陳緒濤 肖大瑾 霍光華 龍昊知 劉景利（江西農(nóng)業(yè)大學生物資源保護和利用研究所；生物科學與工程學院，南昌 330045）

茶皂素的提取純化及其單當歸酰基茶皂苷元的制取

陳緒濤 肖大瑾 霍光華 龍昊知 劉景利
（江西農(nóng)業(yè)大學生物資源保護和利用研究所；生物科學與工程學院，南昌 330045）

榨取茶油后的茶籽餅粕含有豐富的茶皂素。為了精確定位茶皂素的生物活性及其構效關系，設計合成多樣性藥物分子，分離茶皂素單體和制取明確結構的苷元成為必要。本試驗采用水浴提取，樹脂吸附及沉析獲得茶皂素；通過酸水解、溶劑萃取、柱層析和高效液相色譜等方法制備其茶皂苷元，色譜和波譜定性定量。結果顯示，茶餅中茶皂素的水提取條件為：料液比1∶25（m／V）、80℃水浴，提取2 h，3次。純化條件為：茶皂素水提取液過AB-8型樹脂，依次用水、稀堿、水和90%乙醇洗脫，醇洗脫液冰浴沉析3 h，離心獲得茶皂素，純度達96%。然后將其進行鹽酸水解，條件為：3 mol／L鹽酸60%甲醇水溶液，料液比1∶15（m／V），85℃回流水解5 h；再進行乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析，收集石油醚-乙酸乙酯洗脫液，液相制備，獲得2種茶皂素苷元，波譜數(shù)據(jù)并與文獻比對，確定其結構為：21-當歸酰基-22-乙酰茶皂苷元Ⅰ和Ⅱ，兩者僅有C4位甲基和醛基差別。

茶皂素 茶皂苷元 提取純化

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茶（Camellia sp.）屬山茶科（Theaceae）植物，其中油茶在我國種植面積現(xiàn)有5 000多萬畝，并有逐年擴大的趨勢，江西、湖南、廣西等地為主產(chǎn)地［1］。油茶及其同屬植物的種籽是榨取茶油的主要原料［2］，相當于茶油三倍量的茶餅粕年產(chǎn)約40萬t［3］。味苦有毒的茶餅粕，主要被用于肥料、燃料、清塘劑等［4］，資源未能得到有效利用。茶餅粕含有10%左右［5］的混合茶皂素，可用于紡織業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)、建材業(yè)、醫(yī)藥、日化、食品以及農(nóng)業(yè)上［6］，且提取茶皂素后的茶餅還可以作為有機肥料或者蛋白飼料等［7］。雖然已有許多學者開展過茶皂素的提取分離研究，也有市售茶皂素產(chǎn)品供應，但其中存在復雜的混合茶皂素和較多色素等雜質(zhì)［8］。迄今人們已發(fā)現(xiàn)茶皂素種類至少有93種之多［9］，混合茶皂素不利于活性精確定位和構效關系確認，也需要具有明確化學結構和足夠產(chǎn)量的茶皂苷元來開展多樣性藥物分子設計和合成。

木荷葉皂苷具備強烈抗稻瘟病菌活性。彭玉萌等［10］制備出2種抗稻瘟病菌木荷皂苷，其EC50分別為5.91、5.20 mg／L，易磊等［11］研究發(fā)現(xiàn)木荷皂苷對稻瘟病菌細胞形態(tài)和生理生化指標具有較大的影響，但難以獲得足夠量的木荷皂苷苷元來實現(xiàn)其多樣化的分子設計合成和構效關系研究。茶和木荷同屬山茶科植物，均含豐富的當歸?；赵慕Y構皂苷。此外，與木荷葉相比，茶餅含有干擾提取分離的色素較少等。因此，本試驗研究茶餅粕茶皂素的提取純化和其苷元的制備，以期為茶籽餅的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

茶籽餅粕：南昌梅嶺風景村后山榨油廠；齊墩果酸（白色粉末，≥95%）：寶雞市方晟生物開發(fā)有限公司；GF254層析板：青島海洋化工廠分廠；硅膠（200～300目和300～400目）：青島海浪硅膠干燥劑有限公司；其他分析純或色譜純試劑：西隴化工。

