• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    2株番木瓜根際促生菌的解磷解鉀作用

    2017-05-11 20:20:46葉維雁吳海波劉惠民熊智
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年6期
    關(guān)鍵詞:番木瓜解磷鑒定

    葉維雁++吳海波++劉惠民++熊智++王櫻潼

    摘要:用平板涂布、劃線與固體平板-透明圈法從番木瓜根際土壤中篩選出2株解磷解鉀細(xì)菌(PK-1、PK-2)。通過搖瓶培養(yǎng),測(cè)定PK-1、PK-2發(fā)酵液中水溶性磷、水溶性鉀含量和磷、鉀總量;分析PK-1、PK-2解磷解鉀能力;對(duì)PK-1、PK-2進(jìn)行分子鑒定。結(jié)果表明,PK-1溶解無(wú)機(jī)磷能力的溶量為1.63 μg/mL,PK-2溶量為 17.26 μg/mL,溶解無(wú)機(jī)磷能力表現(xiàn)為PK-1﹤PK-2,即PK-2具有更強(qiáng)的解無(wú)機(jī)磷能力;PK-1溶解有機(jī)磷能力的溶量為 8.49 μg/mL,PK-2溶量為2.38 μg/mL,溶解有機(jī)磷能力表現(xiàn)為PK-1>PK-2,即PK-1的解有機(jī)磷能力更好;PK-1溶解鉀能力的溶量為8.15 μg/mL,PK-2溶量為8.49 μg/mL,溶解鉀能力表現(xiàn)為PK-1﹤PK-2,PK-1 和PK-2的解鉀能力接近。經(jīng)16S rDNA序列分析,初步鑒定PK-1為腸桿菌屬(Enterobacter),PK-2為芽孢桿菌屬(Bacillus)。供試菌株P(guān)K-1和PK-2具有良好的解磷解鉀功能,可為進(jìn)一步研制專用的番木瓜微生物肥料提供菌種資源和依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:番木瓜;根際促生菌;解磷;解鉀;鑒定;腸桿菌層;芽孢桿菌屬

    中圖分類號(hào): S182文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號(hào):1002-1302(2017)06-0247-04

    植物根際促生菌(plant growth promoting rhizobacteria,簡(jiǎn)稱PGPR)指生存于植物根際系統(tǒng),并能促進(jìn)或調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)的一類微生物,通常具有固氮、溶磷、解鉀、產(chǎn)生植物激素、分泌抗生素等生理活性[1-4]。目前,研究比較多的是PGPR的解磷、解鉀、固氮功能。磷和鉀是植物生長(zhǎng)必需的大量營(yíng)養(yǎng)元素,而我國(guó)土壤中可供植物直接吸收利用的磷、鉀資源有限,在生產(chǎn)實(shí)踐中,為了提高作物產(chǎn)量,每年都要向土壤中施入大量的可溶性磷肥和鉀肥,造成土壤板結(jié)、地力下降、環(huán)境污染、農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)下降等問題[5]。PGPR在其生命活動(dòng)過程中通常能將土壤礦物質(zhì)中難以被植物吸收的磷、鉀釋放出來(lái),轉(zhuǎn)化成易溶性的養(yǎng)分,提升有效磷、有效鉀的供應(yīng)水平,促進(jìn)植物生長(zhǎng)。隨著人們環(huán)保意識(shí)的日益提高,應(yīng)用PGPR的解磷解鉀能力促進(jìn)植物生長(zhǎng)及提高其產(chǎn)量越來(lái)越受到關(guān)注,PGPR作為一種寶貴的資源逐漸成為研究熱點(diǎn)[6]。番木瓜(Carica papaya L.)是熱帶、亞熱帶地區(qū)廣泛栽培的多年生常綠大型草本植物,別稱萬(wàn)壽果、木瓜,果實(shí)含有豐富的糖類、胡蘿卜素、木瓜酶,富含鈣、磷、鉀等礦物質(zhì),還具有清除自由基、增強(qiáng)人體免疫力、抗病原體等保健作用[7-8]。目前,PGPR解磷解鉀作用在許多作物上的應(yīng)用已得到諸多報(bào)道,但在番木瓜上的應(yīng)用卻鮮有報(bào)道。因此,開展番木瓜PGPR菌株解磷解鉀能力的研究,對(duì)研制新型微生物肥料以提高番木瓜的產(chǎn)量和質(zhì)量具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

    本研究從番木瓜根際土壤中篩選出2株P(guān)GPR,并對(duì)其解磷解鉀作用進(jìn)行分析,旨在為進(jìn)一步研究番木瓜PGPR的生態(tài)適應(yīng)性,研制番木瓜的微生物肥料提供理論依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1儀器與試劑

    所用儀器主要有超凈工作臺(tái)、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、立式壓力蒸汽滅菌器、恒溫培養(yǎng)振蕩器、原子吸收分光光度計(jì)、紫外-可見分光光度計(jì)、高速冷凍離心機(jī)、電子分析天平、純水機(jī)、恒溫水浴鍋、多功能梯度PCR儀、電泳儀、凝膠成像儀、微波爐、乙醇燈、1 L移液器;所用試劑主要有瓊脂、瓊脂糖、蛋白胨、酵母浸出汁、牛肉膏、氯化鈉、葡萄糖、2×Taq PCR MasterMix。

