蒲公英不同提取物抗炎效果研究

侯京玲 ， 周霄楠 ， 馮沙沙 ， 趙興華

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院中獸醫(yī)學(xué)院 ， 河北保定071001)

蒲公英不同提取物抗炎效果研究

侯京玲 ， 周霄楠 ， 馮沙沙 ， 趙興華

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院中獸醫(yī)學(xué)院 ， 河北保定071001)

為了解蒲公英主要藥效成分的抗炎效果，通過(guò)建立二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型篩選出蒲公英的抗炎成分，并通過(guò)二甲苯致小鼠耳廓腫脹，蛋清致大鼠足跖腫脹及大鼠棉球肉芽腫模型，研究蒲公英抗炎成分對(duì)毛細(xì)血管擴(kuò)張和通透性亢進(jìn)、滲出水腫、白細(xì)胞向炎癥聚集、纖維組織增生的抑制作用。結(jié)果顯示，蒲公英的主要抗炎成分為蒲公英黃酮，對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹，蛋清致大鼠足跖腫脹及大鼠棉球肉芽腫均有明顯抑制作用。表明蒲公英黃酮對(duì)急慢性炎癥均具有良好的抑制作用，并且高劑量組的蒲公英黃酮抗炎效果最好。

蒲公英 ； 黃酮 ； 腫脹 ； 炎癥 ； 抗炎

蒲公英味苦甘、性寒、無(wú)毒，入肝、胃經(jīng)，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、利尿通淋等功效。臨床上主要用于治療癤癰、急性乳腺炎、感冒等多種炎癥性疾病。蒲公英的抗炎作用在現(xiàn)代藥理學(xué)中有一定的發(fā)展，但都是以全草或粗提物來(lái)進(jìn)行的，單體成分的抗炎研究較少。如 Gonzalez-Castejon等[1]研究表明，蒲公英可用于治療急性扁桃體炎。Schutz等[2]用藥蒲公英乙醇提取物可部分抑制角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足跖水腫。Koh等[3]用70%甲醇提取蒲公英葉，發(fā)現(xiàn)三氯甲烷和醋酸乙酯部分抗炎作用最強(qiáng)，并證實(shí)蒲公英葉提取物能降低LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中iNOS和COX-2的表達(dá)。本試驗(yàn)先對(duì)蒲公英不同提取成分進(jìn)行抗炎活性篩選，再通過(guò)急慢性炎癥模型探討蒲公英黃酮抗炎效果，為蒲公英抗炎成分的藥理研究和進(jìn)一步研究蒲公英抗炎機(jī)制提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明系小鼠(許可證號(hào)：SCXK2013-1-003)，體重(24±4)g；SD大鼠(許可證號(hào)：SCXK2013-1-003)，體重(220±25)g；購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 藥品 蒲公英，購(gòu)自河北省安國(guó)藥材市場(chǎng)，蒲公英多糖、蒲公英酚酸、蒲公英黃酮和蒲公英甾醇由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室提取制備。

1.3 蒲公英抗炎成分篩選 小鼠30只，隨機(jī)平分為6組。A組為空白對(duì)照組，給予0.2 mL/20g生理鹽水，B、C、D、E組為試驗(yàn)組，分別給予0.2 mL/20g蒲公英多糖、蒲公英黃酮、蒲公英酚酸和蒲公英甾醇，連續(xù)給藥5 d。F組為陽(yáng)性藥物對(duì)照組，1次性給予0.2 mL/20g氫化可的松注射液。末次給藥1 h，小鼠右耳廓涂二甲苯致炎。1 h后將小鼠處死，剪下雙耳用直徑9 mm的打孔器在同一部位打下耳片，稱重并記錄。

1.4 抗炎效果研究 (1)二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)：小鼠50只，隨機(jī)分為5組。A組為空白對(duì)照組，給予0.2 mL/20g生理鹽水，B、C、D組為試驗(yàn)組，分別給予蒲公英黃酮溶液 0.1，0.2 mL/20g和0.4 mL/20g，連續(xù)給藥5 d。E組為陽(yáng)性藥物對(duì)照組，一次性給予0.2 mL/20g氫化可的松注射液。試驗(yàn)方法及處理同1.2.1；(2)蛋清致大鼠足跖腫脹試驗(yàn)：取大鼠25只，隨機(jī)分為5組。分組及給藥同上試驗(yàn)1.2.3(1)。末次給藥1 h，于大鼠左后趾中部皮下注射10%新鮮蛋清0.1 ml，分別在注入后0.5、1、2、4、6 h后測(cè)足趾容積，記錄各時(shí)刻數(shù)據(jù)；(3)大鼠棉球肉芽腫試驗(yàn)：取大鼠25只，用1%戊巴比妥麻醉，下腹部去毛消毒，將50 mg的無(wú)菌棉球植入左側(cè)腹股溝皮下，縫合傷口。術(shù)后隨機(jī)分為5組，每組5只，1 h后開(kāi)始給藥，分組及給藥同1.2.3(1)，連續(xù)給藥5 d。第6天取出棉球肉芽腫組織，于烘干箱中60 ℃烘干，稱重并記錄。

