黃芪黃酮干預(yù)脾虛水濕不化大鼠血漿代謝組學(xué)研究

劉阿娜 趙文曉 鞏麗麗 于瑞雪 崔寧 陳邇東

摘要采用高效液相色譜結(jié)合飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)正常大鼠、脾虛水濕不化證大鼠及黃芪黃酮組分干預(yù)后大鼠血漿內(nèi)源性代謝物變化，獲取大鼠血漿代謝圖譜，研究黃芪黃酮組分干預(yù)脾虛水濕不化證的作用機(jī)制。采用高脂低蛋白飲食加負(fù)重游泳力竭建立脾虛水濕不化證大鼠模型，選擇HaloC18色譜柱，流動(dòng)相為0.05%甲酸水與0.05%甲酸乙腈，梯度洗脫，利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析測(cè)定大鼠血漿樣品。利用主成分分析法對(duì)造模前后大鼠血漿樣本進(jìn)行代謝輪廓分析，結(jié)合變量投影重要性及顯著性分析等篩選對(duì)分組貢獻(xiàn)最大的差異標(biāo)志物及相關(guān)通路，闡明藥物的作用機(jī)制。結(jié)果表明，黃芪黃酮組代謝輪廓異于模型組，而接近于正常組，共鑒定出了包含甘油磷脂類(lèi)、鞘酯類(lèi)、氨基酸類(lèi)等在內(nèi)的11種潛在生物標(biāo)志物，其代謝通路包括三羧酸循環(huán)、甘油磷脂代謝、脂肪酸代謝及氨基酸代謝等，主要涉及體內(nèi)能量代謝和脂肪代謝。黃芪黃酮干預(yù)脾虛水濕不化證大鼠后，宏觀指標(biāo)（如體重、自主活動(dòng)）和微觀指標(biāo)（如代謝標(biāo)志物、血脂）均明顯回調(diào)，表明黃芪黃酮可能主要通過(guò)調(diào)節(jié)能量代謝、脂肪代謝等途徑而發(fā)揮健脾利水作用。

關(guān)鍵詞黃芪黃酮；脾虛水濕不化證；代謝組學(xué)；高效液相色譜飛行時(shí)間質(zhì)譜

1引言

黃芪為臨床傳統(tǒng)用藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有健脾補(bǔ)中，利水消腫等功效[1]。脾虛證是一組能比較集中反映脾各種生理功能不足表現(xiàn)的綜合征候群，臨床多采用益氣健脾法治療。黃芪為“補(bǔ)益脾氣之要藥”，故在臨床上主要用于治療脾虛發(fā)熱[2]、脾虛腸易激綜合征[3]及其它各種脾虛疾病[4]，但目前其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制尚不明確。

黃芪化學(xué)成分多而復(fù)雜，主要包括皂苷、黃酮及多糖類(lèi)。近代藥理研究結(jié)果表明，黃芪黃酮具有改善胃腸功能[5]促進(jìn)水液代謝[6]、降低血脂、健脾[7]及抗腫瘤[8]等功效。本課題組前期研究結(jié)果也表明黃芪黃酮組分對(duì)脾虛水濕不化證大鼠一般狀況、血脂等指標(biāo)均有不同程度的治療作用[9]，表明黃芪黃酮組分可能是黃芪發(fā)揮健脾利水作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。

目前，文獻(xiàn)報(bào)道的黃芪及其主要活性成分治療疾病作用機(jī)制的研究幾乎都是從藥理作用及分子角度出發(fā)。近年來(lái)，隨著代謝組學(xué)的快速發(fā)展[10～13]，越來(lái)越多的研究采用代謝組學(xué)方法闡釋中藥及復(fù)方藥治療脾虛證的機(jī)制。陳磊等[14]利用代謝組學(xué)方法研究了補(bǔ)中益氣湯治療脾虛的作用機(jī)制。但目前尚無(wú)從黃芪黃酮等活性成分角度對(duì)治療脾虛水濕不化證的作用機(jī)制進(jìn)行研究的代謝組學(xué)研究報(bào)道。本研究從代謝組學(xué)角度出發(fā)，利用高效液相色譜飛行時(shí)間質(zhì)譜結(jié)合模式識(shí)別技術(shù)分析鑒定了黃芪黃酮組分干預(yù)前后脾虛水濕不化證大鼠血漿內(nèi)源性代謝物，初步探討黃芪黃酮組分治療脾虛水濕不化證的作用機(jī)制，為進(jìn)一步研究黃芪健脾利水的物質(zhì)基礎(chǔ)及深入探尋其作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器與試劑