    1.2土樣

    采自云南省西雙版納州普文鎮(zhèn)的番木瓜地,土壤系番木瓜的根際土壤。

    1.3培養(yǎng)基

    1.3.1菌株分離純化培養(yǎng)基菌株的分離純化采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(NA)。

    1.3.2解無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基(1)解無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基:葡萄糖1000 g,Ca3(PO4)2 5.00 g,MgCl2 5.00 g,MgSO4·7H2O 0.25 g,KCl 0.20 g,(NH4)2SO4 0.10 g,瓊脂15.00 g,溶于去離子水中,加熱溶化,混勻,加去離子水定容至1 L,調(diào)pH值為7.4,分裝于250 mL錐形瓶中,121 ℃滅菌20 min,分裝。(2)解無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基:除缺少瓊脂外,其他物質(zhì)含量與解無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基相同。

    1.3.3解有機(jī)磷培養(yǎng)基解有機(jī)磷固體培養(yǎng)基:

    (1)蒙金娜基礎(chǔ)培養(yǎng)基。葡萄糖10.00 g、(NH4)2SO4 050 g、MgSO4·7H2O 0.30 g、NaCl 0.30 g、KCl 0.30 g、FeSO4·7H2O 0.36 g、MnSO4·H2O 0.03 g、CaCO3 500 g、瓊脂15.00 g,溶于去離子水中,加熱溶化,混勻,加去離子水定容至1.00 L,調(diào)pH值至7.4,分裝于250 mL錐形瓶中,121 ℃ 滅菌20 min,分裝。

    (2)卵黃稀釋液。用乙醇擦凈雞蛋外殼,用解剖刀切破雞蛋兩端,流去蛋清后將蛋黃流入已滅菌的錐形瓶中,約加入等量的無(wú)菌水,搖勻。

    (3)將蒙金娜基礎(chǔ)培養(yǎng)基熔化,冷卻至50 ℃后,立即加入卵黃液,每100 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加卵黃稀釋液3~4 mL作為有機(jī)磷源,混勻后分裝于培養(yǎng)皿內(nèi)凝成平板。

    解有機(jī)磷液體培養(yǎng)基:除缺少瓊脂外,其他物質(zhì)含量與解有機(jī)磷固體培養(yǎng)基相同。

    1.3.4解鉀培養(yǎng)基(1)解鉀固體培養(yǎng)基:蔗糖10.0 g,酵母膏0.5 g,(NH4)2SO4 1.0 g,Na2HPO4 2.0 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,CaCO3 1.0 g,鉀長(zhǎng)石粉10.0 g,瓊脂15.0 g,溶于去離子水中,加熱溶化,混勻,加去離子水定容至1.0 L,調(diào)pH值至7.4,分裝于250 mL錐形瓶中,121 ℃滅菌20 min,分裝。(2)解鉀液體培養(yǎng)基:除缺少瓊脂外,其他物質(zhì)含量與解鉀固體培養(yǎng)基相同。

    1.4分離及純化菌株

    取番木瓜根,用無(wú)菌去離子水輕柔沖洗,以去除外圍土壤,用刷子刷取番木瓜根際土1 g,加入裝有100 mL無(wú)菌去離子水和若干玻璃珠的錐形瓶中,150 r/min混合30 min,使根際土壤中的微生物細(xì)胞充分分散,制作根際土混合液。將根際土混合液梯度稀釋后,分別從10-2、10-3、10-4、10-5、10-6稀釋度中吸取100 μL稀釋液涂布于NA固體培養(yǎng)基上,設(shè)3個(gè)重復(fù)。于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),根據(jù)菌落顏色、形狀、大小等特征,觀察并挑取不同的單菌落在NA培養(yǎng)基上劃線純化,連續(xù)3~5次劃線,獲取純化的菌株,4 ℃斜面保存,備用。

    1.5解磷能力的測(cè)定

    1.5.1解磷能力的平板測(cè)定(1)解無(wú)機(jī)磷:將活化好的菌株點(diǎn)接于解無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基平板上,于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d,觀察透明圈的產(chǎn)生情況,并測(cè)量透明圈直徑(D)和菌落直徑(d),根據(jù)D/d值大小確定解無(wú)機(jī)磷能力的大小[9]。 (2)解有機(jī)磷:與解無(wú)機(jī)磷能力平板測(cè)定方法相同。

    1.5.2解磷能力的搖瓶測(cè)定解無(wú)機(jī)磷:(1)種子液制備。菌株經(jīng)平板劃線活化后,挑取1環(huán)接入40 mL NA液體培養(yǎng)基中,以不接菌的NA培養(yǎng)基為對(duì)照,37 ℃、150 r/min恒溫?fù)u床培養(yǎng)2~4 d,制備菌液。用分光光度計(jì)測(cè)定各菌液的吸光度(600 nm),最后用無(wú)菌去離子水將各菌液稀釋成相同吸光度作為種子液。(2)發(fā)酵液制備。按40 mL解無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基接入1 mL種子液接入菌種,同時(shí)接入(1)中的NA培養(yǎng)基 1 mL 作為對(duì)照,發(fā)酵液及對(duì)照在37 ℃、150 r/min條件下培養(yǎng)7 d。(3)發(fā)酵液處理。發(fā)酵液在冷凍離心機(jī)下以 8 000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心15 min后取上清液2 mL移至50 mL容量瓶中,用鉬銻抗比色法[10]測(cè)定發(fā)酵液中可溶性磷含量。細(xì)菌溶解無(wú)機(jī)磷的量=發(fā)酵液可溶性磷含量-對(duì)照培養(yǎng)液可溶性磷含量。

