柚皮苷對家兔十二指腸平滑肌收縮的影響

曾小弟+林仕忠+楊耀慧+葉秋杏+張桂榕+吉麗敏

[摘要] 目的 探討柚皮苷對家兔離體十二指腸平滑肌收縮運動的影響。 方法 采用離體平滑肌恒溫灌流的方法，取家兔離體十二指腸，在不同濃度柚皮苷溶液作用條件下，通過BL-420生物機能實驗系統(tǒng)測定其張力的變化，從而觀察十二指腸平滑肌收縮運動。 結(jié)果 分別加入不同濃度柚皮柑溶液后，家兔離體十二指腸平滑肌收縮張力較加藥前增強且有顯著性差異（P<0.05）。 結(jié)論 柚皮苷對家兔離體十二指腸平滑肌收縮具有促進作用。

[關(guān)鍵詞] 柚皮苷；家兔；十二指腸平滑??；收縮

[中圖分類號] R361 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）06-0030-03

[Abstract] Objective To investigate the effect of naringin on the contraction of in vitro duodenum smooth muscle in rabbits. Methods The method of in vitro smooth muscle perfusion at a constant temperature was used to collect the rabbit duodenum in vitro. Under the condition of different concentration of naringin solution， the changes of tension was determined by BL-420 bio-functional experiment system， so as to observe the contraction of duodenal smooth muscle. Results After adding different concentrations of naringin solution， the contractile tension of duodenal smooth muscle in rabbits in vitro was significantly higher than that before treatment， and the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion Naringin has a positive effect on the contraction of duodenum smooth muscle in rabbits in vitro.

[Key words] Naringin；Rabbits；Duodenal smooth muscle；Contraction

柚皮苷作為一種雙氫黃酮類化合物，具有抗炎鎮(zhèn)痛[1]、抗過敏[2]、降糖[3]、心肌保護[4]及抗動脈硬化、抗?jié)?、解痙和輻射防護等作用[5]。有些研究[6，7]表明柚皮苷具有降低膽固醇的作用。潘華新等[8]研究發(fā)現(xiàn)其具有較好的祛痰、止咳作用。裴昆等[9]最新研究發(fā)現(xiàn)柚皮苷有舒張氣管平滑肌的作用，其機制可能是抑制氣管平滑肌M 受體、H1受體和阻斷Ca2+通道從而抑制細胞Ca2+內(nèi)流。

目前國內(nèi)外對柚皮苷的研究主要關(guān)注于作為降血膽固醇的藥物，天然抗氧化劑和防腐保鮮劑及化學合成等。而對于胃腸道消化功能的作用鮮見報道。隨著人們生活節(jié)奏越來越緊湊、工作壓力越來越大，加之飲食結(jié)構(gòu)不合理，胃腸病已越來越常見，腹脹、腹瀉、便秘等消化道癥狀嚴重影響人們的生活質(zhì)量。本項目旨在研究柚皮苷對家兔離體十二指腸平滑肌收縮的影響，進一步來探討柚皮苷對胃腸道消化的作用，為臨床上預(yù)防和治療胃腸道疾病提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1 供試動物 健康成年家兔10只，空腹24 h，動物自由飲水。體重1.5～2.1 kg，雌雄兼用，由長沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供（scxk（湘）2014-0100）。

1.1.2 藥品與儀器 柚皮苷藥品（純度99%，由西安金綠生物工程技術(shù)有限公司提供）；新鮮臺氏液，自制（NaCl 40 g，10% KCl 10 mL，10% CaCl 10 mL，5% NaHCO3 100 mL，5% MgCl2 10 mL，5% NaH2PO4 5 mL，蒸餾水5000 mL）；BL-420 生物機能實驗系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；CW-2型恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）；張力換能器（中國北京航天醫(yī)學工程研究院）。本實驗于2015年7～12月在海南醫(yī)學院機能學實驗室完成。

