脈康湯對(duì)內(nèi)源性老年高脂血癥模型大鼠血脂的影響

曾 丹 唐建明

(湖南省人民醫(yī)院 湖南省老年醫(yī)學(xué)研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410016)

脈康湯對(duì)內(nèi)源性老年高脂血癥模型大鼠血脂的影響

曾 丹 唐建明

(湖南省人民醫(yī)院 湖南省老年醫(yī)學(xué)研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410016)

目的 探討脈康湯對(duì)內(nèi)源性老年高脂血癥大鼠模型血脂的影響。方法 選用雄性Wistar大鼠40只，進(jìn)行隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、洛伐他汀組、脈康湯組，每組10只。采用給藥L-蛋氨酸造模。造模成功后，各實(shí)驗(yàn)組分別給予相應(yīng)藥物灌胃治療4 w，正常對(duì)照組給予蒸餾水。治療結(jié)束取血檢測(cè)大鼠的血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。結(jié)果 病理組織切片表明脈康湯組脂肪變性改善，脂肪滴減少，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。模型組大鼠血清TC、TG、LDL-C、載脂蛋白(Apo)B以及Lp(a)的水平顯著高于脈康湯組、正常對(duì)照組、洛伐他汀組，而HDL-C、ApoAⅠ水平顯著低于其他三組。與洛伐他汀組相比，脈康湯組大鼠血清TC、TG、ApoB、Lp(a)水平顯著降低(P<0.05)，LDL-C、HDL-C、ApoAⅠ差異較小(P>0.05)。脈康湯組極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)含量降低幅度明顯大于洛伐他汀組(P<0.05)。脈康湯組TC/HDL-C比值比洛伐他汀組的比值降低幅度較大(P<0.05)。脈康湯組大鼠肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)水平的上升幅度顯著高于模型組(P<0.05)。結(jié)論 脈康湯對(duì)內(nèi)源性高脂血癥具有明顯的調(diào)節(jié)作用。

脈康湯；內(nèi)源性高脂血癥

高脂血癥(HL)是由于機(jī)體血脂代謝失衡，血膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)的攝入與排出不均衡，導(dǎo)致兩者在體內(nèi)積累，進(jìn)入遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于排除，從而使血脂代謝雜亂〔1〕。血脂是血液中脂質(zhì)成分的總稱，脂質(zhì)的攝入分為外源性和內(nèi)源性兩種，所謂內(nèi)源性，是指通過(guò)機(jī)體自身合成、內(nèi)部進(jìn)行能量轉(zhuǎn)換形成的脂質(zhì)，脂質(zhì)在體內(nèi)分布不均、代謝紊亂，導(dǎo)致血脂代謝異常。HL是引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的重要因素〔2〕，尤其60歲以上的老年人是易患HL的高危人群〔3〕。脈康湯是治療HL的經(jīng)驗(yàn)良方，具有健脾、舒肝、化痰、祛瘀等功效〔4〕。前期臨床研究發(fā)現(xiàn)，該藥方對(duì)老年HL患者降脂效果顯著，且作用溫和、療效較持久。

1 材料與方法

1.1 材料 Wistar大鼠雄性40只，8周齡，體重(185±20)g，來(lái)自湖南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。脈康湯組方：丹參15 g、川穹10 g、菊花10 g、白芍10 g、鉤藤10 g、黃芪20 g、葛根10 g、茯苓10 g、山楂15 g，水煎后濃縮成1∶2煎液。TC試劑盒，批號(hào)：20100220；TG試劑盒，批號(hào)：20100315；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒，批號(hào)：20100130；低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒，批號(hào)：20091230，以上試劑盒均來(lái)自中生北控生物科技股份有限公司。載脂蛋白(Apo)AⅠ試劑盒，批號(hào)：20100322；ApoB 試劑盒，批號(hào)：20100228；Lp(a)試劑盒，批號(hào)：20100315，均來(lái)自武漢華美生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型的建立 雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、洛伐他汀組、脈康湯組，每組10只。模型組采用王祿增等〔5〕方法：使用L-蛋氨酸給Wistar雄性大鼠灌胃8 w，每日予L-蛋氨酸450 mg/只，形成內(nèi)源性HL動(dòng)物模型。正常對(duì)照組大鼠每只每天喂養(yǎng)20 g普通飼料，其他三組大鼠每只每天喂養(yǎng)20 g高脂飼料。

1.2.2 給藥方法 脈康湯組使用脈康湯煎液治療，每天每只1.1 ml/100 g脈康湯煎液進(jìn)行灌胃；洛伐他汀組每天用洛伐他汀1.1 ml/100 g灌胃；正常對(duì)照組、模型組每天用蒸餾水1.1 ml/100 g灌胃，灌胃頻率為1次/d，連續(xù)4 w。