Agilent1260高效液相色譜（美國(guó)AgilentTechnologies公司），配有在線(xiàn)真空脫氣機(jī)、四元泵、柱溫箱和檢測(cè)器；Agilent6230飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（美國(guó)AgilentTechnologies公司），配有ESI離子源和在線(xiàn)MassHunter數(shù)據(jù)采集處理系統(tǒng)；VORTEXGENIE2渦旋儀（美國(guó)SI公司）；凱特TD5A離心機(jī)（鹽城凱特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。乙腈、甲醇（色譜純，美國(guó)Merck公司）；甲酸（色譜純，美國(guó)Tedia公司）；實(shí)驗(yàn)用水為超純水，由美國(guó)Millipore公司的MilliQ系統(tǒng)制得。

2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康Wistar大鼠30只，體重（150±20）g，雌雄各半，購(gòu)自魯抗醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（許可證編號(hào)SCXK魯20130001）。

2.3實(shí)驗(yàn)藥物

黃芪黃酮組分制法及含量測(cè)定：采用傳統(tǒng)水煎煮法，濃縮液經(jīng)80%乙醇沉淀，取上清液回收至無(wú)醇味，乙酸乙酯萃取，制備黃芪黃酮組分。HPLCPDA含量測(cè)定，色譜柱為ZORBAXSBC18柱（250mm×4.6mm，5μm，美國(guó)Agilent公司）；流動(dòng)相A：乙腈，B：0.1%甲酸，流速：0.5mL/min，線(xiàn)性梯度洗脫：0～10min，5%A；10～30min，5%～40%A；30～60min，40%～70%A；60～70min，70%～100%A。進(jìn)樣量：10μL，PDA檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。結(jié)果測(cè)得毛蕊異黃酮含量7.78mg/g，毛蕊異黃酮苷含量4.88mg/g，芒柄花苷含量3.80mg/g，芒柄花素含量4.79mg/g。

2.4大鼠造模方法，評(píng)價(jià)指標(biāo)及分組給藥

Wistar大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)分為正常組（10只，雌雄各半）和實(shí)驗(yàn)組（20只，雌雄各半）。正常組以純化飼料飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組依據(jù)《中藥治療脾虛證的臨床研究指標(biāo)原則》和《中醫(yī)濕病學(xué)》[15，16]釆用“飲食失節(jié)（高脂低蛋白飲食）+勞倦過(guò)度（負(fù)重游泳）”復(fù)合因素誘導(dǎo)，建立脾虛水濕不化證大鼠模型，按毛色、體重消瘦、自主活動(dòng)等指標(biāo)評(píng)分，評(píng)價(jià)模型。造模成功[6]后將實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)分為模型組與黃芪黃酮組（每組各10只，雌雄各半），黃芪黃酮組根據(jù)2015版藥典成人日服黃芪最高劑量（30g/70Kg）及等效劑量系數(shù)折算法換算[17]，給予大鼠黃芪黃酮提取物0.07g/kg，正常組與模型組給予等量生理鹽水，每天灌胃給藥1次，連續(xù)2周。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組老鼠出現(xiàn)死亡（正常組1只（雄性），模型組2只（1雄1雌），黃芪黃酮組2只（2雌）），造模結(jié)束后25只老鼠納入代謝組學(xué)實(shí)驗(yàn)用。

2.5血漿樣品的采集與處理

大鼠行腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，肝素鈉抗凝，離心15min，上清液于 80℃保存。分析前血漿樣本室溫解凍，準(zhǔn)確吸取300μL，加入600μL甲醇，渦旋1.5min，4000r/min離心15min，上清液經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾后分析。