1.2 實驗方法

1.2.1 柚皮苷溶液的配制 精密稱取三份2 g 柚皮苷粉末，分別裝入試劑瓶中，用蒸餾水配成114.8×10-4、57.4×10-4、28.7×10-4 mol/L三組溶液，備用。

1.2.2 生物機能實驗系統(tǒng)準備 開啟生物機能實驗系統(tǒng)，預(yù)熱和調(diào)節(jié)張力換能器，加蒸餾水入潔凈恒溫平滑肌槽內(nèi)，維持水溫37℃，在內(nèi)槽加入新鮮臺氏液 18 mL。

1.2.3 離體豚鼠腸道平滑肌的制備 使用木錘敲擊動物頭部致昏，立即剖腹取出十二指腸置于冷臺式液中，并將腸管分剪成 1～1.5 cm 長的小段，隨后用臺氏液將腸內(nèi)容物洗凈，放入另一份臺氏液浸浴中備用。棉線結(jié)扎腸管兩端，先將腸管置于盛有37℃ 恒溫臺氏液試管中洗凈，然后將腸管固定在恒溫平滑肌槽內(nèi)37℃。

1.2.4 對正常十二指腸平滑肌的作用 將腸段兩端分別固定于通氣鉤和張力換能器上，使張力負荷 2 g，等待平衡 10 min 后，觀察腸段自發(fā)性舒縮穩(wěn)定后描記腸正常運動曲線，然后往浴槽中分別加入柚皮苷低、中、高濃度溶液，每次給藥體積為 0.3 mL，應(yīng)用 BL-420生物機能實驗系統(tǒng)描記腸管舒縮曲線，打下加樣記號，觀察加藥后 2 min 曲線的變化，完成后立即使用37℃ 新鮮臺氏液沖洗3 次，待腸段收縮恢復(fù)正常后才可進行下一次給藥，記錄各組用藥前后60 s十二指腸收縮頻率和幅度的變化。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗進行分析比較。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。P<0.01表示差異有高度統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 柚皮苷對家兔離體十二指腸平滑肌節(jié)律性收縮幅度的影響

家兔離體十二指腸平滑肌在臺式液中節(jié)律性的收縮相對比較規(guī)律和穩(wěn)定（圖1）。不同濃度的柚皮苷（低濃度組28.7×10-4 mol/L、中濃度組57.4×10-4 mol/L、高濃度組114.8×10-4 mol/L）加入后對家兔離體十二指腸平滑肌的影響表現(xiàn)為收縮幅度升高（表1），表示柚皮苷對家兔離體十二指腸平滑肌的收縮幅度具有促進作用（圖2～4）。用藥前后比較，低濃度組對家兔離體十二指腸平滑肌收縮幅度影響有統(tǒng)計學意義（P<0.05），中、高濃度組對家兔離體十二指腸平滑肌收縮幅度的影響有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。

2.2柚皮苷對家兔離體十二指腸平滑肌節(jié)律性收縮頻率的影響

實驗顯示，家兔離體十二指腸平滑肌在臺式液中節(jié)律性的收縮相對比較規(guī)律和穩(wěn)定（圖1）。在收縮頻率方面，不同濃度的柚皮苷（低濃度組28.7×10-4 mol/L、中濃度組57.4×10-4 mol/L、高濃度組114.8×10-4 mol/L）加入后對家兔離體十二指腸平滑肌的影響表現(xiàn)為收縮頻率的升高（表2），表示柚皮苷對家兔離體十二指腸平滑肌的收縮頻率影響具有促進作用（圖2～4）。但低濃度組對家兔離體十二指腸的收縮頻率的影響不顯著（P>0.05），中、高濃度組對家兔離體十二指腸收縮頻率的影響顯著（P<0.05）。

