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    超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜快速精準(zhǔn)測(cè)定糧食中多種真菌毒素

    2017-04-27 06:04:26辛媛媛周明慧王松雪
    分析測(cè)試學(xué)報(bào) 2017年4期
    關(guān)鍵詞:同位素毒素質(zhì)譜

    葉 金,吳 宇,辛媛媛,周明慧,謝 剛,王松雪

    (國(guó)家糧食局科學(xué)研究院,北京 100037)

    超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜快速精準(zhǔn)測(cè)定糧食中多種真菌毒素

    葉 金,吳 宇,辛媛媛,周明慧,謝 剛,王松雪*

    (國(guó)家糧食局科學(xué)研究院,北京 100037)

    采用直接提取稀釋的快速前處理方法,結(jié)合穩(wěn)定同位素稀釋技術(shù),利用超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜,建立了糧食中16種真菌毒素的快速精準(zhǔn)分析方法。樣品采用乙腈-水-乙酸溶液(70∶29∶1,體積比)提取,以C18色譜柱進(jìn)行色譜分離,通過(guò)全掃描模式進(jìn)行定量檢測(cè),并采用穩(wěn)定同位素稀釋以減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量分析的影響。結(jié)果表明,16種真菌毒素在一定濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.999,4種常見糧食基質(zhì)(小麥、玉米、大米、大麥)的限量濃度水平的加標(biāo)回收率(n=6)為75.3%~123.5%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.41%~14.7%。該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確,適用于糧食中真菌毒素的檢測(cè),可滿足日常監(jiān)測(cè)工作的需要。

    真菌毒素;高分辨質(zhì)譜;糧食;穩(wěn)定同位素稀釋

    真菌毒素是由真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物,常見的真菌毒素包括黃曲霉毒素(Aflatoxin,AF)、嘔吐毒素(Deoxynivalenol,DON)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)、伏馬毒素(Fumonisin,FB)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)、T-2毒素(T-2 toxin,T2)和HT-2毒素(HT-2 toxin,HT-2),廣泛存在于各種糧油及其制品中。據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織估計(jì),全世界谷物供應(yīng)鏈的25%受到真菌毒素的污染,對(duì)人體和動(dòng)物的健康具有極大危害。全世界已有100多個(gè)國(guó)家規(guī)定了糧食中主要真菌毒素的限量[1],其中歐盟已制定了DON,ZEN,AF,FB,OTA,T2和HT-2等真菌毒素的法規(guī)限量和推薦限量[2-3],我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定谷物的DON限量為1 000 μg/kg,ZEN限量為60 μg/kg,黃曲霉毒素B1(AFB1)限量為5~20 μg/kg,OTA限量為5 μg/kg[4]。為了更好地加強(qiáng)對(duì)糧食中真菌毒素的監(jiān)測(cè),保障人畜健康,開發(fā)快速、高通量、前處理簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的真菌毒素檢測(cè)方法具有非常重要的意義。

    目前,真菌毒素的檢測(cè)方法主要包括酶聯(lián)免疫試劑盒法[5]、膠體金試紙條法[6-7]、免疫親和柱凈化液相色譜法[8-9]和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[10-13]。其中酶聯(lián)免疫試劑盒和膠體金試紙條法均屬于快速檢測(cè)方法,其優(yōu)勢(shì)在于方法簡(jiǎn)單、便捷、快速,對(duì)實(shí)驗(yàn)人員與實(shí)驗(yàn)條件要求不高,可用于樣品的快速篩查及現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),但方法的準(zhǔn)確度及重現(xiàn)性相對(duì)較差?;诿庖哂H和柱凈化的液相色譜法是目前真菌毒素檢測(cè)的主流方法,該方法具有特異性強(qiáng),靈敏度高,定量準(zhǔn)確,穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn),但由于需使用免疫親和柱凈化,對(duì)于多目標(biāo)毒素的檢測(cè)能力有限,還存在著免疫親和柱費(fèi)用較高,結(jié)果假陽(yáng)性等缺點(diǎn)[14]。高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有靈敏度高和抗干擾能力較強(qiáng)等特點(diǎn),因此可以采用較為簡(jiǎn)單的前處理方法。常用的前處理凈化方法有固相萃取法[15-17]和QuEChERS法[18-19],隨著儀器特異性和靈敏度的不斷提高,無(wú)需凈化的方法也開始出現(xiàn)[20-21],進(jìn)一步降低了樣品前處理時(shí)間和成本。