2 結(jié)果

2.1 蒲公英抗炎有效成分篩選 通過(guò)建立二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型篩選蒲公英的有效抗炎成分(表1)。由表1可知，與空白對(duì)照組小鼠相比，蒲公英多糖組和蒲公英酚酸組耳腫脹度無(wú)顯著差異(P>0.05)，而蒲公英黃酮組、蒲公英甾醇組與空白對(duì)照組相比小鼠耳廓腫脹度極顯著(P<0.01)降低；蒲公英黃酮組與氫化可的松組相比耳廓腫脹度無(wú)顯著差異，蒲公英甾醇組耳廓腫脹度顯著高于氫化可的松組(P<0.01或P<0.05)。這說(shuō)明蒲公英黃酮和蒲公英甾醇顯著抗炎作用且蒲公英黃酮效果比蒲公英甾醇好，所以蒲公英黃酮為蒲公英的主要抗炎成分。

表1 蒲公英有效抗炎成分篩選(x±s)

注：大寫(xiě)字母為差異極顯著，小寫(xiě)字母為差異顯著，下表同

2.2 蒲公英黃酮對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 通過(guò)建立二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型研究蒲公英黃酮的抗炎效果(表2)。由表2可知，與空白對(duì)照組小鼠相比，低劑量組無(wú)顯著差異；而高劑量組、中劑量組與空白對(duì)照組相比耳廓腫脹度極顯著降低。高劑量組與氫化可的松組相比無(wú)顯著差異；中劑量組耳廓腫脹度極顯著低于空白對(duì)照組，顯著高于高劑量組。由此可知蒲公英黃酮能夠抑制小鼠耳腫脹，且抑制作用呈劑量依賴性。

表2 蒲公英黃酮對(duì)二甲苯誘發(fā)小鼠耳部水腫的影響

2.3 蒲公英黃酮對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹的影響 通過(guò)建立蛋清致大鼠足跖腫脹模型研究蒲公英黃酮的抗炎效果(表3)。注射蛋清水溶液后，致炎效果顯著，0.5h后足趾腫脹率即可達(dá)到92.76%，0.5～6 h 內(nèi)都為腫脹高峰期，足趾腫脹率在80%以上，說(shuō)明造模成功。蒲公英黃酮高劑量組從造模后0.5 h～6 h，與同期模型組相比，可極顯著抑制蛋清引起的足趾腫脹，其作用效果與氫化可的松組的抗炎效果接近。中、低劑量組對(duì)于炎癥的抑制效果也極顯著。說(shuō)明蒲公英黃酮對(duì)大鼠足跖腫脹模型有顯著的抗炎作用。詳見(jiàn)表3。

表3 蒲公英黃酮對(duì)蛋清誘導(dǎo)的大鼠腳趾腫脹的影響

2.4 蒲公英黃酮對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生的影響 通過(guò)建立大鼠棉球肉芽腫模型研究蒲公英黃酮的抗炎效果(表4)。由表4可知，與空白對(duì)照組肉芽腫相比，中劑量組和低劑量組肉芽腫增生無(wú)顯著差異；而高劑量組肉芽腫極顯著低于空白對(duì)照組。由此可知高劑量的蒲公英黃酮具有抗炎效果。

表4 蒲公英黃酮對(duì)棉球肉芽腫增生的影響(x±s)

