水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留檢測技術(shù)研究進(jìn)展

熊雅婷+劉薇

北京維德維康生物技術(shù)有限公司

隨著人們對(duì)獸藥殘留危害的深入了解，水產(chǎn)品中的獸藥殘留已經(jīng)成為食品安全領(lǐng)域關(guān)注的的熱點(diǎn)和焦點(diǎn)。在我國，濫用、亂用限用藥物和非法使用禁用藥物等現(xiàn)象屢禁不止，這已成為導(dǎo)致我國水產(chǎn)品中獸藥殘留超標(biāo)的主要原因，還引發(fā)了水產(chǎn)品消費(fèi)安全問題和食品貿(mào)易爭端等嚴(yán)重后果。

2017年，中央把食品安全問題放在了重要位置，這體現(xiàn)了國家對(duì)食品安全問題的重視。習(xí)主席對(duì)食品安全工作作出了重要指示，他指出，民以食為天，加強(qiáng)食品安全工作，關(guān)系我國13億多人的身體健康和生命安全，必須抓得緊而又緊。2017年1月，國家食品藥品監(jiān)督管理總局制定了2017年食品安全抽檢計(jì)劃及要求，農(nóng)業(yè)部制定了2017年動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃，來確保2017年食品安全環(huán)境利好。其中，農(nóng)業(yè)部印發(fā)的監(jiān)控計(jì)劃繼續(xù)強(qiáng)調(diào)了對(duì)水產(chǎn)品中氯霉素、孔雀石綠、硝基呋喃代謝物、喹乙醇、激素類等藥物及其代謝物檢測的重要性，明確規(guī)定了限量標(biāo)準(zhǔn)、抽檢要求、抽樣流程、結(jié)果報(bào)送、查處及負(fù)責(zé)單位等要求。

正確認(rèn)識(shí)孔雀石綠

孔雀石綠（Malachite green，MG）是三苯甲烷類工業(yè)染料，早在1933年就作為殺菌劑、防腐劑而被廣泛用于預(yù)防與治療水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖中的水霉病、鰓霉病和小瓜蟲病等。但是，孔雀石綠及其代謝物隱性孔雀石綠具有潛在“三致”作用，會(huì)對(duì)人類健康與環(huán)境造成危害，因此，美國、加拿大、歐盟等國家和地區(qū)都已經(jīng)明確禁止在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用孔雀石綠。我國于2002年將孔雀石綠列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》中，并且于2005年制定了孔雀石綠的使用標(biāo)準(zhǔn)，要求孔雀石綠在水產(chǎn)品中的檢出值不得超過1μg/kg，這一標(biāo)準(zhǔn)比歐盟2μg/kg的標(biāo)準(zhǔn)還要嚴(yán)格。然而，由于孔雀石綠殺菌、防腐效果好，且價(jià)格低廉，所以一些生產(chǎn)者受利益驅(qū)動(dòng)在水產(chǎn)品養(yǎng)殖、運(yùn)輸及貯存中違規(guī)使用的情況依然存在。

孔雀石綠檢測方法分析

目前，檢測孔雀石綠的方法主要有高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）、薄層色譜法（Thin-layer Chromatography，TLC）、分光光度法（ultraviolet-visible spectrophotometry，UV-VIS）、聯(lián)用檢測法、拉曼光譜法（Raman spectra）以及免疫分析法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等。常規(guī)的儀器分析方法雖然準(zhǔn)確、靈敏，但其檢測時(shí)間長、成本高，難以及時(shí)、有效地檢測出水產(chǎn)品中孔雀石綠含量。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，快速檢測方法以其便捷、靈敏的優(yōu)勢在現(xiàn)場檢測、快速篩查等方面起著非常重要的作用。

1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是一種靈敏度較高、可靠性較強(qiáng)的方法，此法重復(fù)性好、速度快，可使許多極難分離的待測物得以分析，目前大多數(shù)水產(chǎn)品藥物殘留分析都采用HPLC法。但是，因動(dòng)物體內(nèi)成分復(fù)雜，并且一些雜質(zhì)會(huì)干擾測定，所以應(yīng)用HPLC法檢測時(shí)對(duì)于樣品預(yù)處理必須仔細(xì)謹(jǐn)慎，以提高測定準(zhǔn)確性和靈敏度。目前，已有許多研究采用HPLC對(duì)孔雀石綠進(jìn)行檢測，檢出限一般在5～10μg/kg，而且通常需要連接紫外檢測器、熒光檢測器、二極管陣列檢測器等儀器來提升檢測精度。因此，高效液相色譜法無法滿足大批量快速檢測的需求。

2 拉曼光譜法

拉曼光譜法是利用孔雀石綠在拉曼光譜上的特征峰及強(qiáng)度對(duì)其進(jìn)行定性和半定量，這種方法檢測速度比較快，一個(gè)樣品從處理至檢測完成只需3min，檢測限約為5μg/kg。此外，表面增強(qiáng)拉曼散射技術(shù)在定量檢測食品中化學(xué)污染物上具有更高的準(zhǔn)確度，但水產(chǎn)品原料的復(fù)雜性限制了檢測方法的建立。拉曼光譜技術(shù)常需要優(yōu)化樣品前處理方法，實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)品中目標(biāo)化合物精確的分離和富集，從而實(shí)現(xiàn)痕量化學(xué)污染物檢測，這限制了拉曼光譜技術(shù)在水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留量檢測的廣泛普及應(yīng)用。