1.2.3 病理切片 取肝組織標(biāo)本進(jìn)行取材，石蠟包埋切片，常規(guī)HE染色。光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟組織形態(tài)，肝小葉結(jié)構(gòu)、脂肪變程度、肝細(xì)胞變性、炎細(xì)胞浸潤(rùn)等情況。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死動(dòng)物，進(jìn)行TC、TG、LDL-C、HDL-C檢測(cè)：血樣在3 000 r/min離心機(jī)上離心5 min，取上層血清，使用日立7150全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定 TG、TC、LDL-C、HDL-C、極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)含量。ApoAⅠ、ApoB及Lp(a)測(cè)定：血樣在3 000 r/min離心機(jī)上離心5 min，取上層血清，應(yīng)用免疫濁度法按照說(shuō)明書(shū)方法配制血清，使用紫外線分光光度計(jì)在波長(zhǎng)為340 nm下測(cè)量ApoAⅠ、ApoB的吸光度，在波長(zhǎng)570 nm下測(cè)量Lp(a)的吸光度。超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)：精密稱取每只大鼠肝組織，以重量與冰生理鹽水1∶9的比例混合，制成10%的勻漿，3 000 r/min離心10 min 后取上清液，運(yùn)用酶標(biāo)儀按試劑盒說(shuō)明書(shū)采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定肝組織的SOD活力。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件行方差分析及q檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 實(shí)驗(yàn)8 w后各組大鼠 TC、TG、LDL-C水平比較 經(jīng)單因素方差分析，各指標(biāo)四組間差異顯著(P<0.05)。兩兩比較(HSD-q檢驗(yàn))模型組大鼠血清中TC、TG、LDL-C與正常對(duì)照組相比均明顯升高(P<0.05)；脈康湯組大鼠血清中TC、TG、LDL-C與模型組相比顯著降低(P<0.05)；脈康湯組大鼠血清中TC、TG與洛伐他汀組相比顯著降低(P<0.01)，LDL-C差異較小。各組肝組織病理學(xué)檢查顯示：正常對(duì)照組小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞內(nèi)無(wú)脂肪沉積；模型組小葉結(jié)構(gòu)消失，肝細(xì)胞變大，肝細(xì)胞內(nèi)大量脂質(zhì)，脂肪變性明顯；洛伐他汀組小葉結(jié)構(gòu)模糊，肝臟脂肪散在分布，脂肪減少，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少；脈康湯組脂肪變性改善，脂肪滴減少，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。見(jiàn)表1，圖1。

2.2 各組ApoAⅠ、ApoB及Lp(a)水平比較 經(jīng)方差分析，各指標(biāo)的四組間整體差異顯著(P<0.05)。兩兩比較：模型組與其他三組比較ApoAⅠ顯著降低(P<0.01)，ApoB、Lp(a)顯著升高(P<0.01)；脈康湯組與洛伐他汀組間ApoB、Lp(a)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。

組別TCTGLDL-C正常對(duì)照組0.54±0.140.44±0.154.18±1.05模型組10.47±3.211)1.59±0.411)9.17±2.441)脈康湯組6.93±2.781)2)0.85±0.191)2)5.98±1.671)2)洛伐他汀組7.95±3.081)2)3)1.04±0.371)2)3)6.53±1.381)2)F/P值26.027/0.00024.986/0.00014.441/0.000

與正常對(duì)照組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；與脈康湯組比較：3)P<0.01

圖1 肝組織切片病理圖片比較(×400)

組別ApoAⅠ(g/L)ApoB(g/L)Lp(a)(ng/L)正常對(duì)照組0.09±0.051)0.21±0.011)49.89±8.411)模型組0.05±0.021.04±0.15251.43±70.30脈康湯組0.07±0.041)0.66±0.211)69.49±12.281)洛伐他汀組0.07±0.031)2)0.49±0.121)2)3)88.67±20.081)2)F/P值2.921/0.04760.973/0.00061.358/0.000

與模型組比較：1)P<0.01；與脈康湯組比較：2)P<0.01

2.3 脈康湯對(duì)HL大鼠血清VLDL-C、HDL-C、TC/HDL-C的影響 整體分析四組間整體差異顯著(P<0.05)。兩兩比較：模型組的VLDL-C含量顯著高于正常對(duì)照組、脈康湯組以及洛伐他汀組(P<0.01)，脈康湯組大鼠VLDL-C含量降低幅度明顯大于洛伐他汀組(P<0.05)；模型組的HDL-C含量顯著低于其他三組(P<0.05)，治療組均有提高HDL-C含量的作用，脈康湯組與洛伐他汀組比較HDL-C含量升高程度相近(P>0.05)；模型組的TC/HDL-C比值明顯高于其他組(P<0.01)，脈康湯組TC/HDL-C比值比洛伐他汀組的比值降低幅度更大(P<0.05)，其治療效果明顯優(yōu)于洛伐他汀組。見(jiàn)表3。