3 討論

蒲公英價(jià)格低廉，資源豐富，在我國(guó)分布廣泛。近年關(guān)于蒲公英抗炎作用的研究有很多，以蒲公英提取物為最多，但多數(shù)并沒(méi)有明確的鑒定蒲公英提取物中何種成分有抗炎作用。王利[4]對(duì)蒲公英進(jìn)行了蛋清性、瓊脂性所致大鼠足趾腫脹觀察，發(fā)現(xiàn)蒲公英能夠抑制大鼠蛋清性足趾腫脹；平家奇[5]等通過(guò)建立急慢性炎癥模型，研究證明蒲公英提取物具有明顯的體內(nèi)抗炎作用；劉婧陶[6]等通過(guò)研究表明，蒲公英甾醇具有明顯的體內(nèi)抗炎作用；蒲公英水提物在體內(nèi)通過(guò)抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路，對(duì)于LPS誘導(dǎo)的小鼠肺炎顯示出抗炎作用[7]。蒲公英中含有大量的黃酮類成分，是抗氧化抗炎作用的活性成分[8]。近年有很多關(guān)于黃酮抗炎的研究，如趙頔[9]研究表明，杜香黃酮能夠抑制醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)，二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致大鼠足趾腫脹，說(shuō)明杜香黃酮對(duì)炎癥的抑制作用；吳金梅[10]研究發(fā)現(xiàn)，甘草總黃酮對(duì)奶牛乳房炎有明顯的治療效果。本試驗(yàn)對(duì)4種蒲公英提取物進(jìn)行抗炎效果對(duì)比，篩選出蒲公英有效抗炎成分為蒲公英黃酮，而后建立急慢性炎癥模型研究蒲公英黃酮的體內(nèi)抗炎效果，試驗(yàn)結(jié)果表明，蒲公英黃酮具有明顯的體內(nèi)抗炎作用。蒲公英黃酮資源廣，提取方便，抗炎抗氧化作用顯著具有良好應(yīng)用前景，但對(duì)于蒲公英黃酮的抗炎作用還需進(jìn)一步的研究。

[1] Gonzalez-Castejon M, Visioli F, Rodringues-Casado A. Diverse biological activities of dandelion[J]. Nutr Rev, 2012,70(9):534-547.

[2] Schütz K, Carle R, Schieber A. Taraxacum-A review on its phytochemical and pharmacological profile[J]. J Ethnopharmacol，2006,107:313-323.

[3] Koh YJ, Cha DS, Ko JS,etal. Antiinflammatory Effect of Taraxacum officinale Leaves on Lipopolysaccharide-Induced Inflammatory Responses in RAW264.7 Cell[J]. J Med Food, 2010,13(4):870-878.

[4] 王利.單味蒲公英抗炎作用實(shí)驗(yàn)研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2007(4):27-28.

[5] 平家奇,劉利本,鄒娟,等.蒲公英提取物體內(nèi)抗炎作用研究[J].延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào),2010,32(1):52-54.

[6] 劉婧陶,韓普,劉利本,等.蒲公英甾醇粗提取物抗炎作用研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,33(12):104-106.

[7] Ma C, Zhu L, Wang J,etal. Anti-inflammatory effects of water extract of Taraxacum mongolicum hand.-Mazz on lipopolysaccharide-induced inflammation in acute lung injury by suppressing PI3K/Akt/mTOR signaling pathway[J]. J Ethnopharmacol， 2015;168:349-355.

[8] 蔣喜巧,苗明三. 蒲公英現(xiàn)代研究特點(diǎn)及分析[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2015,30(206):1024-1026.

[9] 趙頔. 杜香黃酮提取物抗炎作用研究[D].上海：華東師范大學(xué),2012.

[10] 吳金梅.甘草總黃酮抗金黃色葡萄球菌作用及其治療奶牛乳房炎的應(yīng)用研究[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué),2012.

Anti-inflammatory effect of Dandelion different extracts

HOU Jing-ling , ZHOU Xiao-nan , FENG Sha-sha , ZHAO Xing-hua

(Agricultural University of Hebei , College of Veterinary Medicine, Baoding 071001,China)

To investigate the anti-inflammatory effect of dandelion main efficacy components, the model of mouse xylene-induced auricle swell was established to screen dandelion anti-inflammatory ingredients of dandelion. Then the models of mouse xylene-induced auricle swelling, cotton-pellet granuloma of the mice and egg white-induced rat paw oedema were established to study the inhibition of dandelion anti-inflammatory ingredients on capillary expansion and permeability sthenia, oozy edema, white blood cell gathering, and fibrous tissue hyperplasia. Results show that the dandelion flavonoids was the main anti-inflammatory ingredients of dandelion. Dandelion flavonoids had great inhibitory effect on xylene-induced auricle swelling, cotton-pellet granuloma of the rat and egg white-induced rat paw models. In conclusion, dandelion flavonoids has remarkable anti-inflammatory effects in the animal models of both acute and chronic inflammation, and high dose group of dandelion flavonoids has the best anti-inflammatory effect.

Dandeloin; Flavonoids ; Swelling ; Inflammation ; Anti-inflammatory Corresponding author:ZHAO Xing-hua

2016-04-07

河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究?jī)?yōu)秀青年基金項(xiàng)目(YQ2013019)；河北省科技計(jì)劃項(xiàng)目(13226624)

侯京玲(1986-)，女，碩士生，研究方向?yàn)橹兴幩幚韺W(xué)， E-mail: 15232973536@163.com

趙興華，E-mail: dyzhaoxh@hebau.edu.cn

S853.7

文章編號(hào)：0529-6005(2017)03-0064-03