    四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜儀(Q-Exactive)具有分辨率高及定量能力好的優(yōu)點(diǎn),不同于三重四極桿低分辨質(zhì)譜使用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式通過(guò)目標(biāo)物的離子對(duì)進(jìn)行定量分析,高分辨質(zhì)譜可以利用目標(biāo)物母離子的精確分子量直接定量,無(wú)需對(duì)目標(biāo)物逐個(gè)優(yōu)化子離子及相關(guān)參數(shù),對(duì)于多目標(biāo)物分析可以極大地降低檢測(cè)方法的時(shí)間,同時(shí)又能很好地避免低分辨質(zhì)譜易受基質(zhì)干擾而產(chǎn)生假陽(yáng)性的現(xiàn)象[22]。目前基于Q-Exactive的檢測(cè)方法已在多個(gè)領(lǐng)域中得到快速發(fā)展和應(yīng)用[23-27]。

    本研究利用無(wú)需凈化的直接提取稀釋前處理方法,有效避免了凈化過(guò)程中目標(biāo)物的損失,減少了前處理時(shí)間及成本,通過(guò)高分辨質(zhì)譜很大程度上降低了檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性,并利用穩(wěn)定同位素稀釋技術(shù)降低了基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量分析的影響。本文通過(guò)優(yōu)化儀器條件,建立了快速檢測(cè)糧食中16種真菌毒素的方法,為有效監(jiān)測(cè)糧食中真菌毒素種類和含量提供了有力的技術(shù)支持。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 材料與試劑

    雪腐鐮刀菌烯醇(NIV)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)、3-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(3-AcDON)、15-乙?;撗跹└牭毒┐?15-AcDON)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇-3-葡萄糖苷(DON-3G)、T-2毒素(T-2)、HT-2毒素(HT-2)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、赭曲霉毒素A(OTA)、伏馬毒素B1(FB1)、伏馬毒素B2(FB2)、雜色曲霉毒素(ST)標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為0.2~20 μg/mL,Romer公司);黃曲霉毒素B1(AFB1)、黃曲霉毒素B2(AFB2)、黃曲霉毒素G1(AFG1)、黃曲霉毒素G2(AFG2)標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為0.03~1.0 μg/mL,Sigma-Aldrich公司);13C標(biāo)記的黃曲霉毒素(B1,B2,G1,G2)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、雪腐鐮刀菌烯醇、3-乙?;撗跹└牭毒┐?、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、伏馬毒素(B1,B2)、T-2毒素、HT-2毒素、雜色曲霉毒素的14種穩(wěn)定同位素標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為0.01~2.5 μg/mL,Romer公司);甲醇、乙腈(HPLC級(jí),F(xiàn)isher公司);乙酸銨、甲酸、乙酸(HPLC級(jí),美國(guó)Sigma公司);0.2 μm PTFE膜針頭過(guò)濾器(PALL公司);實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q超純水。

    1.2 儀器與設(shè)備

    四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜儀Q-Exactive(ThermoFisher Scientific公司);UltiMate 3000快速液相色譜儀(ThermoFisher Scientific公司);3-30K離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司);GT10-1 高速臺(tái)式離心機(jī)(北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司);Roto-Shake Genie 多用途旋轉(zhuǎn)搖床(美國(guó)Scientific Industries公司);Milli-Q超純水純化系統(tǒng)(美國(guó)Millipore公司),渦旋振蕩器(德國(guó)IKA公司)。

    1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

    分別移取一定體積的16種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中,用水定容至刻度,得到16種真菌毒素的混標(biāo)儲(chǔ)備液,于-20 ℃保存,濃度詳見表1。

    穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液:根據(jù)表1相應(yīng)的穩(wěn)定同位素混合溶液的濃度,分別移取一定體積的14種真菌毒素穩(wěn)定同位素單標(biāo)溶液于4 mL儲(chǔ)液瓶中,用水稀釋至2 mL配制穩(wěn)定同位素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,充分混勻后于-20 ℃避光保存。準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液適量,用乙腈-水-乙酸溶液(35∶64.5∶0.5)逐級(jí)稀釋,配制成不同濃度系列的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。向400 μL內(nèi)插管中加入20 μL 14種穩(wěn)定同位素混合工作液,再分別吸取180 μL系列標(biāo)準(zhǔn)工作液于內(nèi)插管中,渦旋混勻后準(zhǔn)備上機(jī)檢測(cè)。

    表1 真菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度及相應(yīng)的穩(wěn)定同位素混合溶液Table 1 Concentrations of the standard stock solutions of mycotoxins and related stable isotope standard solutions

    -:no data

    1.4 樣品處理

    樣品經(jīng)粉碎(90%通過(guò)40目篩)混勻后,準(zhǔn)確稱取5.00 g,加入20 mL乙腈-水-乙酸(70∶29∶1)混合溶劑,渦旋混勻1 min,振蕩30 min后,以4 000 r/min離心10 min使固液分離。準(zhǔn)確轉(zhuǎn)移0.5 mL上清液于1.5 mL離心管中,加入0.5 mL水稀釋,渦旋混勻1 min,然后于12 000 r/min離心10 min,取上清液用0.22 μm的PTFE濾膜過(guò)濾,吸取20 μL預(yù)先渦旋混勻的穩(wěn)定同位素混合溶液于400 μL內(nèi)插管中,再加入180 μL的樣品濾液,混合后待測(cè)。

    1.5 儀器條件

    液相色譜條件:Waters 公司CORTECSTM UPLC C18柱(100 mm×2.1 mm,1.6 μm);柱溫40 ℃;進(jìn)樣量2 μL。流動(dòng)相:A為甲醇,B為含0.1%(體積分?jǐn)?shù))的甲酸和1 mmol/L乙酸銨的水溶液,流速:0.3 mL/min。梯度洗脫條件:0~2 min,90% B;2~3 min,90% ~80% B;3~4 min,80%~79% B;4~5 min,79%~74% B;5~7 min,74% B;7~10.5 min,74% ~40% B;10.5~13.5 min,40% B;13.5~14.5 min,40%~5% B;14.5~17 min,5% B;17~18 min,5% ~90% B;18~21 min,90% B。

    質(zhì)譜條件:加熱電噴霧離子源(HESI)溫度為300 ℃;毛細(xì)管電壓為3.2 kV;離子傳輸管溫度為320 ℃;鞘氣為35 unit,輔助氣為10 unit。full scan/ddms2掃描模式:采集范圍為200~800 Da,正離子采集;一級(jí)質(zhì)譜分辨率為70 000 FWHM,二級(jí)質(zhì)譜分辨率為17 500 FWHM;碰撞池能量(NCE)為35 eV。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 真菌毒素的選擇

    本研究選擇的16種真菌毒素目標(biāo)物涵蓋了我國(guó)食品安全限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定及歐盟已制定限量法規(guī)的真菌毒素及其相關(guān)的衍生物。

    圖1 直接提取稀釋方法與商品化的多毒素凈化方法(MycoSpin 400)對(duì)于目標(biāo)毒素回收率(n=3)結(jié)果Fig.1 Recoveries of mycotoxins purified with direct extract and MycoSpin 400 methods