1.2 儀器

EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海愛朗儀器有限公司；JW-3022HR型高速冷凍離心機：安徽嘉文儀器裝備有限公司；Sartorius電子自動分析天平：上海樹信儀器儀表有限公司；KQ-C玻璃儀器氣流烘干器：鞏義市英峪予華儀器廠；KQ3200型超聲清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；TU-1900型雙光束紫外可見分光光度計：北京普析通用儀器有限責任公司；LC3000半制備型高效液相色譜儀：北京創(chuàng)新通恒科技有限公司；Waters 2695型高效液相色譜儀：美國Waters公司；Bruker400型核磁共振儀：瑞士Bruker公司。

1.3 方法

1.3.1 茶皂素的提取

稱取60℃干制的茶餅粕粉，以料液比1∶10，80℃水浴，提取1 h，1次為基礎，分別設定提取溫度（40、50、60、70、80、90℃）、提取時間（15、30、60、120、180 min）、料液比（1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25）、提取次數(shù)（1、2、3、4、5次）等單因素不同水平試驗，每組試驗重復3次，以茶皂素得率為指標。選取L27（313）正交設計表，進行四因素三水平正交試驗并考察其交互作用，最后試驗驗證了最佳試驗參數(shù)的提取效果。

1.3.2 茶皂素純化

將茶皂素水提液直接過AB-8型大孔樹脂［12］，待飽和吸附后，依次用蒸餾水（洗至無色，后面同上）、0.1%NaOH、蒸餾水（洗至中性）沖洗，最后收集90%乙醇水洗脫液，冰浴3 h，離心獲得純化的茶皂素備用。

1.3.3 茶皂苷元制備［13］

以鹽酸濃度為4 mol／L、水解溫度為100℃、水解時間為6 h、料液比為1∶20（m／V）為基礎，分別進行鹽酸濃度（1、2、3、4、5 mol／L）、水解溫度（60、70、80、90、100℃）、水解時間（3、4、5、6、7 h）和料液比（1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25）等單因素試驗后，選用L9（34）正交設計進行正交試驗獲得優(yōu)化的茶皂苷元制備參數(shù)并驗證最佳參數(shù)組合，再用石油醚-乙酸乙酯（3 ∶1、2∶1、1∶1）為洗脫液，分別以200～300目和300～400目為分離材料，過硅膠柱，半制備高相液相色譜制得茶皂苷元單體［色譜條件：BDS HYPERSIL C18色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm），流動相A為色譜純乙腈，B為二次蒸餾水，檢測波長為280 nm，柱溫30℃，流速2 mL／min，進樣量100 μL，記錄時間30 min，洗脫程序為均相洗脫即A相72%、B相為28%］。

1.3.4 茶皂素及其皂苷元的定性定量分析

1.3.4.1 薄層（TLC）定性檢測

采用二元展開劑展開，茶皂素展開劑為氯仿∶甲醇=7∶10；茶皂苷元展開劑為石油醚∶乙酸乙酯= 1∶1。顯色劑均為10%硫酸乙醇溶液［14］。

1.3.4.2 高效液相色譜（HPLC）分析茶皂素及其苷元

準確稱取水提粗茶皂素、純化茶皂素及其茶皂苷元各2 mg，溶于1 mL色譜純甲醇超聲溶解，0.45 μm微孔濾膜過濾。利用Waters分析型高效液相進行分析。色譜條件：BDS HYPERSIL C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A為色譜純乙腈，B為二次蒸餾水，檢測波長為280 nm，柱溫30℃，流速0.5 mL／min，進樣量5 μL，記錄時間1 h，茶皂素洗脫程序為0～25～35～40～55～60 min，10% ～60% ～62%～78%～80%～100%（A相），混合茶皂苷元洗脫程序為0～3～10～25～30 min，40% ～60%～90% ～100%（A相），單體茶皂苷元洗脫程序為均相洗脫即A 相72%、B相為28%。

1.3.4.3 比色法測定茶皂素含量

分別稱取提取的粗茶皂素、純化茶皂素和齊墩果酸各0.015 0 g，溶于甲醇并定容至50 mL，準確稱量香草醛0.506 1 g，溶于冰醋酸并定容至10 mL，備用。分別取已配好的齊墩果酸母液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于6支干凈的試管中，水浴蒸干，再向每支試管加0.8 mL高氯酸、0.2 mL已配好的香草醛，70℃水浴30 min，然后冰浴5 min后向各試管加入5 mL冰醋酸，550 nm處測定吸光值［15］。以吸光度值對齊墩果酸的質(zhì)量濃度繪制標準曲線，得到：Y= 5.750 1X-0.006 9（R2=0.997 5），說明齊墩果酸在10～50 μg／mL與吸光度呈現(xiàn)很好的線性關系。同樣測定樣品的吸光度值，根據(jù)此曲線計算出相應濃度。