    發(fā)酵液靜置30 min,磷酸鈣沉底后,移取2 mL上清液至50 mL錐形瓶中,加H2O2溶液0.5 mL,微波爐加熱消解,沸騰后改用小火維持,濃縮至1~2 mL后關(guān)閉微波爐用余熱將溶液蒸干,以除掉過量的H2O2溶液,冷卻,用5 mL去離子水沖洗錐形瓶?jī)?nèi)壁,加濃硫酸2滴(約0.1 mL),搖勻后小心轉(zhuǎn)動(dòng)錐形瓶,使酸液同內(nèi)壁接觸,然后加熱1~2 min,使殘?jiān)芙?,溶液?~4 mL并冷卻后,轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中,用去離子水定容至50 mL作為待測(cè)液。按上述步驟處理對(duì)照。待測(cè)液8 000 r/min離心15 min,取上清液,用鉬銻抗比色法測(cè)定發(fā)酵液中全磷含量。

    解有機(jī)磷:與解無(wú)機(jī)磷能力的搖瓶測(cè)定方法相同。

    細(xì)菌溶解有機(jī)磷的量=發(fā)酵液可溶性磷含量-對(duì)照培養(yǎng)液可溶性磷含量。

    1.6解鉀能力的測(cè)定

    1.6.1解鉀能力的平板測(cè)定將活化好的菌株點(diǎn)接于解鉀固體培養(yǎng)基平板上,于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d,觀察透明圈的產(chǎn)生情況,并測(cè)量透明圈直徑(D)和菌落直徑(d),根據(jù)D/d值大小確定菌株的解鉀能力。

    1.6.2解鉀能力的搖瓶測(cè)定(1)種子液制備。菌種經(jīng)平板劃線活化后,挑取1環(huán)接入40 mL NA培養(yǎng)基中,以不接菌的NA培養(yǎng)基為對(duì)照,37 ℃、150 r/min恒溫?fù)u床培養(yǎng)2~4 d,制備菌液。用分光光度計(jì)測(cè)定各菌液的吸光度(600 nm),最后用無(wú)菌去離子水將各菌液稀釋成相同吸光度為種子液。(2)發(fā)酵液制備。按35 mL解鉀液體培養(yǎng)基接入1 mL種子液接入菌種,同時(shí)接入(1)中的NA培養(yǎng)基1 mL作為對(duì)照,發(fā)酵液及對(duì)照在37 ℃、150 r/min條件下培養(yǎng)7 d。(3)發(fā)酵液處理。發(fā)酵液在冷凍離心機(jī)下以8 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心 8 min,取上清液5 mL用去離子水稀釋8倍,使用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定有效鉀濃度。

    細(xì)菌溶解鉀的量=發(fā)酵液可溶性鉀含量-對(duì)照培養(yǎng)液可溶性鉀含量。

    發(fā)酵液靜置30 min,鉀長(zhǎng)石粉沉底后,移取5 mL上清液至50 mL錐形瓶中,加H2O2 溶液1.5 mL,微波爐加熱消解,沸騰后改用小火維持,濃縮至3 mL后關(guān)閉微波爐用余熱將溶液蒸干,以除掉過量的H2O2溶液,冷卻,用15 mL去離子水沖洗錐形瓶?jī)?nèi)壁,加濃硫酸5滴(約0.25 mL),搖勻后小心轉(zhuǎn)動(dòng)錐形瓶,使酸液同內(nèi)壁接觸,然后加熱1~2 min,使殘?jiān)芙猓芤菏?~8 mL并冷卻后,轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中,用去離子水定容至50 mL作為待測(cè)液。按上述步驟處理對(duì)照。待測(cè)液8 000 r/min離心8 min后,取上清液,用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定發(fā)酵液中全鉀含量。

    1.716S rDNA基因序列分析

    斜面保存的菌株經(jīng)NA液體培養(yǎng)基搖菌活化后使用離心柱型細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒(北京百泰克生物技術(shù)有限公司)提取細(xì)菌基因組DNA,保存于-20 ℃冰箱內(nèi)。以總DNA為模板,采用細(xì)菌16S rDNA通用引物[11]進(jìn)行PCR,擴(kuò)增16S rDNA近乎全長(zhǎng)片段。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,其序列為27F:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′和1 492R:5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′。

    PCR采用50 μL反應(yīng)體系:2×Taq PCR MasterMix 25.0 μL,10 μmol/L引物各2.5 μL,DNA模板1.0 μL(20 ng左右),滅菌去離子水補(bǔ)足至50.0 μL。

    PCR擴(kuò)增程序:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性1 min,58 ℃復(fù)性1 min,72 ℃延伸3 min,30個(gè)循環(huán);72 ℃延伸 5 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后送生工生物工程(上海)股份有限公司測(cè)序。根據(jù)測(cè)序所得16S rDNA序列在GenBank中Blast搜索同源序列。通過MEGA 6軟件,以鄰接法(Neighbour-Joining)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹,Bootstrap 值為1 000[12]。

