三種豬偽狂犬病毒gE 抗體診斷試劑盒的檢測(cè)結(jié)果比較

陸 江，葉志樹，米樹運(yùn)，孫如水，梁恒英

（廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場(chǎng)，廣西 橫縣 530317）

三種豬偽狂犬病毒gE 抗體診斷試劑盒的檢測(cè)結(jié)果比較

陸 江，葉志樹，米樹運(yùn)，孫如水，梁恒英

（廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場(chǎng)，廣西 橫縣 530317）

本試驗(yàn)選取60份豬血清，分別采用三種商用豬偽狂犬病毒gE抗體診斷試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，然后對(duì)三種檢測(cè)結(jié)果的符合程度進(jìn)行了分析，比較三種試劑盒之間的一致性。

豬偽狂犬病毒；gE抗體檢測(cè)；ELISA；試劑盒；比較試驗(yàn)

偽狂犬?。≒R）又名奧耶斯基氏病，是由偽狂犬病病毒（PRV）引起的包括多種家畜和野生動(dòng)物共患的一種急性傳染病。豬是該病的天然宿主和儲(chǔ)存者，在豬呈暴發(fā)性流行，常引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎，公豬不育，新生仔豬大量死亡，育肥豬呼吸困難、生長(zhǎng)停滯等，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一，我國(guó)也將其列為一類傳染病，是發(fā)生最多、危害最大、流行最廣的動(dòng)物傳染病之一。在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家，使用基因缺失疫苗和相應(yīng)的血清學(xué)鑒別診斷方法，該病已得到控制或根除。PRV-gE抗體監(jiān)測(cè)方法較多，其中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）為國(guó)際貿(mào)易中PRV-gE抗體檢測(cè)指定方法之一，且ELISA以其敏感、特異、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)已被廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。

目前市面上用于PRV-gE抗體檢測(cè)的試劑盒較多，I廠家診斷試劑盒有較好的口碑，主要是因?yàn)镮廠家豬偽狂犬病毒gE抗體檢測(cè)試劑盒是唯一經(jīng)過我國(guó)農(nóng)業(yè)部注冊(cè)的PRV進(jìn)口診斷產(chǎn)品，同時(shí)其操作方法也列入了農(nóng)業(yè)部的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，性能經(jīng)過了嚴(yán)格的檢驗(yàn)；同時(shí)在國(guó)內(nèi)和國(guó)際上都被高度認(rèn)可，也是使用最早和最廣泛的診斷試劑盒，發(fā)表SCI的文獻(xiàn)，唯獨(dú)認(rèn)可的就是I診斷試劑盒的檢測(cè)結(jié)果。本試驗(yàn)以I廠家的檢測(cè)數(shù)據(jù)為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其他兩個(gè)不同廠家的商用PRV-gE抗體診斷試劑盒進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果的比較分析，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 試驗(yàn)材料

1.1 樣品 從公司和外來客戶送檢的各階段豬只血清中，選取了臨床背景情況清楚的60份血清作為檢測(cè)樣品。

1.2 試劑

1.2.1 I廠家生產(chǎn)的豬偽狂犬病毒PRV-gE抗體診斷試劑盒（簡(jiǎn)稱I盒，阻斷ELISA），批號(hào)：99-09836-ML584。

1.2.2 B廠家生產(chǎn)的豬偽狂犬病毒PRV-gE抗體診斷試劑盒（簡(jiǎn)稱B盒，間接ELISA），批號(hào)：10-7161-10-A429704。

1.2.3 H廠家生產(chǎn)的豬偽狂犬病毒PRV-gE抗體診斷試劑盒（簡(jiǎn)稱H盒，間接ELISA），批號(hào)：CAE.97X JUL-2017。

1.3 檢測(cè)儀器 不同規(guī)格的微量移液器（Socorex、Eppendorf等）、美國(guó)Biotek ELX 800酶標(biāo)儀、微量振蕩器（IKA）、高速離心機(jī)等。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) I盒做一組檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，B盒和H盒在同一塊反應(yīng)板上做3組重復(fù)檢測(cè)。

2.2 結(jié)果測(cè)定 檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)步驟與結(jié)果判定均嚴(yán)格按照各試劑盒的說明書進(jìn)行，且所用試劑盒均在有效期內(nèi)檢測(cè)并實(shí)驗(yàn)成立，檢測(cè)結(jié)果按試劑盒要求判定。

2.3 檢測(cè)數(shù)據(jù)處理分析 以I盒的檢測(cè)數(shù)據(jù)為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算其他2種試劑盒相對(duì)I盒的特異性、敏感性和結(jié)果符合率，以選出相對(duì)穩(wěn)定且符合率高的試劑盒，用于指導(dǎo)臨床實(shí)踐。

2.4 結(jié)果判定 I診斷試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)：S/N值≤0.6為陽性，＞0.7為陰性，0.6～0.7為可疑。

B診斷試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)：阻斷值≤50為陽性，＞60為陰性，51～60為可疑。

H診斷試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)：阻斷值＞45為陽性，＜40為陰性，40～45為可疑。

3 結(jié)果與分析

3.1 檢測(cè)結(jié)果匯總 用3種試劑盒分別檢測(cè)60份血清樣品，以I盒的檢測(cè)數(shù)據(jù)為標(biāo)準(zhǔn)，其他兩種試劑盒的重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果見表1。