1.3.4.4 顯色法［14］和核磁（NMR）波譜法判別茶皂苷元的結構

Molish反應：取2 mg茶皂苷元粉末于試管中，加3 mL甲醇溶解后，加入2滴10% α-萘酚乙醇溶液，搖勻，沿試管壁加入1 mL濃硫酸，觀察界面處顏色變化；Libermann Burchard反應：取2 mg茶皂苷元粉末于試管中，加2 mL醋酸酐溶解后，加2滴濃硫酸搖勻，觀察混合液顏色變化。

取10mg純化的茶皂苷元用CD3OD溶解，轉(zhuǎn)入NORELL-ST500核磁管中，上 NMR波譜儀測定。將其碳、氫譜化學位移和偶合常數(shù)等與文獻比對和分析，確定了茶皂苷元的結構。

2 結果與分析

2.1 茶皂素提取參數(shù)優(yōu)化

2.1.1 單因素對茶皂素提取率的影響

由圖1可知，隨著提取溫度的提高茶皂素提取率也在升高，但是在80℃后有所下降；提取3次之后，茶皂素提取率沒有很大變化；提取時間在2 h前，茶皂素提取率隨時間而增加，2 h后提取率趨于平緩；料液比亦有類似規(guī)律，即當料液比在1∶15前，茶皂素提取率隨料液比增加而快速提高，在其之后，隨著料液比增加而提取率增加趨于緩慢變化。

2.1.2 多因素及其交互作用對茶皂素提取率的影響

表1中，茶皂素提取率的極差分析結果顯示，4個因素對茶皂素提取率的影響能力大小為：提取次數(shù)（B）＞料液比（D）＞提取溫度（A）＞提取時間（C）。優(yōu)化的茶皂素提取條件為：A3B3C1D3，即提取溫度為90℃，提取次數(shù)為4次，提取時間為1 h，料液比為1∶25。

圖1 不同因素對茶皂素提取率的影響

表1 茶皂素提取正交試驗結果

方差分析見表2。由F分布臨界值表查F0.01（2，6）=10.92，F(xiàn)0.05（2，6） =5.14，F(xiàn)0.01（4，6）=9.15，F(xiàn)0.05（4，6） =4.53，取顯著性水平為0.05。因素A、B、C、D的F值和交互作用（A×B）、（C×D）、（A× D）、（B×D）的F值分別與臨界值F0.05（2，6）和F0.05（4，6）對比。因素B、D的F值遠遠大于5.14，因素（A×B）、（A×D）、（B×D）的F值遠遠大于4.53，對試驗結果有顯著的影響。因素A、C、（C×D）、（A× C）對試驗結果具有一定的影響。各試驗因素對茶皂素提取率的影響程度大小依次為：提取次數(shù)（B）＞料液比（D）＞（B×D）＞（A×B）＞（A×D）＞（C×D）＞提取溫度（A）＞提取時間（C）＞（A×C）。由方差可以看出，應優(yōu)先確定提取次數(shù)（B）和料液比（D），而提取溫度（A）根據(jù)（A×B）交互作用來確定，提取時間（C）則根據(jù)（C×D）交互作用來確定，（A×B）和（C×D）交互搭配由表3，表4可得，提取溫度為A2即80℃時茶皂素提取率最高，提取時間為C3即3 h時茶皂素提取率最高，則最優(yōu)搭配方案為A2B3C3D3。

表2 茶皂素提取率方差分析

表3 不同提取次數(shù)不同提取溫度茶皂素的提取率／%

表4 不同料液比不同提取時間的茶皂素提取率／%

綜上所述，提取次數(shù)和料液比存在最優(yōu)值B3、D3，而提取溫度與提取時間在茶皂素提取率分析中都歸于誤差，其最優(yōu)水平由交互作用確定。按照該兩組最優(yōu)條件即A3B3C1D3和A2B3C3D3進一步考察茶皂素提取率，其結果分別為（7.83±0.13）%和（8.12±0.17）%。所以水提茶籽餅粕中茶皂素的理論最優(yōu)條件?。篈2B3C3D3，即 80℃水浴，料液比1∶25，每次3 h，提取4次?？紤]到實際耗能等經(jīng)濟問題，并且在單因素試驗中可以看到提取次數(shù)B為3次和4次時對結果影響不大，提取時間C為2 h和3 h時也對結果沒有顯著影響，結合理論最優(yōu)條件，將因素 B2、C2進行試驗考察，即組合 A2B2C3D3、A2B3C2D3、A2B2C2D3，經(jīng)過試驗驗證，A2B2C3D3、A2B3C2D3、A2B2C2D33種組合茶皂素的提取率為（8.05±0.21）%、（8.07±0.16）%、（8.01±0.14）%。因此，最少耗能的組合A2B2C2D3的茶皂素提取率與理論最優(yōu)組合的提取率相差不大，故選取A2B2C2D3，即80℃水浴，料液比1∶25，每次2 h，提取3次。