    2結(jié)果與分析

    2.1解磷解鉀的平板測(cè)定

    從云南省西雙版納州普文鎮(zhèn)的番木瓜根際土壤里篩選得到2株解磷解鉀細(xì)菌,編號(hào)為PK-1和PK-2。通過固體平板法,根據(jù)透明圈直徑D與菌落直徑d的比值,即D/d值的大小初步測(cè)定菌株P(guān)K-1和PK-2的解磷解鉀能力。由表1可知,菌株P(guān)K-1和PK-2在解有機(jī)磷與解鉀能力方面都存在一定的差異。解有機(jī)磷方面,PK-1和PK-2的透明圈直徑都超過了12.00 mm,PK-1的D/d值達(dá)到3.48,大于 PK-2 的1.46,說明PK-1的解有機(jī)磷能力較強(qiáng);解鉀方面,PK-1與PK-2的透明圈直徑都超過了21.00 mm,PK-2的D/d值達(dá)到1.65,大于PK-1的1.26,說明PK-2的解鉀能力強(qiáng)于PK-1;解無(wú)機(jī)磷方面,PK-1和PK-2均未出現(xiàn)透明圈。

    2.2解磷解鉀的搖瓶測(cè)定

    對(duì)菌株P(guān)K-1和PK-2進(jìn)行7 d的解磷解鉀搖瓶培養(yǎng)后測(cè)得發(fā)酵液中無(wú)機(jī)磷全磷與可溶性磷含量、有機(jī)磷全磷與可溶性磷含量及全鉀與可溶性鉀含量(表2)。由表2可知,菌株P(guān)K-1和PK-2對(duì)無(wú)機(jī)磷、有機(jī)磷和鉀都表現(xiàn)出不同的降解作用。解無(wú)機(jī)磷(磷酸鈣)方面,PK-1和PK-2發(fā)酵液中全磷的質(zhì)量濃度分別為4.30、43.65 μg/mL,同時(shí)PK-1和PK-2的解磷量分別為1.63、17.26 μg/mL,說明PK-2解無(wú)機(jī)磷的能力明顯強(qiáng)于PK-1;在解有機(jī)磷(卵磷脂)方面,PK-1 和PK-2發(fā)酵液中全磷的質(zhì)量濃度分別為32.41、10.86 μg/mL,同時(shí)PK-1和PK-2的解磷量分別為8.49、2.38 μg/mL,說明PK-1對(duì)有機(jī)磷的溶解能力明顯強(qiáng)于 PK-2,與固體平板法測(cè)定的解有機(jī)磷能力的結(jié)果一致;解鉀方面,PK-1和PK-2發(fā)酵液中全鉀的質(zhì)量濃度分別為954、9.01 μg/mL,同時(shí)PK-1和PK-2的解鉀量分別為815、849 μg/mL,說明PK-2的解鉀能力略強(qiáng)于PK-1,與固體平板法測(cè)定的解鉀能力的結(jié)果一致。

    2.316S rDNA基因序列測(cè)定及分析

    提取的菌株P(guān)K-1和PK-2基因組DNA經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),條帶清晰,無(wú)非特異性條帶,可用作16S rDNA PCR擴(kuò)增的模板。菌株P(guān)K-1和PK-2的16S rDNA PCR 擴(kuò)增采用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),結(jié)果在1 485 bp處有1條明亮的特征條帶,并且無(wú)其他非特異性條帶(圖1)。

    將菌株P(guān)K-1和PK-2的16S rDNA基因測(cè)序所得序列,采用Blast進(jìn)行同源性比較,與GenBank中的核酸數(shù)據(jù)對(duì)比分析,選取同源性較高的代表菌株,以16S rDNA基因序列為基礎(chǔ),構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。從圖2中可以看出菌株P(guān)K-1與腸桿菌屬(Enterobacter)的細(xì)菌自然聚為1支,它的16S rDNA序列與河生腸桿菌[Enterobacter amnigenus (JQ063000)]有較高的同源性,相似度達(dá)100%,因此可鑒定菌株P(guān)K-1為腸桿菌屬。菌株P(guān)K-2與芽孢桿菌屬(Bacillus)聚為1群(圖3),它的16S rDNA序列與同溫層芽孢桿菌[Bacillus stratosphericus (KX262677)]有較高的同源性,相似度為100%,因此可將菌株P(guān)K-2鑒定為芽孢桿菌屬。

    3結(jié)論與討論

    從云南省西雙版納州普文鎮(zhèn)番木瓜根際土壤中篩選得到2株解磷解鉀細(xì)菌PK-1和PK-2,通過平板測(cè)定D/d值和搖瓶測(cè)定發(fā)酵液中的全磷、全鉀含量和可溶性磷、可溶性鉀含量評(píng)價(jià)其解磷、解鉀能力。在解磷解鉀能力的平板測(cè)定試驗(yàn)中,PK-1解有機(jī)磷的D/d值為3.48,大于PK-2的1.46;PK-2解鉀的D/d值為1.65,大于PK-1的1.26;解無(wú)機(jī)磷平板里PK-1和PK-2均沒有出現(xiàn)透明圈。解磷、解鉀能力的搖瓶測(cè)定試驗(yàn)中PK-2溶解無(wú)機(jī)磷的量為17.26 μg/mL,明顯高于PK-1的 1.63 μg/mL;PK-1溶解有機(jī)磷的量為8.49 μg/mL,明顯高于PK-2的2.38 μg/mL;PK-2溶解鉀的量為8.49 μg/mL,略高于PK-1的8.15 μg/mL。解有機(jī)磷和解鉀方面,菌株P(guān)K-1和PK-2在搖瓶測(cè)定試驗(yàn)和平板測(cè)定試驗(yàn)中的解磷、解鉀效果基本一致,這進(jìn)一步驗(yàn)證了固體平板試驗(yàn)的結(jié)果,說明溶解有機(jī)磷的能力為PK-1>PK-2,PK-2溶解鉀的能力大于PK-1但不顯著;解無(wú)機(jī)磷方面,菌株 PK-1和PK-2在平板測(cè)定試驗(yàn)中均無(wú)透明圈出現(xiàn),但在搖瓶測(cè)定試驗(yàn)中PK-1和PK-2表現(xiàn)出一定的解無(wú)機(jī)磷

