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    山東省雞源沙門(mén)氏菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

    2017-04-19 07:09:33王曉藝李濤呂新新張敏
    家禽科學(xué) 2017年4期
    關(guān)鍵詞:雞源常安脫羧酶

    王曉藝,李濤,呂新新,張敏

    (1.煙臺(tái)市牟平區(qū)姜格莊街道畜牧獸醫(yī)工作站,山東 煙臺(tái) 264114;2.青島潤(rùn)達(dá)生物科技有限公司,山東 青島 266200)

    山東省雞源沙門(mén)氏菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

    王曉藝1,李濤2,呂新新2,張敏2

    (1.煙臺(tái)市牟平區(qū)姜格莊街道畜牧獸醫(yī)工作站,山東 煙臺(tái) 264114;2.青島潤(rùn)達(dá)生物科技有限公司,山東 青島 266200)

    為了解山東地區(qū)雞沙門(mén)氏菌的流行及耐藥情況,本文對(duì)山東部分市縣的病死雞只進(jìn)行沙門(mén)氏菌的分離培養(yǎng)鑒定,最終得到12株致病性沙門(mén)氏菌菌種,并對(duì)分離菌株進(jìn)行耐藥性試驗(yàn),結(jié)果鑒定12株沙門(mén)氏菌對(duì)沙門(mén)氏菌對(duì)替米考星、阿莫西林和林可霉素等均產(chǎn)生了一定的耐藥性,對(duì)潤(rùn)達(dá)炎迪克、硫酸粘菌素、呼治常安和強(qiáng)力霉素有一定的敏感性。

    沙門(mén)氏菌;分離;藥敏試驗(yàn)

    沙門(mén)氏菌是腸桿菌科革蘭氏陰性桿菌,廣泛存在于環(huán)境或寄居于人和動(dòng)物腸道內(nèi),絕大多數(shù)對(duì)人和動(dòng)物具有致病性。雞源沙門(mén)氏菌是雞場(chǎng)的重要病原菌,可引發(fā)雞白痢、雞傷寒和禽副傷寒[1],其典型癥狀為脾臟或肝臟表面密布黃白色壞死灶,心臟出現(xiàn)心肌炎癥狀,部分腸道或肺臟長(zhǎng)有白色肉芽。雞源沙門(mén)氏菌在雞群中能垂直感染,被感染成雞生長(zhǎng)性能或產(chǎn)蛋下降,雛雞大批死亡,死亡率高達(dá)80%,已成為危害養(yǎng)禽業(yè)的首要傳染病之一[2]。感染沙門(mén)氏菌或食用被帶菌者糞便污染的食品,可使人發(fā)生食物中毒,人畜感染后它可能加重病態(tài)或死亡率,或者降低動(dòng)物的繁殖生產(chǎn)力。沙門(mén)氏菌不但會(huì)對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,而且會(huì)嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康,沙門(mén)氏菌病已成為一種常見(jiàn)多發(fā)的人畜共患病[3]。

    對(duì)山東部分養(yǎng)雞場(chǎng)的雞源沙門(mén)氏菌病的流行情況進(jìn)行調(diào)查,發(fā)現(xiàn)沙門(mén)氏菌廣泛存在于雞場(chǎng)中,由于沙門(mén)氏菌可以通過(guò)生殖道污染禽蛋,造成種蛋的孵化率降低和污染以及雞只的大規(guī)模發(fā)病和死亡,引起嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,極大困擾著養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展[4]。此外,濫用抗菌藥物造成耐藥菌株不斷產(chǎn)生,致使該病的治療越來(lái)越困難,給養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。在這種背景下,快速、準(zhǔn)確地檢出病原體和體外藥敏分析結(jié)果就成為必要。本文從病死雞中分離培養(yǎng)沙門(mén)氏菌,用紙片法對(duì)分離菌株進(jìn)行藥物的敏感性研究,分析雞源沙門(mén)氏菌對(duì)各類(lèi)藥物的敏感性情況,為當(dāng)前流行的雞源沙門(mén)氏菌的合理用藥提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,SS瓊脂培養(yǎng)基,肉湯培養(yǎng)基,三糖鐵培養(yǎng)基,蛋白胨水培養(yǎng)基,賴(lài)氨酸鐵瓊脂培養(yǎng)基。