2.2 茶皂苷元的制備

2.2.1 單因素對茶皂素水解的影響

單因素試驗結果顯示在鹽酸濃度為3 mol／L、水解溫度為80℃、水解時間為5 h、料液比為1∶20 （m／V），各自茶皂苷元得率最高。

圖2 不同因素對茶皂苷元得率的影響

2.2.2 多因素對茶皂素水解的影響

表5極差分析結果可以看出，各因素對茶皂素水解影響的主次順序為A（鹽酸濃度）＞B（水解溫度）＞C（水解時間）＞D（料液比），故茶皂素鹽酸水解的最佳工藝為A2B3C2D1，即鹽酸濃度為3 mol／L、水解溫度為85℃、水解時間為5 h、料液比為1∶15 （m／V）。依此參數(shù)組合驗證茶皂苷元平均得率為（7.89±0.22）%。

表5 茶皂素水解正交試驗［L9（3）4］結果

2.3 提取純化的茶皂素和水解純化后的茶皂苷元

2.3.1 茶皂素及其苷元的薄層色譜（TLC）

如圖3所示：茶皂素因極性較大，在極性較弱展層劑即石油醚∶乙酸乙酯體系展開時，幾乎無上移（a，b），而在極性較強展開劑即氯仿∶甲醇體系展開時，粗品和純化后的茶皂素比移值分別為 Rf= 0.35，0.68（d）和Rf=0.35（e）；茶皂苷元因極性較其茶皂素減弱，在極性弱和極性強展層劑中比移值分別為Rf=0.43（c）和Rf=0.88（f）；不同純化程度的茶皂苷元在極性弱的展層劑中顯示不同的斑點，即粗茶皂苷元（g）顯一條長帶，過一次柱后（i）是橢圓形帶，主點Rf=0.43，而過二次柱純化的僅有1個點即Rf=0.43的小橢圓點（h）。

圖3 茶皂素水解前后薄層圖

2.3.2 茶皂素及其苷元高效液相色譜（HPLC）

比色法測定出純化獲得的茶皂素純度為96%，粗品茶皂素、純化茶皂素和茶皂苷元HPLC色譜圖如圖4。粗品茶皂素出峰保留時間大致有3個時間段，即1～4 min，7～9 min，12～17 min；純化茶皂素出峰保留時間主要在12～17 min，在其余少數(shù)時間有少量小峰出現(xiàn)。由此，茶皂素混合皂苷在該色譜程序下出峰保留時間為12～16 min，不難看出雜質(zhì)色素等出峰保留時間在2～4 min和7～9 min，其中保留時間在7～9 min的為大部分雜質(zhì)類物質(zhì)；純化后茶皂苷元在梯度洗脫中，保留時間分別為15.8 min和19.2 min，單體茶皂苷元Ⅰ和Ⅱ在等度洗脫中，保留時間分別為5.1 min和6.2 min。

圖4 茶皂素及其茶皂苷元的高效液相色譜圖

2.3.3 制備的茶皂苷元的結構

茶皂素酸解產(chǎn)物Molish反應呈現(xiàn)陰性，即與濃硫酸接觸面處無紫色環(huán)出現(xiàn)，說明無糖基的存在。LibermannBurchard反應呈現(xiàn)陽性，即出現(xiàn)顏色有紅紫藍綠的變化，說明該物質(zhì)含有皂苷元骨架。