    能力(PK-2>PK-1),造成這種現(xiàn)象的原因可能是PK-1和PK-2的菌體在固體和液體環(huán)境中解無(wú)機(jī)磷能力不同,也可能是因?yàn)楣腆w平板中磷酸鈣的濃度過大,PK-1和PK-2的菌體溶解了部分磷酸鈣但還不足以形成明顯的透明圈。解磷解鉀細(xì)菌在生長(zhǎng)過程中能分泌一些物質(zhì),并向周圍擴(kuò)散,使菌落周圍的培養(yǎng)基中磷酸鈣、卵磷脂和鉀長(zhǎng)石礦粉溶解呈透明狀,因而固體平板-透明圈法是判定菌株是否具有解磷、解鉀能力的常用方法,適合進(jìn)行解磷解鉀菌的初篩,但存在一定的局限性,使用搖瓶培養(yǎng)測(cè)定能對(duì)菌株的解磷、解鉀能力進(jìn)行量化,更為準(zhǔn)確和科學(xué)[13-15]。

    通過16S rDNA對(duì)菌株進(jìn)行初步鑒定,確定菌株P(guān)K-1屬于腸桿菌屬,菌株P(guān)K-2屬于芽孢桿菌屬,而腸桿菌屬和芽孢桿菌屬是較常見的解磷細(xì)菌和解鉀細(xì)菌[16-19]。菌株P(guān)K-1和PK-2同時(shí)具有較強(qiáng)的解磷、解鉀能力,這是一些其他的植物根際促生菌所不具備的特性,可進(jìn)一步研發(fā)成為番木瓜微生物肥料生產(chǎn)菌種,具有重要的理論意義和實(shí)踐價(jià)值。關(guān)于菌株P(guān)K-1和PK-2對(duì)番木瓜促生作用及對(duì)土壤微環(huán)境的影響等有待進(jìn)一步研究。

    參考文獻(xiàn):

    [1]康貽軍,程潔,梅麗娟,等. 植物根際促生菌的篩選及鑒定[J]. 微生物學(xué)報(bào),2010,50(7):853-861.

    [2]Ahmad F,Ahmad I,Khan M S. Screening of free-living rhizospheric bacteria for their multiple plant growth promoting activities[J]. Microbiological Research,2008,163(2):173-181.

    [3]Verma J P,Yadav J,Tiwari K N,et al. Impact of plant growth promoting rhizobacteria on crop production[J]. International Journal of Agricultural Research,2010,5(11):954-983.

    [4]Sheng X F,Huang W Y. The conditions of releasing K-releasing by a silicate bacterial strain NBT[J]. Agric Sci in China,2002,1(6):595-604.

    [5]Adesemoye A O,Kloepper J W. Plant-microbes interactions in enhanced fertilizer-use efficiency[J]. Applied Microbiology and Biotechnology,2009,85(1):1-12.

    [6]胡江春,薛德林,馬成新. 植物根際促生菌(PGPR)的研究與應(yīng)用前景[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2004,15(10):963-966.

    [7]Almora K,Pino J A,Hernandez M,et al. Evaluation of volatiles from ripening papaya(Carica papaya L.,var. Maradol Roja)[J]. Food Chemistry,2004,86(1):127-130.

    [8]Dawkins G,Hewitt H,Wint Y,et al. Antibacterial effects of Carica papaya fruit on common wound organisms[J]. The West Indian Medical Journal,2003,52(4):290-292.

    [9]萬(wàn)璐,康麗華,廖寶文,等. 紅樹林根際解磷菌分離、培養(yǎng)及解磷能力的研究[J]. 林業(yè)科學(xué)研究,2004,17(1):89-94.

    [10]中國(guó)土壤學(xué)會(huì). 土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法[M]. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科技出版社,1999.

    [11]Bochner B R. New technologies to assess genotype-phenotype relationships[J]. Nature Reviews Genetics,2003,4(4):309-314.

    [12]Felsenstein J. Confidence limits on phylogenies:an approach using the bootstrap[J]. Evolution,1985,39(4):783-791.

    [13]Nautiyal C S. An efficient microbiological growth medium for screening phosphate solubilizing microorganisms[J]. FEMS Microbiology

    Letters,1999,170(1):265-270.

    [14]王舒,張林平,張揚(yáng),等. 紅壤區(qū)油茶根際解磷細(xì)菌的篩選、鑒定及其解磷能力[J]. 林業(yè)科學(xué)研究,2015,28(3):409-416.

    [15]羅華元,常壽榮,王紹坤,等. 云煙高端品牌植煙區(qū)根際土壤高效解鉀菌的篩選[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2011,24(5):1813-1817.