表1 I、B與H試劑盒的檢測(cè)結(jié)果匯總 份

3.2 B盒和H盒對(duì)I盒的符合率

3.2.1 B盒對(duì)I盒檢測(cè)結(jié)果的符合率 B盒的3次重復(fù)分別檢測(cè)到32、31、31個(gè)陽性樣品和28、29、29個(gè)陰性樣品。其中3次重復(fù)檢測(cè)中，分別各有10份樣品用兩種方法檢測(cè)均為陽性，有28、29、29份樣品用兩種方法檢測(cè)均為陰性。計(jì)算得出：B盒3次重復(fù)的敏感性都為100%（10/10），3次重復(fù)的特異性分別為56.0%（28/50）、58.0%（29/50）、58.0%（29/50）；B盒3次重復(fù)對(duì)I盒檢測(cè)結(jié)果的符合率分別為 63.3% [（10+28）/60]、65.0%[（10+29）/60]、65.0%[（10+29）/60]。詳見表2。

表2 B盒相對(duì)I盒的比較試驗(yàn) 份

3.2.2 H盒對(duì)I盒檢測(cè)結(jié)果的符合率 H盒的3次重復(fù)分別都檢測(cè)到10個(gè)陽性樣品和50個(gè)陰性樣品。其中3次重復(fù)分別都有10份樣品用兩種方法檢測(cè)均為陽性，有50份樣品用兩種方法檢測(cè)均為陰性。計(jì)算得出：H盒3次重復(fù)的敏感性都為100%（10/10），3次重復(fù)的特異性都為100%（50/50），H盒3次重復(fù)對(duì)I盒檢測(cè)結(jié)果的符合率都為100%[（10+50）/60]。詳見表3。

表3 H盒相對(duì)I盒的比較試驗(yàn)

表4 B盒和H盒對(duì)I盒符合率的比較

3.2.3 B盒和H盒對(duì)I盒符合率的比較總結(jié) 結(jié)果見表4。

4 結(jié)論與討論

從試驗(yàn)結(jié)果看，H試劑盒的特異性、敏感性和符合率與I試劑盒都達(dá)到100%的一致性，B試劑盒對(duì)I試劑盒的敏感性能達(dá)到100%的一致性，但特異性、符合率有顯著的差別，檢測(cè)樣品容易出現(xiàn)假陽性。

對(duì)B盒和H盒兩種試劑盒重復(fù)穩(wěn)定性的比較：H盒3次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果的可重復(fù)性和穩(wěn)定性比較一致，而B盒3次檢測(cè)的結(jié)果有一定的差異，試劑盒重復(fù)性和穩(wěn)定性較差。用相同的方法，同一試驗(yàn)材料，在相同的條件下獲得的結(jié)果不一致，容易對(duì)同一份樣品的結(jié)果造成誤判。

綜上所述，H試劑盒對(duì)I試劑盒的檢測(cè)結(jié)果有很高的符合率和重復(fù)性、穩(wěn)定性，這兩種試劑盒可根據(jù)情況加以靈活應(yīng)用，不僅能夠保證疫病監(jiān)測(cè)工作的完成，而且能夠?yàn)閭慰袢岸緳z測(cè)提供可靠的依據(jù)，還可以解決試劑盒供應(yīng)緊張時(shí)的替代等問題。然而，筆者認(rèn)為，一個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行疫病監(jiān)測(cè)時(shí)，為了掌握疫病的流行趨勢(shì)，最好不要經(jīng)常變換檢測(cè)試劑盒，相對(duì)穩(wěn)定的檢測(cè)方法有利于豬場(chǎng)建立檔案資料，為指導(dǎo)生產(chǎn)提供理論依據(jù)，所以我們要合理地選擇試劑盒，以便更好地為生產(chǎn)服務(wù)?！?/p>

[1] 陳偉杰，周彩琴，黃怡君，等.檢測(cè)豬偽狂犬病抗體的3種ELISA試劑盒的比較分析[J].豬業(yè)科學(xué)，2008（8）：96-97.

[2]楊濤，李謂娟.Kappa檢驗(yàn)比較2種豬偽狂犬病gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒[J].福建畜牧獸醫(yī)，2015，37（6）：11-13.

[3] 蔡振鴻，趙冉，楊濤，等.3種豬偽狂犬病gB抗體ELISA檢測(cè)試劑盒的比較[J].福建畜牧獸醫(yī)，2016，38（6）：38.

[4]肖亞朋，龍進(jìn)學(xué)，黨占國(guó)，等.兩種豬偽狂犬病gB抗體檢測(cè)ELISA試劑盒的應(yīng)用比較[J].養(yǎng)豬，2015（4）.

S854.43

：B

：1001-8964（2017）04-0032-02

2017-02-27

優(yōu)質(zhì)瘦肉型配套系種豬選育與產(chǎn)業(yè)化示范項(xiàng)目（桂科重14121003-2-3）

陸江（1977-），男，廣西南寧人，畜牧師，主要從事養(yǎng)豬生產(chǎn)、豬場(chǎng)疫病監(jiān)測(cè)和防治工作。