3 討論

柚皮苷是一種雙氫黃酮類化合物，主要存在于蕓香科植物的果皮和果肉中。張涵等[10]研究提示柚皮苷對便秘模型小鼠排便有正向調(diào)節(jié)作用，其作用機制可能與促進小腸運動有關(guān)。陳海芳等[11]研究柚皮苷在體內(nèi)組織代謝中，柚皮苷在體內(nèi)的濃度由高到低依次為小腸>胃>肺>腎>腦>肝，且柚皮苷在體內(nèi)小腸及胃的消除峰值較其他組織更大，這種組織分布特點與歸經(jīng)理論以及傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論中枳殼用于脹滿疼痛，食積不化等藥理作用有一定聯(lián)系。小腸平滑肌收縮的具體外部表現(xiàn)為緊張性收縮、蠕動、分節(jié)運動等，通過平滑肌收縮張力高低及收縮頻率快慢可判斷小腸興奮性高低[12]。本文針對“不同濃度組柚皮苷溶液對家兔離體十二指腸平滑肌收縮的影響”進行研究，結(jié)果顯示，在收縮幅度方面，用藥前后比較，低、中、高濃度組均有顯著差異（P<0.05），說明柚皮苷溶液對家兔離體十二指腸平滑肌腸管收縮幅度具有促進作用。在收縮頻率方面，用藥前后比較，低濃度組變化不明顯（P>0.05），中、高濃度組有顯著性差異（P<0.05）。三個濃度組柚皮苷溶液均能使家兔離體十二指腸的收縮幅度和收縮頻率升高，說明中、高濃度柚皮苷溶液對離體十二指腸的收縮活動有促進作用。家兔離體小腸各段平滑肌盡管失去外來神經(jīng)的支配，但壁內(nèi)神經(jīng)叢依然存在。位于環(huán)行肌黏膜下邊緣與腸肌絲Cajal間質(zhì)細胞是小腸慢波活動的起搏器和傳導(dǎo)者。Cajal間質(zhì)細胞自發(fā)活動的產(chǎn)生和傳導(dǎo)易受到離子環(huán)境、神經(jīng)遞質(zhì)和激素等生物活性物質(zhì)的影響。在適宜的條件下，仍然能夠保持平滑肌收縮的特性與腸壁神經(jīng)叢的作用[13]?，F(xiàn)代醫(yī)學研究表明，胃腸道上存在腎上腺素受體，各種離子通道，如Ca2+、K+通道等，生物體內(nèi)的許多激素，如腎上腺素與靶細胞膜上的特異性受體結(jié)合，形成激素-受體復(fù)合物而激活受體。活化的受體可催化 GTP 轉(zhuǎn)化為 CGMP，CGMP 胞漿內(nèi)Ca2+濃度降低，引起胃腸平滑肌細胞的超級化及舒張作用[14，15]。胃腸道運動是消化系統(tǒng)生理功能的重要組成部分，也是消化系統(tǒng)最重要的功能之一，其調(diào)節(jié)機制非常復(fù)雜，包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用、腸神經(jīng)系統(tǒng)的作用以及眾多腦腸肽（胃腸激素）的調(diào)節(jié)。胃腸動力障礙性疾病主要病理過程包括胃排空延遲及腸道排空減慢，胃腸協(xié)調(diào)運動紊亂等[16]。目前，調(diào)節(jié)平滑肌收縮反應(yīng)的確切機制尚未完全闡明，許多研究表明，鈣離子（Ca2+）在介導(dǎo)平滑肌收縮反應(yīng)中起核心作用，外來刺激作用于細胞膜，引發(fā)細胞內(nèi)游離鈣離子濃度升高，啟動平滑肌興奮-收縮耦聯(lián)過程[17]。黃酮類化合物對于平滑肌的作用機制是阻斷β受體，減少Na+、Ca2+內(nèi)流，降低平滑肌自律性。

綜上所述，柚皮苷溶液對家兔離體十二指腸的收縮活動具有促進作用，這種作用可能與柚皮苷通過某種信號通路影響家兔離體十二指腸平滑肌細胞中Ca2+的濃度有關(guān)，從而引起平滑肌的收縮變化，具體的柚皮苷作用機制尚待進一步研究與證實。

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（收稿日期：2016-11-12）