    1.1.2 菌株 試驗(yàn)菌株來(lái)自山東部分市縣養(yǎng)雞場(chǎng)的病死雞只,分離自病雞內(nèi)臟,共12株。

    1.1.3 藥敏紙片 硫酸安普霉素(Apramycin Sulfate),硫酸新霉素(Neomycin Sulphate),氟苯尼考 (Florfenicol), 強(qiáng)力霉素 (Doxy), 替米考星(Tilmicosin),阿米卡星 (Amikacin),林可霉素(Lincomycin),阿莫西林(Amoxicillin),硫酸黏菌素(Colistin Sulfate),磷霉素鈉(Fosfomvcin Sodium),頭孢噻肟鈉(Claforan)(注:以上藥敏片均購(gòu)自杭州濱和生物試劑有限公司),呼治常安,潤(rùn)達(dá)炎迪克(注:以上二種藥敏片為實(shí)驗(yàn)室自制)。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 雞源沙門(mén)氏菌的分離試驗(yàn) 將病料肝臟組織無(wú)菌條件下接種于普通瓊脂和SS瓊脂培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)18~24h。

    1.2.2 雞源沙門(mén)氏菌的鑒定試驗(yàn) 將分離到疑似沙門(mén)氏菌的菌株進(jìn)行編號(hào),按常規(guī)方法進(jìn)行三糖鐵試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)、靛基質(zhì)(吲哚)試驗(yàn)和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表1。

    表1 12株雞源沙門(mén)氏菌生化鑒定結(jié)果

    1.2.2.1 將被檢菌穿刺接種三糖鐵瓊脂,36±1℃培養(yǎng)18~24h后,觀察結(jié)果。

    1.2.2.2 將被檢菌接種到尿素酶肉湯中,于36±1℃培養(yǎng)18~24h,觀察結(jié)果。變紅色為陽(yáng)性,不變色或者變黃色為陰性。

    1.2.2.3 將被檢菌接種到蛋白胨水培養(yǎng)基中,36± 1℃培養(yǎng)18~24h后,沿試管壁滴加數(shù)滴吲哚試劑于培養(yǎng)物液面,觀察結(jié)果。

    1.2.2.4 將被檢菌接種到賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯和氨基酸脫羧酶對(duì)照生化管中,于36±1℃培養(yǎng)18~24h后,觀察結(jié)果。賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯和氨基酸脫羧酶對(duì)照均變黃為陰性,賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯變紫,氨基酸脫羧酶對(duì)照變黃為陽(yáng)性。

    1.2.3 雞源沙門(mén)氏菌的藥敏試驗(yàn) 采用世界衛(wèi)生組織 (WHO)推薦的Kirby-Bauer紙片法進(jìn)行耐藥沙門(mén)氏菌對(duì)抗菌藥物的敏感性測(cè)定。用滅菌棒將LB培養(yǎng)物涂抹于LB瓊脂平板,將藥敏紙片貼壓于該平板上,然后37℃培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn):抑菌圈直徑>15mm為高度敏感;10mm<抑菌圈直徑<15mm為中度敏感;抑菌圈直徑<10mm為低度敏感;無(wú)抑菌圈為不敏感。結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 雞源沙門(mén)氏菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

    2 結(jié)果

    2.1 雞源沙門(mén)氏菌的分離鑒定結(jié)果

    2.1.1 培養(yǎng)特性 將病料接種普通瓊脂和SS瓊脂培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)18~24h,在普通瓊脂平板,形成均一、無(wú)色、半透明、表面光滑、隆起、邊緣整齊的針尖大小的菌落,在SS瓊脂培養(yǎng)基上呈灰色、圓形、中心帶黑色的可疑菌落,染色鏡檢挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)菌的形態(tài)及染色特點(diǎn),呈現(xiàn)革蘭氏陰性、無(wú)芽孢的中等大小桿菌。