    2.2 前處理方法的選擇

    由于真菌毒素的理化性質(zhì)相差較大,常見的凈化方法容易造成毒素的損失。鄭翠梅等[15]在研究中發(fā)現(xiàn)使用MycoSep 226多功能凈化柱時(shí),會(huì)吸附FBs,DON糖苷化衍生物和OTA等毒素。此外,由于凈化方法步驟較多,不利于大批量樣品的快速處理。近年來(lái)隨著質(zhì)譜儀器抗干擾能力及靈敏度的不斷提升,直接提取且無(wú)需凈化的方法被越來(lái)越多的使用。圖1為直接提取稀釋法與商品化的多毒素凈化填料(MycoSpin 400)凈化方法對(duì)16種目標(biāo)毒素的回收率,MycoSpin 400前處理方法按照其產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行。結(jié)果顯示,MycoSpin 400對(duì)于DON-3G,F(xiàn)B1,F(xiàn)B2,OTA 4種真菌毒素的回收率不高,主要由于該凈化填料對(duì)于這些毒素有一定的吸附,會(huì)導(dǎo)致凈化過(guò)程中目標(biāo)毒素的損失,影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性,而直接提取稀釋法由于無(wú)需凈化步驟,避免了該過(guò)程中目標(biāo)物的損失,對(duì)于所有目標(biāo)毒素的回收率均在91%~113%之間。因此,直接提取稀釋法更適合于多種真菌毒素的快檢前處理,而且處理過(guò)程更加簡(jiǎn)單、快捷。

    圖2 16種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的色譜圖Fig.2 Chromatogram of 16 mycotoxins mixed standard solution 1.NIV,2.DON,3.DON-3G,4.3-AcDON,5.15-AcDON,6.AFG2,7.AFG1,8.AFB2,9.AFB1,10.HT-2,11.FB1,12.T-2,13.ZEN,14.OTA,15.ST,16.FB2

    2.3 基質(zhì)效應(yīng)

    由于本方法前處理采用直接提取稀釋法,樣品中會(huì)存在一定的基質(zhì)效應(yīng)干擾。本實(shí)驗(yàn)對(duì)常見的4種糧食基質(zhì)進(jìn)行了考察,并以目標(biāo)物在空白基質(zhì)液中的峰面積與溶劑中峰面積的百分比來(lái)評(píng)估基質(zhì)效應(yīng),當(dāng)結(jié)果接近100%時(shí),表明無(wú)明顯的基質(zhì)效應(yīng),而高于100%說(shuō)明有基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng),低于100%則說(shuō)明有基質(zhì)抑制效應(yīng)。16種真菌毒素在4種常見糧食基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果顯示,16種真菌毒素的基質(zhì)效應(yīng)為61.0%~118.4%,說(shuō)明在這幾種常見的基質(zhì)中存在一定的基質(zhì)增強(qiáng)或抑制效應(yīng)。如玉米基質(zhì)中的黃曲霉毒素,基質(zhì)抑制作用明顯(61.0%~84.4%)?;|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線是一種常見的減少基質(zhì)效應(yīng)的方法,但是由于真菌毒素污染的普遍性,16種毒素均不含的空白基質(zhì)不易獲得,特別是完全匹配的基質(zhì)難以獲得,而代表性基質(zhì)的普適性面臨挑戰(zhàn),具有較大的不確定性,導(dǎo)致基質(zhì)匹配定量在標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)中的應(yīng)用受到局限。因此,為了更好消除基質(zhì)效應(yīng)的影響,本實(shí)驗(yàn)采用穩(wěn)定同位素稀釋法進(jìn)行定量,以確保結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

    2.4 檢測(cè)條件的優(yōu)化

    對(duì)比含不同比例鹽和酸的弱洗脫流動(dòng)相對(duì)16種真菌毒素質(zhì)譜響應(yīng)的影響,結(jié)果顯示,以水為流動(dòng)相時(shí),大部分的離子響應(yīng)不高,加鹽后大多數(shù)毒素的響應(yīng)明顯提高,其中乙酸銨的增強(qiáng)效果比甲酸銨明顯,同時(shí)低濃度(1 mmol/L)鹽比高濃度(2 mmol/L及5 mmol/L)鹽的響應(yīng)信號(hào)更強(qiáng)。而FB1和FB2需要在0.1%甲酸存在時(shí)才有明顯的質(zhì)譜響應(yīng),因此,最終選擇含有0.1%甲酸和1 mmol/L NH4Ac的水相作為弱洗脫流動(dòng)相。