    [16]王岳坤,于飛,唐朝榮. 海南生態(tài)區(qū)植物根際解磷細(xì)菌的篩選及分子鑒定[J]. 微生物學(xué)報(bào),2009,49(1):64-71.

    [17]任嘉紅,劉輝,吳曉蕙,等. 南方紅豆杉根際溶無(wú)機(jī)磷細(xì)菌的篩選、鑒定及其促生效果[J]. 微生物學(xué)報(bào),2012,53(3):295-303.

    [18]劉璇,孔凡玉,張成省,等. 煙草根際解鉀菌的篩選與鑒定[J]. 中國(guó)煙草科學(xué),2012,33(3):28-31.

    [19]秦文旺,牧耀貴,呂利華,等. 一株解鉀高活性膠質(zhì)芽孢桿菌的篩選與育種[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(4):434-438.王曉飛,鄧超冰,許桂蘋,等. 應(yīng)用體外模擬法評(píng)價(jià)土壤中重金屬的人體健康風(fēng)險(xiǎn)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,45(6):251-254.

    doi:10.15889/j.issn.1002-1302.2017.06.065

    猜你喜歡
    番木瓜解磷鑒定
    墨西哥:全球最大番木瓜出口國(guó)
    番木瓜豐產(chǎn)優(yōu)質(zhì)栽培技術(shù)
    紅土地(2016年3期)2017-01-15 13:45:37
    淺議檢察機(jī)關(guān)司法會(huì)計(jì)鑒定的主要職責(zé)
    青銅器鑒定與修復(fù)初探
    資治文摘(2016年7期)2016-11-23 00:23:20
    八種氟喹諾酮類藥物人工抗原的合成及鑒定
    印度的番木瓜產(chǎn)業(yè)增長(zhǎng)
    高職院校教學(xué)檔案的鑒定與利用
    溫哥華假單胞菌菌株P(guān)AN4解磷能力及對(duì)核桃的促生作用
    墨西哥成為世界最大番木瓜出口國(guó)
    解磷菌的篩選及培養(yǎng)基成分對(duì)解磷能力的影響
    亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲最大成人手机在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| svipshipincom国产片| 亚洲黑人精品在线| 欧美黄色片欧美黄色片| 三级国产精品欧美在线观看| 不卡一级毛片| 欧美日韩黄片免| 99久久精品一区二区三区| 三级毛片av免费| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美av亚洲av综合av国产av| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美中文综合在线视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产成人福利小说| 美女免费视频网站| 麻豆成人av在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产单亲对白刺激| 日韩亚洲欧美综合| 极品教师在线免费播放| 99久久精品热视频| 老汉色∧v一级毛片| 色综合婷婷激情| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 99久国产av精品| 国产成人影院久久av| 成年女人永久免费观看视频| 一区福利在线观看| 精品一区二区三区人妻视频| 内射极品少妇av片p| 校园春色视频在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 制服丝袜大香蕉在线| 国产免费av片在线观看野外av| 国内精品美女久久久久久| 欧美日本视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品久久久久久久末码| 国产av不卡久久| 一区福利在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲五月天丁香| 变态另类丝袜制服| 久久欧美精品欧美久久欧美| 激情在线观看视频在线高清| 99热这里只有是精品50| 久99久视频精品免费| 两个人视频免费观看高清| 久久久久久久午夜电影| 少妇人妻一区二区三区视频| 婷婷精品国产亚洲av| 国产熟女xx| 午夜福利成人在线免费观看| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美zozozo另类| 一区福利在线观看| 欧美日韩黄片免| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美大码av| 一级黄片播放器| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 变态另类丝袜制服| 欧美午夜高清在线| 亚洲国产精品999在线| 日韩欧美国产一区二区入口| h日本视频在线播放| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产成人a区在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 久久久色成人| 日本一二三区视频观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 变态另类丝袜制服| 国产精品免费一区二区三区在线| 午夜福利欧美成人| 美女免费视频网站| 国产精品影院久久| 国产老妇女一区| 麻豆一二三区av精品| 在线播放国产精品三级| 久久久国产成人精品二区| 在线观看日韩欧美| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲精品在线观看二区| 日本黄大片高清| 日本五十路高清| 波多野结衣高清无吗| av天堂在线播放| 午夜两性在线视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久久久免费精品人妻一区二区| 看片在线看免费视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 内地一区二区视频在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 在线观看66精品国产| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| av专区在线播放| 亚洲不卡免费看| xxxwww97欧美| 成年免费大片在线观看| 三级毛片av免费| 精品久久久久久久末码| 丝袜美腿在线中文| 久久久久久久精品吃奶| 免费搜索国产男女视频| 亚洲精华国产精华精| 两个人视频免费观看高清| 黄色视频,在线免费观看| 嫩草影院精品99| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 成人三级黄色视频| 在线a可以看的网站| 日韩欧美国产一区二区入口| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 日本黄色视频三级网站网址| 免费无遮挡裸体视频| 757午夜福利合集在线观看| 91久久精品电影网| av天堂在线播放| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 搡老岳熟女国产| 亚洲精品在线观看二区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 最好的美女福利视频网| 国产精品久久久久久久电影 | 有码 亚洲区| 丰满人妻一区二区三区视频av | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久精品影院6| 亚洲片人在线观看| 国产不卡一卡二| 亚洲片人在线观看| 国产高清激情床上av| 国产主播在线观看一区二区| 97碰自拍视频| 国产精品久久久久久久电影 | 观看美女的网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产av不卡久久| 久久精品综合一区二区三区| 哪里可以看免费的av片| 久久久久久久久久黄片| 天堂√8在线中文| 亚洲,欧美精品.