茶皂苷元Ⅰ碳、氫核磁共振譜化學位移：1HNMR（400MHz，CD3OD）δ 0.78（3H，s，25-H3），0.90（3H，s，26-H3），0.92（3H，s，29-H3），0.95（3H，s，30-H3），0.99（3H，s，24-H3），1.83 （3H，d，27-H3），1.69（3H，d，J=7.4Hz，21-OAng-4-H3），1.87（3H，s，22-O-Ac），1.99 （3H，s，21-O-Ang-5-H3），3.23（1H，dd，18 -H），3.50，3.60（2H，d，J=11.5Hz，28-H2），4.08（1H，m，3-H），4.34（1H，brs，16H），5.37 （1H，brs，12-H），5.84（1H，d，J=11.2Hz，22-H），6.87（1H，d，J=11.2Hz，21-H），7.4（1H，s，21-O-Ang-3-H），9.29（1H，s，23-H）.13CNMR（101 MHz，CD3OD）δ 9.6（C24），12.8（21-O -Ang，C5′），14.6（21-O-Ang，C4＇），15.4 （C25），17.4（C26），21.0（C30），21.8（C6），24.7 （22-O-Ac，C2″），25.6（C11），27.1（C2），27.8 （C27），28.9（C29），32.2（C7），33.7（C15），37.0 （C10），38.2（C20），39.7（C1），41.6（C18），42.6 （C8），44.7（C14），44.9（C9），45.4（C19），48.1 （C17），48.3（C5），56.9（C4），61.7（C28），70.19 （C16），72.9（C22），73.8（C21），79.8（C3），125.1 （C12），130.9（21-O-Ang，C2′），139.6（21-OAng，C3′），143.0（C13），168.8（21-O-Ang，C1′），173.1（22-O-Ac，C1″），208.6（C23）。

茶皂苷元Ⅱ碳、氫核磁共振譜化學位移：1HNMR（400MHz，CD3OD）δ 0.71（3H，s，25-H3），0.82（3H，s，26-H3），0.90（3H，s，29-H3），0.93（3H，s，30-H3），1.00（3H，s，24-H3），1.82 （3H，d，27-H3），1.91（3H，d，J=7.6Hz，21-O -Ang-4-H3），2.18（3H，s，22-O-Ac），2.40 （3H，s，21-O-Ang-5-H3），3.14（1H，dd，18 -H），3.87，3.92（2H，d，J=11.5Hz，28-H2），4.06（1H，m，3-H），4.91（1H，brs，16H），5.24 （1H，brs，12-H），5.77（1H，d，J=11.1Hz，22-H），6.86（1H，d，J=11.2Hz，21-H），7.20（1H，s，21-O-Ang-3-H）.13C-NMR（101 MHz，CD3OD）δ 13.9（C24），15.3（21-O-Ang，C5＇），16.8（21-O-Ang，C4＇），18.1（C25），20.8 （C26），23.2（C30），25.6（C6），26.9（22-OAc，C2＂），27.4（C11），27.8（C2），29.4（C27），31.6（C29），32.5（C7），33.1（C15），34.8 （C10），36.7（C20），38.3（C1），38.5（C18），39.7（C8），40.2（C14），41.7（C9），42.9（C19），45.8（C17），46.4（C5），54.9（C4），69.9（C28），71.2（C16），73.1（C22），74.6（C21），77.9 （C3），123.1（C12），129.7（21-O-Ang，C2＇），138.0（21-O-Ang，C3＇），141.4（C13），169.2（21 -O-Ang，C1＇），177.9（22-O-Ac，C1＂）。

Ⅰ其中δC168.8、δH6.87（1H，d）和δC173.1、δH5.84（1H，d）分別為C21位的當歸?；虲22位的乙酰基，δC208.6和 δH9.29為 C23位的醛基。δC125.1和 δC143.0則為 C12、C13位的雙鍵。δc 61.7、δC70.1、δC79.8分別反映出C28位伯羥基、C16位和 C3位仲羥基，最后 δc 9.6～δC 56.9和δH0.78（3H，s）～δH5.37（1H，brs）則體現(xiàn)出齊墩果烷型五環(huán)骨架。Ⅱ其中δC169.2、δH6.86（1H，d）和δC177.9、δH5.77（1H，d）分別為C21位的當歸?；虲22位的乙?；?。δC123.1和δC141.4則為C12、C13位的雙鍵。δc 69.9、δC71.2、δC77.9分別反映出C28位伯羥基、C16位和C3位仲羥基，最后δc13.9～δC 54.9和 δH0.71（3H，s）～δH5.24 （1H，brs）則體現(xiàn)出齊墩果烷型五環(huán)骨架，上述數(shù)據(jù)均與文獻［16-18］一致，故確定所制備的茶皂苷元的結構為：21-當歸?；?22-乙酰茶皂苷元Ⅰ和Ⅱ，兩者僅有C4位甲基和醛基差別。結構式如圖5。