    以上結(jié)果符合沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)特性。

    2.1.2 生化鑒定結(jié)果 ①三糖鐵試驗(yàn):沙門(mén)氏菌反應(yīng)為:斜面產(chǎn)堿,底層產(chǎn)酸,產(chǎn) H2S;②尿素酶試驗(yàn):沙門(mén)氏菌反應(yīng)為陰性;③靛基質(zhì)(吲哚)試驗(yàn):沙門(mén)氏菌反應(yīng)為陰性;④賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn):沙門(mén)氏菌反應(yīng)為陽(yáng)性。

    結(jié)合以上結(jié)果,確定12株菌種均為沙門(mén)氏菌。

    2.2 沙門(mén)氏菌的藥物敏感性試驗(yàn) 采用世界衛(wèi)生組織 (WHO)推薦的Kirby-Bauer紙片法進(jìn)行敏感性測(cè)定。測(cè)試沙門(mén)氏菌對(duì)硫酸安普霉素、硫酸新霉素、氟苯尼考、強(qiáng)力霉素、替米考星、阿米卡星、林可霉素、阿莫西林、硫酸黏菌素、磷霉素鈉、頭孢噻肟鈉、呼治常安、潤(rùn)達(dá)炎迪克的敏感性。

    根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果分析可知:分離得到的12株沙門(mén)氏菌對(duì)替米考星、阿莫西林和林可霉素的敏感率為0,說(shuō)明沙門(mén)氏菌對(duì)這三種藥的耐藥性高,呈現(xiàn)多重耐藥;沙門(mén)氏菌分離株對(duì)潤(rùn)達(dá)炎迪克、硫酸黏菌素、呼治常安和強(qiáng)力霉素的敏感率高達(dá)80%以上,以上這幾種藥可作為臨床用藥。

    3 討論

    3.1 根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,沙門(mén)氏菌對(duì)替米考星、阿莫西林和林可霉素的耐藥性高,對(duì)潤(rùn)達(dá)炎迪克、硫酸黏菌素、呼治常安和強(qiáng)力霉素的敏感率高。在科學(xué)用藥的前提下,今后相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi),防治雞源沙門(mén)氏菌病可首選阿米卡星、頭孢噻肟、強(qiáng)力霉素、硫酸黏菌素、潤(rùn)達(dá)炎迪克、呼治常安等,應(yīng)通過(guò)藥敏試驗(yàn)來(lái)選擇使用。

    3.2 臨床上用藥時(shí)要注意交替用藥,以免沙門(mén)氏菌形成抗藥性,合理科學(xué)地使用抗生素,減少不必要的抗生素濫用。為了避免因抗藥性影響治療,在進(jìn)行藥物治療之前,需對(duì)分離的細(xì)菌做藥敏試驗(yàn),從中選出最有效的藥物進(jìn)行治療與預(yù)防。

    3.3 在使用藥物治療的同時(shí),對(duì)雞舍應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格消毒,保證雞舍衛(wèi)生,加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,溫度、濕度、通風(fēng)、光照應(yīng)嚴(yán)格控制。在禽蛋、雛雞的選擇上應(yīng)擇優(yōu)選擇。

    [1]張步嫻,李鳳梅,胡杰,等.雞源沙門(mén)氏菌的分離鑒定及耐藥性檢測(cè)[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù),2014(08):176-178.

    [2]周廷宣.后備種雞血清中沙門(mén)氏菌病抗體的檢測(cè)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2007(09):87-88.

    [3]王貴升,田夫林,陳靜,等.山東省小規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)沙門(mén)氏菌流行病學(xué)調(diào)查分析[J].家禽科學(xué),2007(05):11-13.

    [4]趙貴,張華.畜產(chǎn)品中沙門(mén)氏菌的危害及檢測(cè)方法概述[J].貴州畜牧獸醫(yī),2004(03):21-22.

    S858.314.4+3

    B

    1673-1085(2017)04-0051-03

    2017-03-14

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