| 亚洲精品色激情综合| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产淫片久久久久久久久 | 午夜福利18| 人妻夜夜爽99麻豆av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 免费在线观看影片大全网站| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲电影在线观看av| 日本黄大片高清| 亚洲成人久久性| 国产精品乱码一区二三区的特点| 级片在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲av一区综合| 18禁美女被吸乳视频| 长腿黑丝高跟| 人人妻人人澡欧美一区二区| 脱女人内裤的视频| 男女那种视频在线观看| 观看免费一级毛片| 亚洲人成网站在线播| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲精品久久国产高清桃花| 中文字幕av在线有码专区| 国内精品久久久久久久电影| x7x7x7水蜜桃| 亚洲成人久久爱视频| 欧美乱妇无乱码| 精品一区二区三区视频在线 | 可以在线观看毛片的网站| 中文字幕久久专区| 91在线观看av| 国产精品乱码一区二三区的特点| 欧美+日韩+精品| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 757午夜福利合集在线观看| 在线观看舔阴道视频| 精品福利观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 悠悠久久av| 黄色女人牲交| 久久99热这里只有精品18| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 亚洲精品成人久久久久久| 日韩精品青青久久久久久| 午夜福利高清视频| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美日韩综合久久久久久 | 可以在线观看毛片的网站| xxx96com| 最新美女视频免费是黄的| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 91麻豆av在线| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美一级a爱片免费观看看| 看黄色毛片网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 欧美最黄视频在线播放免费| 中文字幕高清在线视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 午夜两性在线视频| 两个人的视频大全免费| 成人国产一区最新在线观看| 国产野战对白在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 色噜噜av男人的天堂激情| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 有码 亚洲区| 深爱激情五月婷婷| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美黑人巨大hd| 日本一二三区视频观看| 在线观看免费午夜福利视频| bbb黄色大片| 首页视频小说图片口味搜索| 成人亚洲精品av一区二区| 久久久久精品国产欧美久久久| 中文字幕久久专区| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 久久久久久久亚洲中文字幕 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 两个人看的免费小视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲国产欧美网| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美一级a爱片免费观看看| 一区二区三区国产精品乱码| 天天躁日日操中文字幕| 欧美成人a在线观看| 午夜免费激情av| aaaaa片日本免费| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲欧美日韩高清在线视频| netflix在线观看网站| 免费看光身美女| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国内精品美女久久久久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品乱码久久久久久99久播| 黄色视频,在线免费观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 免费人成在线观看视频色| 亚洲欧美日韩东京热| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲av美国av| 51午夜福利影视在线观看| 国产真实乱freesex| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美+亚洲+日韩+国产| 神马国产精品三级电影在线观看| 草草在线视频免费看| 狠狠狠狠99中文字幕| 可以在线观看的亚洲视频| 中出人妻视频一区二区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 在线十欧美十亚洲十日本专区| ponron亚洲| 男女下面进入的视频免费午夜| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产aⅴ精品一区二区三区波| a级一级毛片免费在线观看| h日本视频在线播放| 日韩精品青青久久久久久| 免费电影在线观看免费观看| av在线天堂中文字幕| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲精品456在线播放app | 一区福利在线观看| 成人特级av手机在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲成av人片免费观看| 国产97色在线日韩免费| 国产综合懂色| 免费av观看视频| 国内精品美女久久久久久| 啦啦啦免费观看视频1| 欧美性猛交黑人性爽| 午夜免费激情av| 99久国产av精品| 国产伦精品一区二区三区四那| 婷婷精品国产亚洲av| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 高清日韩中文字幕在线| 男女视频在线观看网站免费| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 内地一区二区视频在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产免费一级a男人的天堂| 一区福利在线观看| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲国产色片| 亚洲天堂国产精品一区在线| 成年版毛片免费区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产精品久久视频播放| 亚洲avbb在线观看| 日本成人三级电影网站| 国产不卡一卡二| 欧美在线一区亚洲| 首页视频小说图片口味搜索| 中文字幕高清在线视频| 国产老妇女一区| www日本黄色视频网| 午夜福利免费观看在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产单亲对白刺激| a级一级毛片免费在线观看| 成人国产综合亚洲| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品 国内视频| 久99久视频精品免费| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产伦在线观看视频一区| 日韩免费av在线播放| 五月玫瑰六月丁香| 嫩草影院入口| 人妻久久中文字幕网| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 草草在线视频免费看| а√天堂www在线а√下载| x7x7x7水蜜桃| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 色吧在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 久久久久性生活片| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲激情在线av| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲av不卡在线观看| 在线播放国产精品三级| 网址你懂的国产日韩在线| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲av一区综合| 一进一出抽搐动态| 一本精品99久久精品77| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产野战对白在线观看| 久久久久久大精品| 国产中年淑女户外野战色| 国内精品久久久久精免费| 久久久久久人人人人人| 久久久久久大精品| 国产淫片久久久久久久久 | 欧美性感艳星| e午夜精品久久久久久久| 欧美乱色亚洲激情| 午夜影院日韩av| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 日本黄色片子视频| 一本综合久久免费| 村上凉子中文字幕在线| 听说在线观看完整版免费高清| 午夜激情欧美在线| 麻豆一二三区av精品| 精品电影一区二区在线| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 看免费av毛片| 国产一区二区三区视频了| 国产精品,欧美在线| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美黑人欧美精品刺激| 给我免费播放毛片高清在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久人人精品亚洲av| 午夜福利免费观看在线| 女警被强在线播放| 真人做人爱边吃奶动态| 久久精品人妻少妇| 香蕉丝袜av| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品,欧美在线| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产高清videossex| 悠悠久久av| 舔av片在线| 国产v大片淫在线免费观看| av福利片在线观看| 精品国产三级普通话版| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产av一区在线观看免费| 黄色成人免费大全| www.