諾如病毒研究進(jìn)展

王大鵬，上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院副研究員，碩士研究生導(dǎo)師。主要從事食源性致病微生物的污染與控制，包括致病微生物分子生態(tài)、流行病學(xué)監(jiān)測、快速檢測方法和致病機(jī)理等研究工作。

2002年，國際病毒分類委員會(huì)根據(jù)病毒的形態(tài)、抗原特性及遺傳進(jìn)化等特點(diǎn)將諾瓦克病毒歸入嵌杯狀病毒科，并正式更名為諾如病毒（Noroviurs，簡稱NoV）。

近年來，媒體曝光了多起因諾如病毒（Norovirus，以下簡稱“NoV”）污染導(dǎo)致的食品安全事件，目前，美國、英國、法國、德國、日本、澳大利亞、中國等諸多國家都有NoV感染的報(bào)道。NoV每年可導(dǎo)致全球1.25億人次感染和3.5萬人死亡，且發(fā)病量逐年攀升。通過對(duì)我國27個(gè)省份173家哨點(diǎn)門診2009年～2013年腹瀉病例的調(diào)查可以發(fā)現(xiàn)，NoV感染率高達(dá)11.6%（病例總數(shù)為34031，NoV感染病例為3950）。每年NoV導(dǎo)致全球直接經(jīng)濟(jì)損失42億美元，社會(huì)經(jīng)濟(jì)損失603億美元（其中，5歲以下嬰幼兒耗費(fèi)398億美元）。所以，NoV的防控已經(jīng)成為各國疾控部門關(guān)注的焦點(diǎn)之一。

諾如病毒簡介

1968年冬天，美國諾瓦克鎮(zhèn)的一所小學(xué)暴發(fā)了一起非細(xì)菌性急性腸胃炎事件，該事件導(dǎo)致學(xué)校半數(shù)以上學(xué)生出現(xiàn)急性嘔吐、腹瀉的癥狀，但是沒有鑒定出誘發(fā)該疾病的主要病原。直到1972年，美國科學(xué)家以免疫電鏡的方法證實(shí)4年前暴發(fā)急性腸胃炎的罪魁禍?zhǔn)资且环N小個(gè)子病毒，并將其命名為諾瓦克病毒（Norwalk virus）；后來，各國科學(xué)家都發(fā)現(xiàn)了類似的病原，以致該病毒有了很多別稱，如諾瓦克病毒（Norwalk virus）、類諾瓦克病毒（Norwalk-like virus）或小圓狀病毒（small round structured virus）等。時(shí)至2002年，國際病毒分類委員會(huì)（The International Committee on Taxonomy of Viruses，簡稱ICTV）根據(jù)病毒的形態(tài)、抗原特性及遺傳進(jìn)化等特點(diǎn)將其歸入嵌杯狀病毒科，并正式更名為諾如病毒（Noroviurs，簡稱NoV）。

NoV隸屬于嵌杯病毒科諾如病毒屬，病毒顆粒直徑27～34nm，無囊膜，屬單股正鏈RNA病毒，容易發(fā)生變異。病毒基因組7.5～7.8kb，共編碼3個(gè)開放閱讀框（ORF1-ORF3）。其中，ORF1編碼6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白；ORF2和ORF3分別編碼結(jié)構(gòu)蛋白VP1（主要衣殼蛋白）和VP2（次要衣殼蛋白）。根據(jù)NoV主要衣殼蛋白編碼區(qū)（ORF2）核苷酸序列的不同，將該病毒分為GI-GVII共7組，其中GI（GI 1-9）、GII（GII 1-22，其中11/18和19為豬源）和GIV組為人類易感，GIII為牛源，GV為鼠源，GVI和GVII為犬源。因此，嚴(yán)格來講，僅有GI、GII和GIV組NoV可以感染人類，被通稱為人源諾如病毒（human Norovirus，以下簡稱hNoV），其中流行毒株基因型為GII.4，可感染所有人群。另外，為了紀(jì)念1968年首次暴發(fā)NoV感染，將NoV原型毒株（GI.1）仍稱為諾瓦克病毒（Norwalk virus）。但是，該毒株不感染B型血人群。

hNoV研究已經(jīng)成為全球熱點(diǎn)，但其研究進(jìn)展非常緩慢。2014～2016年，Jones和Ettayebi等人分別以B細(xì)胞和人腸道上皮細(xì)胞培養(yǎng)物成功地實(shí)現(xiàn)了hNoV體外培養(yǎng)，然而這兩種增殖體系仍有諸多局限性。迄今，除鼠源NoV外，NoV暫無成熟的體外增殖體系。所以，建立病毒體外培養(yǎng)體系是深入研究hNoV的關(guān)鍵。

