核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)在HIV感染中的應(yīng)用

摘要：目的：觀察核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)在HIV感染中的應(yīng)用價(jià)值。方法：2016年10月至2017年10月382例確診HIV感染患者為本次實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象，其中有225例患者為早期感染，有157例患者為中晚期感染，所有患者均給予核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)，比較核酸檢測(cè)、抗體檢測(cè)對(duì)HIV感染檢出情況。結(jié)果：早期感染患者核酸檢測(cè)其陽(yáng)性檢出率明顯高于抗體檢測(cè)（87.1%VS80.2%），中晚期感染患者抗體檢測(cè)其陽(yáng)性檢出率明顯高于核酸檢測(cè)（80.4%VS85.9%），各項(xiàng)數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.O5）。結(jié)論：早期HIV感染與中晚期HIV感染患者核酸檢測(cè)以及抗體檢測(cè)準(zhǔn)確性具有較大差異，早期HIV感染患者核酸檢測(cè)準(zhǔn)確性高，中晚期HIV感染患者抗體檢測(cè)準(zhǔn)確性高。

關(guān)鍵詞：核酸檢測(cè)；抗體檢測(cè)；HIV感染；應(yīng)用價(jià)值

目前艾滋病尚未發(fā)現(xiàn)其臨床治療特效藥，故艾滋病個(gè)體患者死亡率高，據(jù)我國(guó)衛(wèi)生部門調(diào)查顯示我國(guó)艾滋病個(gè)體患病率逐年提高，嚴(yán)重威脅我國(guó)公民健康，因此早發(fā)現(xiàn)、早診斷對(duì)于HIV感染患者就顯得十分重要。目前臨床常用的HIV檢測(cè)方法有抗體檢測(cè)以及核酸檢測(cè)，按照我國(guó)2009年《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》修訂版的要求，抗體檢測(cè)應(yīng)對(duì)HIV抗體進(jìn)行初篩和復(fù)篩，并對(duì)HIV抗體確證試驗(yàn)，對(duì)于篩查試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性的標(biāo)本經(jīng)AIDS確證陽(yáng)性后可出具HIV抗體一1型或HlV抗體一2型陽(yáng)性確證報(bào)告[1]。本次研究對(duì)我實(shí)驗(yàn)室2016年10月至2017年10月225例早期感染患者以及157例中晚期感染患者均給予核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)，通過比較核酸檢測(cè)、抗體檢測(cè)對(duì)HIV感染檢出情況，從而論證核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)在HIV感染中的應(yīng)用價(jià)值。

1資料與方法

1.1一般資料

2016年10月至2017年10月382例確診HIV感染患者，其中有225例早期感染患者，有157例為中晚期感染患者。225例早期感染患者均在2016年10月至2017年10月AIDS確證中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)確診不確定，二次隨訪通過AIDS生物樣本庫(kù)中患者首次樣本查詢確診為陽(yáng)性，其中男性113例，女性112例，年齡在18～69歲，平均年齡在（33.2±1.5）歲，文化程度：有137例為小學(xué)及小學(xué)以下文化程度，有49例為初中文化程度，有39例為初中以上文化程度。157例中晚期感染患者其血樣均來(lái)自AIDS疫情網(wǎng)絡(luò)直報(bào)系統(tǒng)查詢且確診陽(yáng)性，所有患者血液樣本均經(jīng)淋巴細(xì)胞亞群CD4+淋巴細(xì)胞明顯降低，且具有艾滋病晚期臨床癥狀，男性86例，女性71例，年齡在17～68歲，平均年齡在（32.8±1.4）歲，文化程度：有76例為小學(xué)及小學(xué)以下文化程度，有46例為初中文化程度，有35例為初中以上文化程度。兩組患者在年齡、性別、文化程度等一般資料上不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2方法