圖5 21-當歸?；?22-乙酰茶皂苷元結構式

3 討論與結論

水提取茶餅粕中的茶皂素，最佳提取參數(shù)：料液比1∶25（m／V），80℃水浴提取2 h，重復3次，總茶皂素得率為8.01%。經(jīng)AB-8大孔樹脂和冰浴沉析純化獲96%的混合茶皂素。茶皂苷元制備的水解條件為：3 mol／L鹽酸，料液比為1∶15（m／V）的60%甲醇水溶液85℃加熱回流5 h，分離制備獲得21-當歸酰基-22-乙酰茶皂苷元Ⅰ和Ⅱ，兩者僅有C4位甲基和醛基差別。

用水提取茶皂素，相對于醇提取茶皂素成本低，且有8.01%得率，與謝多等［19］乙醇提取茶皂素得率8.34%、彭游等［20］微波提取茶皂素9%相差不大。馬力等［21］在料液比1∶11、pH=9、80℃水浴6 h可萃取出茶餅中95.5%的茶皂素，但是在高溫堿性條件下可能會破壞茶皂素部分結構，特別是其結構中的酯鍵［22］。

AB-8大孔樹脂和冰浴沉析純化能有效的去除混合茶皂素中的色素雜質(zhì)，茶皂素所獲純度96%比H2O2高溫堿性條件脫色87.4%［23］更高。

茶皂素苷元種類至少有51種以上［5］，主要結構是齊墩果烷骨架，區(qū)別是當歸?；c惕各?；贑21 和C22變換，羥基（包括伯羥基）和乙酰基在C15、C16、C28位變換，醛基、甲基和伯羥基在 C23位變換。本試驗分離制備出其中2種，C21位當歸?；虲22位乙?；牟柙碥赵?，與前期鑒定的木荷玉蕊醇苷元［24］極其相似，較方便的提供了含一個當歸?；赵Y構，滿足了多樣化含當歸?；R墩果烷型苷元糖基化合成的需要，奠定了其構效關系研究的基礎和合成多樣化皂苷分子的需要。

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Extraction and Purification of Tea Saponin and Preparation of Single Angeloyl theasapogenol

Chen Xutao Xiao Dajin Huo Guanghua Long Haozhi Liu Jingli
（Institute of Bioresource Conservation and UtilizationCollege of Bioscience and Engineering，Jiangxi Agricultural University，Nanchang 330045）

Tea seed cake is the by-product of tea seed oil extracted and rich in tea saponin.In order to locate accurately its relationship between biological activity and structure-activity，design and synthesis of multifarious molecular drug，separation of tea saponin monomer and preparation of theasapogenol with explicit structure become necessary.In this paper，tea saponins were obtained using water bath extraction，resin adsorption and precipitation.The theasapogenols were prepared using acid hydrolysis，solvent extraction，column chromatography and HPLC.Qualitative and quantitative analysis of theasapogenol was performed by chromatography and spectrum.The results showed that the conditions for the water extraction of tea saponins were：ratio of material to liquid：1∶25（m／V），under waterbath at 80℃ for 2 h，triplicate.Purification conditions were as follows：Tea saponins were purified by AB-8 resin with elution H2O，0.1%NaOH，H2O and 90%ethanol successively，then precipitated 3 h，centrifuged and obtained with purity 96%.Two theasapogenols were prepared by the process of acid hydrolysis in 3 mol／L 60%HCl-Methanol aqueous solution with the ratio of material to liquid 1∶15（m／V），reflux at 85℃ for 5 h；extract with ethyl acetate，elution through silica gel column with petroleum ether-ethyl acetate，and semi-preparative HPLC.The theasapogenols were identified as 21-O-angeloyl-22-O-acetyl theasapogenolⅠandⅡaccording to their spectrum data and compared with literatures.TheasapogenolⅠdiffers from theasapogenolⅡonly at the group C-4 position，4-aldehyde or 4-methyl.

tea saponin，theasapogenol，extraction and purification

TS229

A

1003-0174（2017）03-0088-09

時間：2017-01-20 08：53：13

國家自然科學基金（21266010），江西省研究生創(chuàng)新專項資金（YC2014-S196），江西省自然科學基金（20132BAB204028）

2015-12-31

陳緒濤，男，1990年出生，碩士，微生物學

霍光華，男，1963年出生，博士，教授，天然藥用成分鑒定、制備與產(chǎn)品開發(fā)