HPLC法測定消糖靈膠囊中格列本脲、鹽酸小檗堿的含量
2017-05-11 14:17:28馬明蘭
武昌理工學(xué)院學(xué)報 2017年1期
馬明蘭
摘 要：本文用高效液相色譜法測定消糖靈膠囊中格列本脲和鹽酸小檗堿的含量。通過利用PLPLC法來沉淀待測物標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而分析消糖靈類藥物的中藥成分與西藥成份。該方法簡單，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性及穩(wěn)定性好，能夠用于消糖靈膠囊的質(zhì)量控制。
關(guān)鍵詞：HPLC；消糖靈膠囊；格列本脲；鹽酸小檗堿；含量檢測
中圖分類號：R284.1 文獻標(biāo)識碼：A
消糖靈膠囊藥的處方由人參、天花粉、黃連、丹參、杜仲、黃芪、枸杞子、五味子、沙苑子、白芍、知母、優(yōu)降糖（格列本脲）十二味藥組成作用。臨床用于治療糖尿病，具有益氣養(yǎng)陰，清熱瀉火，益腎縮尿之功效。該藥是一種中西復(fù)方藥物，格列本脲為本處方中的西藥成分，其化學(xué)名稱為：N-[2-[4-[[[（環(huán)己氨基）羰基]氨基]磺酰基]苯基]乙基]-2-甲氧基-5-氯苯甲酰胺，分子式：C23H28ClN3O5S 分子量：494.01，具有降血糖的功效。黃連素是一種重要的生物堿，是我國應(yīng)用很久的一種中藥材，有很好的殺菌作用，主要化學(xué)成分是鹽酸小檗堿，具有顯著的抗心力衰竭、抗心律失常、降低膽固醇、抗制血管平滑肌增殖、改善胰島素抵抗、抗血小板、抗炎等等作用。格列本脲和鹽酸小檗堿和藥品的功能密切相關(guān)，都可用高效液相色譜法進行含量的測定。
本文通過高相液相色譜法測定消糖靈膠囊中的格列本脲和鹽酸小檗堿含量，方法簡便快速，重現(xiàn)性及穩(wěn)定性均較好，通過利用HPLC法構(gòu)建待測物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以此來測定樣品待測物質(zhì)的含量，并考察分析儀器精密度，樣品穩(wěn)定性，加樣回收率四項指標(biāo)。目的在于分析消糖靈該類藥物的中藥成分和西藥成分的含量和新藥的篩選提供新的思路和途徑，以達到為該類藥物做出更好的質(zhì)量控制。
1 實驗材料和儀器
1.1 材料及試劑
格列本脲對照品（上海源葉生物科技有限公司），鹽酸小檗堿對照品（上海源葉生物科技有限公），消糖靈膠囊（0.4g/粒，遼寧綠丹藥業(yè)有限公司），甲醇、乙腈為色譜純，醋酸溶液，蒸餾水，進樣針，進樣瓶0.45um過濾紙（水系、有機系），燒杯，玻璃棒，容量瓶。
1.2 實驗儀器
電子分析天平（型號：BT 224S；廠家：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）、高效液相色譜儀（型號：SPD-15；廠家：日本島津）、pH計（型號：PHS-3B；廠家：上海雷磁儀器有限公司 ）、超聲波清洗儀（型號：KQ-100DB；廠家：昆山市超聲儀器有限公司）
2 實驗方法
2.1 格列本脲的含量測定
2.1.1 格列本脲色譜條件
色譜柱：C18柱；流動相：甲醇—水溶液（70：30）；檢測波長：274nm；流速1ml.min-1；柱溫：室溫；理論塔板數(shù)按格列本脲計算應(yīng)不低于2000。
2.1.2 格列本脲對照品及供試品溶液的制備
對照品溶液的制備：精密稱取格列本脲對照品5mg，加流動相甲醇溶解并于10ml容量瓶中定容，制成格列本脲對照品溶液，即得濃度為0.5mg/ml對照液。
供試品溶液的制備：取樣品適量去膠囊殼，研細，混勻，精密稱取 2.0000g，加流動相甲醇溶解并于50ml容量瓶中定容，超聲處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減少的重量至刻度線，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。
2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
精密吸取上述格列本脲對照品溶液（0.5mg.ml-1），精密量取1ml、2ml、3ml、4 ml、5 ml，分別置10ml量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，各進樣20?l，按上述色譜條件測定峰面積，峰面積y為縱坐標(biāo)，格列本脲進樣量x（ml）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算回歸方程
2.2 鹽酸小檗堿的含量測定
2.2.1 鹽酸小檗堿色譜條件
色譜柱： C18柱；流動相：甲醇—水溶液（加入適量醋酸）（75：25）；檢測波長為350nm，流速1ml.min-1；柱溫：35℃；理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿計算應(yīng)不低于3000。
2.2.2 鹽酸小檗堿對照品及供試品溶液的制備
對照品溶液的制備：精密稱取鹽酸小檗堿對照品10mg，加流動相甲醇溶解并于25ml容量瓶中定容，制成鹽酸小檗堿對照品溶液，濃度為0.4mg/ml，即得。
供試品溶液的制備：取樣品適量去膠囊殼，研細，混勻，精密稱取 2.0000g，加流動相甲醇溶解并于50ml容量瓶中定容，超聲處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減少的重量至刻度線，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。