2.4 脈康湯對(duì)肝組織SOD水平的影響 模型組大鼠肝組織中SOD水平顯著低于正常對(duì)照組、脈康湯組和洛伐他汀組(P<0.05)，脈康湯組與洛伐他汀組比較SOD水平無(wú)顯著差異(P>0.05)。見(jiàn)圖2。

組別VLDL-C(mmol/L)HDL-C(mmol/L)TC/HDL-C正常對(duì)照組1.13±0.191)0.87±0.182)0.74±0.211)模型組8.59±2.400.52±0.0419.86±5.11脈康湯組3.01±1.361)0.72±0.092)9.52±2.381)洛伐他汀組5.76±2.351)3)0.74±0.122)11.58±2.891)3)F/P值32.258/0.00014.552/0.00061.440/0.000

與模型組比較：1)P<0.01，2)P<0.05；與脈復(fù)湯組比較：3)P<0.05

與模型組比較：1)P<0.05圖2 脈康湯對(duì)肝組織SOD水平的影響

3 討 論

目前治療老年HL的主要藥物是他汀類(lèi)〔6〕，該類(lèi)藥物雖然能夠有效地防治心血管疾病，但是長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致毒副作用的蓄積，尤其是對(duì)于老年特殊人群來(lái)說(shuō)具有較大毒副作用，例如肝毒性、肌毒性等〔7〕。

脈康湯方中黃芪、茯苓、山楂健脾化痰；白芍、菊花、鉤藤舒肝平肝；丹參、川芎活血化瘀；葛根升脾胃清陽(yáng)，運(yùn)化水濕；適用于HL之脾虛肝郁、痰濕挾瘀之證?，F(xiàn)代藥理研究表明，脈康湯具有綜合調(diào)控血脂的作用〔8〕。葛根可以降血糖，具有延緩衰老、調(diào)節(jié)血脂血糖、促進(jìn)造血功能等方面的作用，并應(yīng)用于臨床〔9〕。黃芪可以調(diào)節(jié)血脂代謝，促進(jìn)血脂平衡，并且黃芪還可以提高機(jī)體抗氧化的能力〔10〕，可以升高HL大鼠血清中HDL-C水平以及降低血清中TC、TG、LDL-C 、VLDL-C的水平?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)，茯苓對(duì)大鼠、小鼠有利尿、保肝、降血脂作用，其化學(xué)成分中主要起作用的是茯苓多糖類(lèi)和茯苓三萜類(lèi)〔11〕。丹參具有強(qiáng)心、擴(kuò)血管、抗血栓形成提高纖溶酶活性，改善體內(nèi)TC分布等作用。復(fù)方丹參滴丸除具有降低血小板活性和聚集性外，能抑制內(nèi)源性膽固醇的合成，減低血液中TG和TC的含量，同時(shí)抑制炎癥反應(yīng)，保護(hù)血管內(nèi)皮功能〔12〕。丹參素還能抑制細(xì)胞內(nèi)源性膽固醇的合成。因此，脈康湯對(duì)于治療內(nèi)源性老年HL具有一定的療效。

ApoAⅠ主要存在于人體的高密度脂蛋白中，調(diào)節(jié)HDL代謝，ApoAⅠ水平降低表示人體內(nèi)的HDL含量降低，導(dǎo)致人體內(nèi)血脂代謝失衡。ApoB主要存在于LDL中，ApoB升高表示人體內(nèi)LDL的形成量過(guò)多，從而機(jī)體從肝臟輸出的膽固醇過(guò)多，導(dǎo)致HL的發(fā)生。Lp(a)與機(jī)體動(dòng)脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度有一定的關(guān)系。SOD具有清除體內(nèi)氧自由基的作用，可以防止細(xì)胞生物膜產(chǎn)生大量的脂質(zhì)過(guò)氧化物。肝臟是脂類(lèi)代謝的主要器官，脂類(lèi)物質(zhì)在肝內(nèi)蓄積過(guò)多容易發(fā)生脂肪肝。

本實(shí)驗(yàn)中病理組織學(xué)檢查可以客觀反映出肝臟組織的病變情況，脈康湯能明顯改善脂肪肝大鼠的肝臟病理情況，降低肝細(xì)胞內(nèi)的脂肪含量，減輕肝臟的脂肪變性；同時(shí)，脈康湯可以降低血清中TC、TG、LDL-C、ApoB、Lp(a)、VLDL-C水平，升高血清中HDL-C、ApoAⅠ以及SOD的水平，有效調(diào)節(jié)HL模型大鼠血脂代謝，并且脈康湯調(diào)節(jié)血脂、抗氧化作用相對(duì)穩(wěn)定，不良反應(yīng)較少，經(jīng)濟(jì)方便，值得臨床推廣。

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〔2016-02-17修回〕

(編輯 袁左鳴)

湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目重點(diǎn)課題(201422)

唐建明(1962-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事中醫(yī)藥研究。

曾 丹(1983-)，女，碩士，助理研究員，主要從事人體生理學(xué)研究。

R28

A

1005-9202(2017)07-1583-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.07.008