色视频.com| 久久久久国内视频| 日本一本二区三区精品| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲国产欧美人成| 最新在线观看一区二区三区| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产精品久久久久久精品电影| 禁无遮挡网站| 国产激情欧美一区二区| 亚洲中文字幕日韩| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 免费人成在线观看视频色| 亚洲精品亚洲一区二区| av在线天堂中文字幕| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲av美国av| 亚洲成av人片免费观看| 国产激情欧美一区二区| 精品人妻偷拍中文字幕| 变态另类丝袜制服| x7x7x7水蜜桃| 日韩精品中文字幕看吧| 99久久精品热视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 天堂网av新在线| 不卡一级毛片| 天堂√8在线中文| 国产精品亚洲av一区麻豆| 精品福利观看| 国产成人福利小说| xxxwww97欧美| 色老头精品视频在线观看| 色吧在线观看| xxxwww97欧美| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 床上黄色一级片| 狂野欧美激情性xxxx| 国产午夜精品论理片| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产午夜精品论理片| 午夜a级毛片| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 麻豆国产av国片精品| 老司机深夜福利视频在线观看| 97超视频在线观看视频| 国产视频内射| 欧美区成人在线视频| 亚洲av电影在线进入| 国产精品久久电影中文字幕| 一区二区三区高清视频在线| а√天堂www在线а√下载| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久精品人妻少妇| 天天躁日日操中文字幕| 国产激情欧美一区二区| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲av免费高清在线观看| 一本综合久久免费| 18禁国产床啪视频网站| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 免费av不卡在线播放| a级毛片a级免费在线| 午夜久久久久精精品| 国产男靠女视频免费网站| 精品欧美国产一区二区三| 又紧又爽又黄一区二区| 超碰av人人做人人爽久久 | 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲av免费高清在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 免费高清视频大片| 制服人妻中文乱码| 午夜福利18| 在线观看日韩欧美| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 精品久久久久久久毛片微露脸| 男女那种视频在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看 | 不卡一级毛片| 欧美zozozo另类| 少妇的逼水好多| 99久久精品热视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久9热在线精品视频| 黄色成人免费大全| 男女之事视频高清在线观看| 国产精品野战在线观看| 亚洲18禁久久av| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 无遮挡黄片免费观看| 99riav亚洲国产免费| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 很黄的视频免费| 黄色成人免费大全| 99国产综合亚洲精品| 天堂网av新在线| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美黄色淫秽网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久精品国产综合久久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 高清日韩中文字幕在线| 级片在线观看| 久久久久久久久大av| 制服人妻中文乱码| 色吧在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 国产成人啪精品午夜网站| 日韩欧美精品v在线| av片东京热男人的天堂| 2021天堂中文幕一二区在线观| 老司机午夜十八禁免费视频| 午夜免费成人在线视频| 三级毛片av免费| 国产精品影院久久| 美女高潮的动态| 成人三级黄色视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 少妇丰满av| 欧美中文综合在线视频| 国产精品av视频在线免费观看| 两人在一起打扑克的视频| 免费在线观看影片大全网站| 黄片大片在线免费观看| 黄色日韩在线| 久久6这里有精品| 一本综合久久免费| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 最新中文字幕久久久久| 国产成人欧美在线观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲国产高清在线一区二区三| 母亲3免费完整高清在线观看| 日韩国内少妇激情av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产激情欧美一区二区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久99热这里只有精品18| 成熟少妇高潮喷水视频| 村上凉子中文字幕在线| 一级黄片播放器| 久久久久久人人人人人| 久久久色成人| 亚洲精品在线美女| 久久久久国内视频| 欧美日韩精品网址| 岛国在线免费视频观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| av专区在线播放| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 99热精品在线国产| 久久精品影院6| 99热这里只有是精品50| 免费电影在线观看免费观看| 高清在线国产一区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 99久久成人亚洲精品观看| 丰满的人妻完整版| 久久久久精品国产欧美久久久| 一区福利在线观看| 亚洲av不卡在线观看| www日本黄色视频网| 久久草成人影院| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产精品久久久久久久久免 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲av美国av| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 午夜a级毛片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 久久久久性生活片| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产视频内射| 最好的美女福利视频网| 日本黄色片子视频| 国产野战对白在线观看| 色视频www国产| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 在线国产一区二区在线| 我要搜黄色片| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲精品久久国产高清桃花| 精品不卡国产一区二区三区| 国产成人影院久久av| 精品国产亚洲在线| tocl精华| 亚洲专区中文字幕在线| 操出白浆在线播放| 好男人电影高清在线观看|