were confi rmed to be infected byBrucellain this investigation.[Conclusion]The risk ofBrucellaspreading in the whole chain from sheep breeding to slaughtering existed actually.

Brucellosis；mutton products；contamination；risk transmission

S855.1

：B

：1005-944X（2017）05-0031-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.05.009

農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全風險評估項目（GJFP2017007）；農(nóng)業(yè)部援疆項目“動物產(chǎn)品中七種主要人獸共患致病菌風險評估技術研究”（cstc2016shmszx80121）

熊仲良