1.2.1材料

T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)采用美國(guó)BD公司流式細(xì)胞儀以及三色熒光單克隆抗體試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；HIV感染抗體檢測(cè)采用美國(guó)BD公司配套酶聯(lián)兔疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)進(jìn)行檢測(cè)；HIV感染核酸檢測(cè)采用美國(guó)羅氏TaqMan全自動(dòng)病毒載量?jī)x檢測(cè)。

1.2.2抗體檢測(cè)：

美國(guó)BD公司配套酶聯(lián)兔疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)包括提取包被蛋白、蛋白質(zhì)聚合反應(yīng)以及一抗抗體孵育，對(duì)個(gè)體標(biāo)本采用Tris緩沖鹽水（TBST）洗滌，而后加入適量酶標(biāo)二抗、加底物液顯色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)顯色情況結(jié)合置酶標(biāo)檢測(cè)儀，于450 nm處空白對(duì)照各孔吸光度（A）值。

1.2.3核酸檢測(cè)：

采用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離法以及自動(dòng)化儀器，參考相應(yīng)商品化試劑、設(shè)備說明書操作提取核酸（RNA），并將提取后的核酸置于零下20攝氏度環(huán)境下進(jìn)行保存。取核酸給予逆轉(zhuǎn)錄引物、脫氧核糖核苷酸三磷酸（dNTPs）、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、二硫蘇糖醇（DTT）、緩沖液、適量無(wú)RNA酶超純水以及RNA模板，在擴(kuò)增儀或水浴箱中按規(guī)定溫度和時(shí)間進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，從而完成逆轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA（cDNA）。使用商品化實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）一步法試劑進(jìn)行第一輪擴(kuò)增反應(yīng)，使用瓊脂糖凝膠電泳法分析法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物與相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，從而判斷擴(kuò)增片段是否在預(yù)期的相對(duì)分子質(zhì)量范圍內(nèi)，實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增產(chǎn)物定性分析。

1.3觀察指標(biāo)

（1）觀察比較225例早期HIV感染患者核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)情況，假陰性=漏診例數(shù)/總受檢例數(shù)，準(zhǔn)確性=陽(yáng)性例數(shù)/總受檢例數(shù)。

（2）觀察比較157例中晚期HIV感染患者核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)情況，假陰性=漏診例數(shù)/總受檢例數(shù)，準(zhǔn)確性=陽(yáng)性例數(shù)/總受檢例數(shù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.0系統(tǒng)軟件統(tǒng)計(jì)分析資料；早期HIV患者核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)情況與中晚期HIV患者核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)情況相關(guān)計(jì)數(shù)資料用（n，%）表示，并用X2檢驗(yàn)；P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1觀察比較225例早期HIV感染患者核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)情況，具體情況（見表1），225例早期HIV感染患者核酸檢測(cè)陽(yáng)性檢出率以及準(zhǔn)確性均明顯優(yōu)于抗體檢測(cè)陽(yáng)性檢出率以及準(zhǔn)確性。

2.2觀察比較157例中晚期HIV感染患者核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)情況，具體情況（見表2），157例中晚期HIV感染患者抗體檢測(cè)陽(yáng)性檢出率以及準(zhǔn)確性均明顯優(yōu)于核酸檢測(cè)陽(yáng)性檢出率以及準(zhǔn)確性。

3討論

艾滋病全稱為獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS），艾滋病主要是由于個(gè)體感染人類免疫缺陷病毒（HIV），HIV病毒是一種對(duì)人體免疫系統(tǒng)具有較高攻擊能力的病毒，人體免疫系統(tǒng)中CD4T淋巴細(xì)胞為其主要攻擊目標(biāo)。艾滋病個(gè)體患者感染HIV病毒后機(jī)體大量CD4T淋巴細(xì)胞減少，降低個(gè)體免疫功能，隨著個(gè)體患者免疫功能的降低，患者機(jī)體感染發(fā)生率升高，甚至可誘使患者發(fā)生惡性腫瘤以及心肺功能衰竭，導(dǎo)致患者死亡[2]。目前臨床研究認(rèn)為艾滋病源于非洲，而后隨移民帶入美國(guó)，我國(guó)首例艾滋病于1985年確診，艾滋病個(gè)體患者HIV病毒潛伏期可達(dá)10年甚至更久，艾滋病個(gè)體患者因機(jī)體免疫功能降低可發(fā)生帶狀皰疹、肺結(jié)核、肺炎、腦炎等多臟器組織感染，機(jī)體處于長(zhǎng)期消耗狀態(tài)，最終由于全身衰竭死亡，目前尚未發(fā)現(xiàn)預(yù)防性疫苗，我國(guó)已經(jīng)艾滋病列為乙類法定傳染病。