hNoV的感染和傳播

hNoV具有致病率高、感染劑量低、對(duì)外界抵抗力強(qiáng)等特點(diǎn)，是全球誘發(fā)急性非細(xì)菌性胃腸炎最重要的食源性病毒。hNoV感染的臨床癥狀表現(xiàn)為：噴射狀嘔吐、腹瀉、腹痛、偶爾伴有發(fā)燒。hNoV感染后潛伏期短，感染后24～28小時(shí)會(huì)表現(xiàn)出典型癥狀，持續(xù)12～24小時(shí)，病程1～7天；hNoV患者排毒時(shí)間長，在患者糞便中的檢出時(shí)間可以持續(xù)數(shù)周。以上特性是hNoV經(jīng)常在學(xué)校、醫(yī)院、游輪等較封閉的人員密集場所暴發(fā)疫情的根本原因。

hNoV傳播途徑廣泛，主要通過糞-口途徑進(jìn)行傳播，亦可經(jīng)食源、水源和氣溶膠傳播。常見果蔬（草莓、生菜等）和貝類（牡蠣、青口螺等）已被列為hNoV污染的高風(fēng)險(xiǎn)食品。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，生菜葉面、葉脈和氣孔中均可攜帶hNoV（見圖1）；牡蠣胃組織、消化盲囊、鰓組織和上前纖毛等均可吸附hNoV，其中胃組織中可以特異性結(jié)合病毒顆粒（見圖2）。因此，在處理和食用hNoV污染的食品時(shí)，需注意飲食衛(wèi)生并盡可能避免交叉污染。

hNoV的檢測和防控

hNoV呈現(xiàn)出全世界范圍頻發(fā)且各地發(fā)病率出現(xiàn)逐年增高的趨勢，這與人們對(duì)其認(rèn)識(shí)的深入、檢測方法靈敏度顯著提高有關(guān)。迄今為止，hNoV的檢測方法分別建立在病毒粒子外形、特異性核酸區(qū)段和主要抗原決定簇的基礎(chǔ)上，主要有電鏡法、免疫學(xué)方法和分子檢測法。其中，分子檢測方法因其應(yīng)用性好、靈敏度高等特點(diǎn)引起了廣泛的研究。但是，傳統(tǒng)的分子檢測方法無法區(qū)分樣品的擴(kuò)增模板是來自于完整的病毒顆粒還是游離的病毒核酸。我們建立了原位捕捉實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄方法，該方法以hNoV受體捕獲病毒顆粒，再以捕獲病毒顆粒的基因組為模板進(jìn)行核酸擴(kuò)增，破解了上述技術(shù)瓶頸。另外，該方法不需要提取病毒核酸，且可以規(guī)?；繖z測，這為hNoV的監(jiān)測提供了一個(gè)新選擇。

hNoV通常在半封閉環(huán)境（如幼兒園、敬老院、賓館、軍隊(duì)、學(xué)校和游艇等）中暴發(fā)，并且可以感染各年齡階段的人群（老年人和嬰幼兒更易感染），嚴(yán)重影響了人們的身體健康。各國的疾控部門也做出了各種努力來降低病毒對(duì)人類的影響，但是均未提出有效的防控方法。

目前，主要通過以下幾種方式降低hNoV感染率：①注意個(gè)人衛(wèi)生，飯前便后要充分洗手；②盡量不吃生食（尤其是貝類）；③即食性水果盡量削皮或進(jìn)行消毒處理；④如果需要處理因hNoV感染導(dǎo)致的嘔吐物和腹瀉物，可以使用5～10倍日常餐具消毒濃度的84消毒液與污物混合，10～20分鐘后再對(duì)污物進(jìn)行清理；如果有條件，可以佩戴口罩和手套進(jìn)行個(gè)人防護(hù)。另外，hNoV患者應(yīng)注意以下幾項(xiàng)要點(diǎn)：①自覺隔離靜養(yǎng)；②無需驚慌，安心靜養(yǎng)，一般3天內(nèi)會(huì)自愈；③注意避免脫水，補(bǔ)充電解質(zhì)和維生素；④不要從事任何食品生產(chǎn)，且毛巾、碗筷等需額外加熱消毒處理。

hNoV呈現(xiàn)出全世界范圍頻發(fā)且各地發(fā)病率出現(xiàn)逐年增高的趨勢，這與人們對(duì)其認(rèn)識(shí)的深入、檢測方法靈敏度顯著提高有關(guān)。hNoV通常在半封閉環(huán)境中暴發(fā)，并且可以感染各年齡階段的人群。