    2.5 目標(biāo)離子的選擇

    基于三重四極桿質(zhì)譜儀的檢測(cè)需要對(duì)離子對(duì)及相關(guān)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,以選擇最佳的母離子、子離子。對(duì)于多目標(biāo)化合物的同時(shí)檢測(cè)方法,需花費(fèi)大量的時(shí)間對(duì)質(zhì)譜條件進(jìn)行優(yōu)化。而利用Q-Exactive高分辨質(zhì)譜以母離子的精確質(zhì)量數(shù)直接定量,無(wú)需優(yōu)化子離子及相關(guān)參數(shù),可簡(jiǎn)化質(zhì)譜條件的優(yōu)化過(guò)程,有效提高實(shí)驗(yàn)效率。本實(shí)驗(yàn)采用全掃描模式對(duì)目標(biāo)物的不同加合離子進(jìn)行選擇,采用響應(yīng)最高的加合離子作為檢測(cè)離子。實(shí)驗(yàn)中觀察到HT-2等目標(biāo)毒素的加鈉峰信號(hào)較強(qiáng),但考慮到加鈉離子不易碎裂,難以進(jìn)行二級(jí)定性分析,因此選擇加氫(M+H)和加銨(M+NH4)進(jìn)行比較。在當(dāng)前流動(dòng)相梯度下,DON-3G,HT-2,T-2的加銨峰的信號(hào)更強(qiáng),而其他毒素均為加氫峰信號(hào)更強(qiáng),選擇上述最佳的加合離子作為檢測(cè)離子進(jìn)行分析。16種真菌毒素的色譜圖見圖2。

    2.6 方法學(xué)驗(yàn)證

    2.6.1 線性范圍、檢出限及定量下限 配制16種真菌毒素的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,以穩(wěn)定同位素稀釋法進(jìn)行定量,相關(guān)信息見表2。結(jié)果表明,在各自的線性范圍內(nèi),16種真菌毒素線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.999。對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行逐級(jí)稀釋,以3倍信噪比(S/N=3)計(jì)算檢出限(LOD),S/N=10計(jì)算定量下限(LOQ),結(jié)果見表3。16種真菌毒素的LOQ均低于我國(guó)和歐盟規(guī)定的糧食中真菌毒素限量,說(shuō)明本方法可以滿足日常檢測(cè)的需要。

    表2 相關(guān)毒素的保留時(shí)間和選擇離子的精確分子量Table 2 Retention times and accurate masses of selected ions

    表3 16種真菌毒素的線性范圍、檢出限及定量下限Table 3 Linear ranges,LODs and LOQs of 16 mycotoxins

    2.6.2 準(zhǔn)確度與精密度 取空白玉米、小麥、大麥、大米樣品,分別添加高、中、低3個(gè)濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按“1.4”方法進(jìn)行處理,每個(gè)加標(biāo)水平進(jìn)行6次重復(fù)實(shí)驗(yàn),加標(biāo)濃度、回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)見表4。16種真菌毒素的回收率均在75.3%~123.5%之間,RSD為0.41%~14.7%,符合歐盟法規(guī)[28]對(duì)于真菌毒素檢測(cè)方法回收率和RSD的要求。

    2.6.3 質(zhì)控樣品的考察 為了進(jìn)一步驗(yàn)證本方法的準(zhǔn)確性和適用性,使用本方法測(cè)定了FAPAS能力測(cè)試玉米樣品(FAPAS T04246QC)。結(jié)果如表5所示,證書標(biāo)示的8種真菌毒素的檢測(cè)值均在范圍內(nèi),且接近標(biāo)示中值,表明本方法準(zhǔn)確可靠。相比于基于三重四極桿(QQQ,TSQ QUANTUM ULTRA)的檢測(cè)方法[18],兩種方法的相對(duì)平均偏差均不大于5.8%,結(jié)果無(wú)顯著性差異。但高分辨質(zhì)譜方法(HRMS)的定量更加簡(jiǎn)單,且無(wú)需對(duì)目標(biāo)物逐個(gè)優(yōu)化母離子、子離子和碰撞能量,對(duì)多目標(biāo)物分析時(shí)可以有效減少建立儀器方法的難度與時(shí)間,便于實(shí)驗(yàn)室快速建立準(zhǔn)確可靠的定量方法。