3 分光光度法

分光光度法用于孔雀石綠檢測時(shí)，檢測限較高、靈敏度較低、準(zhǔn)確性較差，目前尚無報(bào)道此方法在復(fù)雜基質(zhì)中的應(yīng)用，還不能用于水產(chǎn)品中低濃孔雀石綠及其產(chǎn)物的檢測。國內(nèi)學(xué)者曾利用分光光度法檢測水產(chǎn)品中的孔雀石綠殘留，結(jié)果顯示，檢出限為20μg/kg，且測定的最佳pH值為3，前處理過程比較繁瑣，需用大量有機(jī)溶劑抽提和離心分離，會(huì)產(chǎn)生較多的有機(jī)廢液，并不適用于水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留的快速大量檢測。

4 聯(lián)用技術(shù)

常用的聯(lián)用技術(shù)有氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、薄層色譜-質(zhì)譜法、毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜等，可揚(yáng)長避短，一般兼分離、定量和定性（分子結(jié)構(gòu)信息）于一體，因而特別適用于確證性分析。但是由于聯(lián)用技術(shù)需要的儀器設(shè)備昂貴，所以目前普及率不高。

5 免疫分析法

免疫分析法是近幾年發(fā)展起來的以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的新型分析技術(shù)。目前使用最普遍的是酶聯(lián)免疫法（ELISA），具有操作簡便、靈敏度高、樣品容量大、儀器化程度和分析成本低的優(yōu)點(diǎn)，是最理想的殘留篩選性分析方法之一。有學(xué)者分別采用直接競爭酶聯(lián)免疫法和間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法測定魚肉、蝦肉等水產(chǎn)品中的孔雀石綠，檢出限大約為0.37μg/kg，平均回收率大約為87.5%～110.4%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果良好，證實(shí)了酶聯(lián)免疫方法在水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留量檢測的潛在優(yōu)勢。

憑借深厚底蘊(yùn)，

不斷創(chuàng)新檢測解決方案

北京維德維康生物技術(shù)有限公司（以下簡稱“維德維康”），是一家專業(yè)從事食品安全檢測、獸藥殘留快速檢測技術(shù)、動(dòng)物疫病快速診斷技術(shù)研究及產(chǎn)品開發(fā)的高新技術(shù)企業(yè)。其在獸藥、非法添加劑、毒素、細(xì)菌蛋白等化合物的抗原和抗體制備方面具有豐富的理論基礎(chǔ)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)建立了完善的食品安全快速檢測試劑盒、膠體金免疫試紙條開發(fā)以及單克隆抗體和抗原合成、免疫檢測技術(shù)的研究平臺(tái)。維德維康堅(jiān)持自主創(chuàng)新，現(xiàn)已建成了針對(duì)小分子化合物的抗體資源庫，庫容量近千種；并且借助國家獸藥安全評(píng)價(jià)中心的先進(jìn)技術(shù)平臺(tái)，整合自身的工藝優(yōu)勢，實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)品的高效產(chǎn)業(yè)化，迅速推出了當(dāng)前市場緊缺的檢測產(chǎn)品，為食品安全檢測市場提供了更多更優(yōu)的選擇。

維德維康基于扎實(shí)深厚的產(chǎn)品研發(fā)能力，不斷創(chuàng)新，利用酶聯(lián)免疫技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)，自主研發(fā)了孔雀石綠酶聯(lián)免疫試劑盒及孔雀石綠快速檢測卡系列產(chǎn)品?？兹甘G酶聯(lián)免疫試劑盒基于酶聯(lián)免疫技術(shù)，樣本中抗原與酶標(biāo)板上固定的抗原特異性競爭抗體，通過加入酶標(biāo)記物，催化底物顯色，根據(jù)顯色程度來判斷樣本中孔雀石綠的含量，檢出限可達(dá)到0.5μg/kg，準(zhǔn)確度高、靈敏性強(qiáng)，可快速準(zhǔn)確實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留的定性、定量檢測。

孔雀石綠快速檢測卡基于膠體金免疫層析技術(shù)，以膠體金為顯色媒介，利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，根據(jù)檢測卡顯色情況來判斷樣本中是否殘留孔雀石綠，實(shí)現(xiàn)定性或半定量檢測。經(jīng)驗(yàn)證，孔雀石綠檢測卡在魚肉、蝦肉等水產(chǎn)品中的檢出限為2.0μg/kg，具有方便快速靈敏等特點(diǎn)，適合用于大批量樣本現(xiàn)場篩查，能夠有效為國內(nèi)水產(chǎn)品質(zhì)量安全提供技術(shù)參考與服務(wù)。