2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液 （0.4mg.ml-1），精密量取1ml、2ml、3ml、4 ml、5 ml，分別置10ml量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，各進樣20?l，按上述色譜條件測定峰面積，峰面積y為縱坐標(biāo)，鹽酸小檗堿進樣量x（ml）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算回歸方程。
3 實驗結(jié)果
3.1 格列本脲測定結(jié)果
3.1.1 格列本脲對照品不同濃度的圖譜及供試品的圖譜（見圖1，2，3，4，5，6）
由圖譜可知，格列本脲的保留時間tR=8.24min
3.1.2 格列本脲標(biāo)準(zhǔn)曲線（見表1）
3.1.3 格列本脲的含量測定結(jié)果
利用前述的方法進行處理，對測定的峰面積數(shù)據(jù)進行整理分析與格列本脲的標(biāo)準(zhǔn)曲線進行比對計算，供試品溶液的格列本脲的峰面積為A=345587，得到待測樣品的含量數(shù)據(jù)。
由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 ：
3.2 鹽酸小檗堿測定結(jié)果
3.2.1 鹽酸小檗堿對照品不同濃度的圖譜及供試品的圖譜（見圖7，8，9，10，11，12）
由圖譜可知，鹽酸小檗堿的保留時間
3.2.2 鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)曲線（見表2）
3.2.3 鹽酸小檗堿的含量測定
（1）利用前述的方法進行處理，對測定的峰面積數(shù)據(jù)進行整理分析與鹽酸小檗堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線進行比對計算，供試品溶液中的鹽酸小檗堿的峰面積A=12304836，得到待測樣品的含量數(shù)據(jù)。
4 方法學(xué)考察
4.1 格列本脲的方法學(xué)考察
4.1.1 精密度試驗
精密吸取上述供試品溶液，注入液相色譜儀，重復(fù)進樣5次，格列本脲的峰面積RSD為3.4%，結(jié)果表明所用的儀器精密度良好。
結(jié)論：所得到的精密度RSD%=3.4%≤5%，故符合要求。
4.1.2 穩(wěn)定性試驗
精密吸取供試品溶液20 ?l，依正文方法測定，測定格列本脲的峰面積的RSD為2.2% ，表明在24小時內(nèi)樣品中格列本脲的含量基本穩(wěn)定。 結(jié)論：樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD%=2.2%。
4.1.3 回收率試驗
精密稱取已知含量的供試品 6份，分別精密加入格列本脲對照品適量，依法測定，計算回收率。結(jié)論：經(jīng)吸光度檢測，本實驗的加樣回收率結(jié)果平均值為101.0%，RSD%為2.3%。而藥典規(guī)定的范圍為95%～105%，均符合限量規(guī)定。
4.2 鹽酸小檗堿的方法學(xué)考察
4.2.1 精密度試驗
結(jié)論：所得到的精密度RSD%=1.83%，故符合要求。
4.2.2 穩(wěn)定性試驗
精密吸取供試品溶液20 ?l，依正文方法測定，測定鹽酸小檗堿的峰面積的RSD為 ，表明在24小時內(nèi)樣品中鹽酸小檗堿的含量基本穩(wěn)定。
結(jié)論：樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD%=2.4%。
4.2.3 回收率試驗
精密稱取已知含量的供試品6份，分別精密加入鹽酸小檗堿對照品適量，依法測定，計算回收率。
結(jié)論：經(jīng)吸光度檢測，本實驗的加樣回收率結(jié)果平均值為100.3%，RSD%為1.02%。而藥典規(guī)定的范圍為95%～105%，均符合限量規(guī)定
5 結(jié)論
本實驗采用高效液相對消糖靈膠囊中格列本脲和鹽酸小檗堿的定量分析，格列本脲標(biāo)準(zhǔn)品R=0.9993，鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品R=0.9997，證明兩種物質(zhì)的線性關(guān)系良好。
運用標(biāo)準(zhǔn)曲線法和外標(biāo)法兩種方法測定，計算得到消糖靈膠囊中格列本脲的含量為2.2mg/g，鹽酸小檗堿的含量為3.6mg/g。
在線性回歸分析中，格列本脲測定中，儀器精密度準(zhǔn)確RSD%=3.4%，8h內(nèi)穩(wěn)定性良好RSD%=2.2%，加樣回收率平均值101.03%且RSD%=2.3%；鹽酸小檗堿測定中，儀器精密度準(zhǔn)確RSD%=1.8%，8h內(nèi)穩(wěn)定性良好RSD%=2.4%，加樣回收率平均值100.3%且RSD%=1.02%
綜合得出，以上數(shù)據(jù)較為準(zhǔn)確，符合藥典各項限量規(guī)定。
參考文獻：
[1] 曾水云，楊四海.HPLC測定消糖靈膠囊中芍藥苷的含量[J].中成藥，2004 （12）.
[2] 張繼安，張薇.HPLC法測定消糖靈膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J].遼寧中醫(yī)志，2007 （4）.
[3] 張玉娟，田景振，付英杰等.HPLC測定消糖靈膠囊中格列本脲的含量[J].食品與藥品，2005 （4）.
（本文審稿 戴定蘭）