    表4 16種真菌毒素的回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 4 Recoveries and relative standard deviations(RSDs) of 16 mycotoxins(n=6)

    表5 FAPAS能力測(cè)試樣品的檢測(cè)結(jié)果Table 5 Results of FAPAS proficiency test sample

    (續(xù)表5)

    CompoundContent(μg/kg)HRMSQQQRelativeaveragedeviation(%)Assignedvalue(μg/kg)Range(μg/kg)HT-2102.07108.215.810659~152OTA3.123.052.22.871.61~4.13T-2138.87145.624.815187~215ZEN212.01221.504.4212126~298

    2.7 實(shí)際樣品的測(cè)定

    采用本方法對(duì)某地區(qū)的10份小麥樣品進(jìn)行檢測(cè),共檢出NIV,DON,DON-3G,15-AcDON,3-AcDON,AFB1,AFB2,ZEN,ST 9種真菌毒素,其他7種真菌毒素均未檢出,結(jié)果如表6所示。部分檢出毒素的定性結(jié)果如圖3所示。近年來(lái)由于異常氣候的原因,導(dǎo)致我國(guó)部分地區(qū)真菌毒素的污染較為嚴(yán)重,因此加強(qiáng)日常監(jiān)測(cè)尤為重要。本方法可以適用于大量糧食樣品中真菌毒素的快速準(zhǔn)確定量分析。

    表6 10份小麥樣品中真菌毒素毒素的含量Table 6 Contents of mycotoxins in 10 wheat samples w/(μg·kg-1)

    圖3 實(shí)際樣品(A)和標(biāo)準(zhǔn)溶液(B)中黃曲霉毒素B1的二級(jí)質(zhì)譜圖Fig.3 MS2 spectra of AFB1 in real sample(A) and standard solution(B)

    3 結(jié) 論

    基于Q-Exactive高分辨質(zhì)譜技術(shù),結(jié)合穩(wěn)定同位素,建立了糧食中16種真菌毒素的快速準(zhǔn)確檢測(cè)方法。樣品只需簡(jiǎn)單的提取、稀釋、離心和過(guò)濾,即可直接上機(jī)檢測(cè)。采用加標(biāo)回收法和測(cè)定基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確度和精密度,方法的定量下限可滿足國(guó)內(nèi)外對(duì)糧食中真菌毒素限量的要求。本方法前處理快速,無(wú)需凈化,避免了凈化過(guò)程中的損失與誤差,且利用穩(wěn)定同位素稀釋法定值,避免了基質(zhì)效應(yīng)的影響,可滿足大量糧食樣品中真菌毒素快速、準(zhǔn)確定量分析的需要。

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    Determination of Mycotoxins in Cereals by UPLC-Quadrupole/Orbitrap High Resolution Mass Spectrometry

    YE Jin,WU Yu,XIN Yuan-yuan,ZHOU Ming-hui,XIE Gang,WANG Song-xue*

    (Academy of State Administration of Grain,Beijing 100037,China)

    A UPLC-Quadrupole/Orbitrap high-resolution mass spectrometric(HRMS) method with stable isotope dilution technique was established for the determination of 16 mycotoxins in cereals.The sample was extracted with acetonitrile-water-acetic acid(70∶29∶1,by volume).The mycotoxins were separated on a C18column,and quantified in full scan mode.The method showed good linearities(r2>0.999) in a certain concentration range.The average recoveries and RSDs of mycotoxins in 4 kinds of cereals(wheat,maize,rice and barley) were in the range of 75.3%-123.5% and 0.41%-14.7%,respectively.The method was simple and accurate,and was suitable for the daily monitoring of mycotoxins.

    mycotoxins;high resolution mass spectrometry(HRMS);cereals;stable isotope dilution

    10.3969/j.issn.1004-4957.2017.04.002

    2016-09-26;

    2016-11-25

    國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFE0113000)

    O657.63;S852.44

    A

    1004-4957(2017)04-0449-08

    *通訊作者:王松雪,博士,研究員,研究方向:糧油分析和質(zhì)量控制,Tel:010-58523708,E-mail:wsx@chinagrain.org

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