艾滋病其疾病進(jìn)展可分為急性期、無(wú)癥狀期、艾滋病期，其中急性期主要是指?jìng)€(gè)體患者實(shí)驗(yàn)室HIV抗體又陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性的患者，相關(guān)研究調(diào)查你顯示約80%的艾滋病患者HIV感染后6周初篩即可檢出抗體，HIV感染12周后幾乎100%艾滋病患者可檢出抗體。無(wú)癥狀期個(gè)體患者HIV抗體陽(yáng)性，且有流行病學(xué)史，艾滋病期患者已出現(xiàn)機(jī)體心、肺重要臟器損傷，由此可以看出對(duì)HIV感染患者進(jìn)行抗體檢測(cè)是十分重要的[3]。目前HIV檢測(cè)方式包括抗體檢測(cè)以及核酸檢測(cè)，通過檢測(cè)可有效確診個(gè)體患者是否為早期感染，并針對(duì)個(gè)體患者疾病發(fā)展病程給予有針對(duì)性、快速治療。HIV感染后個(gè)體患者可損傷免疫細(xì)胞，出現(xiàn)不受控制的病毒血癥，約持續(xù)1周，該期間HIV傳染性最高，常規(guī)抗體檢測(cè)方法無(wú)法檢出，容易致使個(gè)體患者病情被忽視，從而造成病毒進(jìn)一步傳播[4]。在傳統(tǒng)抗體檢測(cè)基礎(chǔ)上對(duì)于早期HIV感染患者給予核酸檢測(cè)方法，可有效提高HIV陽(yáng)性檢出率。本次研究顯示對(duì)于早期HIV感染患者核酸檢測(cè)準(zhǔn)確率為87.1%，明顯優(yōu)于早期HIV感染患者抗體檢測(cè)準(zhǔn)確率，中晚期HIV感染患者抗體檢測(cè)準(zhǔn)確率為85.9%，明顯優(yōu)于核酸檢測(cè)。

本次研究顯示對(duì)于HIV感染患者早期感染者與中晚期感染者其核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)準(zhǔn)確性具有較大差異，HIV感染早期患者核酸檢測(cè)準(zhǔn)確性高，HIV感染中晚期患者抗體檢測(cè)準(zhǔn)確性高，醫(yī)師臨床工作過程中應(yīng)根據(jù)患者不同階段選擇合適的檢測(cè)手段。

參考資料：

[1]侯海燕，燕清麗，劉靚等.核酸檢測(cè)與抗體檢測(cè)在HIV感染中的應(yīng)用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，16（23）：3431-3432.

[2]李莉華，王素玲，馬印圖等.單人份核酸檢測(cè)在降低輸血感染人類免疫缺陷病毒殘余風(fēng)險(xiǎn)中的應(yīng)用[J].解放軍醫(yī)藥雜志，2017，29（2）：107-110.

[3]?？》?三種HIV抗原/抗體檢測(cè)方法對(duì)HIV早期感染檢測(cè)的診斷研究[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2015，5（8）：1082-1084.

[4]孫麗娜，孫京濤，田永全等.肺結(jié)核抗體檢測(cè)聯(lián)合CRP檢測(cè)判斷HIV合并肺結(jié)核桿菌感染的效果研究[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2015，22（6）：546-5225.