2.6實(shí)驗(yàn)方法

2.6.1色譜條件色譜柱為HaloC18柱（100mm×2.1mm，2.7μm，美國(guó)AdvancedMaterialsTechonology公司），經(jīng)色譜條件優(yōu)化，流動(dòng)相A為0.05%甲酸，B為0.05%甲酸乙腈。梯度洗脫：0～10min，90%～70%A；10～20min，70%～40%A；20～28min，40%A；28～30min，40%～36%A。進(jìn)樣量5μL，流動(dòng)相流速為0.3mL/min，柱溫25℃。

2.6.2質(zhì)譜條件采用ESI源，正離子模式，干燥氣溫度350℃，干燥氣流速10L/min，毛細(xì)管電壓4000V，霧化氣壓力為35psi，碎裂電壓140V，質(zhì)荷比掃描范圍：m/z50～1000。選取m/z121.050873和922.009798作為參比離子。

2.7代謝組學(xué)數(shù)據(jù)處理與分析

2.7.1數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)價(jià)所有血漿樣本取100μL，等量混合，制成質(zhì)控（Qualitycontrol，QC）樣本，處理方法同血漿樣品。樣品檢測(cè)前進(jìn)樣5次QC樣本，使系統(tǒng)平衡。每隔6個(gè)樣品插入一個(gè)QC樣本進(jìn)行檢測(cè)，將獲得的QC樣本數(shù)據(jù)矩陣進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，觀察QC樣品聚類(lèi)效果從而評(píng)估數(shù)據(jù)質(zhì)量。

2.7.2數(shù)據(jù)處理原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)采用ProteoWizard（http：//proteowizard.sourceforge.net/）軟件轉(zhuǎn)換成“.mzXML”格式，利用XCMS處理軟件進(jìn)行峰識(shí)別、峰校準(zhǔn)、濾噪和數(shù)據(jù)簡(jiǎn)化處理。將包含化合物保留時(shí)間、質(zhì)荷比信息與峰強(qiáng)度的結(jié)果以“.csv”格式導(dǎo)入Metaboanalyst3.0（http：//www.metaboanalyst.ca）網(wǎng)絡(luò)分析平臺(tái)進(jìn)行主成分分析（Principalcomponentsanalysis，PCA）和偏最小二乘判別分析（Partialleastsquaresdiscriminantanalysis，PLSDA），用各組變量投影重要性參數(shù)（Variableimportancefortheprojection，VIP）篩選潛在的生物標(biāo)志物，篩選出VIP>1[18]的變量以xls格式導(dǎo)入到MassProfilerProfessional軟件（美國(guó)Agilent公司，MPP）中進(jìn)行AnalysisofVariance（ANOVA）分析，篩選p<0.05的變量。本實(shí)驗(yàn)將VIP>1、p<0.05的代謝物作為候選的潛在生物標(biāo)志物。通過(guò)檢索HMDB（http：//www.hmdb.ca）、METLIN（https：//metlin.scripps.edu）、KEGG（http：//www.genome.jp/kegg/）數(shù)據(jù)庫(kù)，同時(shí)參照文獻(xiàn)及質(zhì)譜鑒定結(jié)果而確定標(biāo)志物結(jié)構(gòu)。

3結(jié)果與討論

3.1一般狀況

正常組大鼠反應(yīng)敏捷，體肌健壯，攝食正常。

模型組大鼠與正常組相比表現(xiàn)出自主活動(dòng)降低（p<0.01）、皮毛干枯、蓬亂、光澤度降低、體重下降（p<0.01）等狀況，

表明造模成功。而與模型組相比，黃芪黃酮組大鼠神倦乏力、體重（p<0.01）、自主活動(dòng)（p<0.01）等能量代謝宏觀指標(biāo)均有改善，表明黃芪黃酮組分對(duì)脾虛水濕不化證有一定的治療作用。

3.2血漿樣品的分離與分析

圖1為各組大鼠及QC樣本正離子模式下的總離子流圖，各組色譜峰保留時(shí)間基本一致，同一時(shí)間色譜峰高度有差別，表明3組大鼠體內(nèi)的代謝模式發(fā)生變化。但圖中某些色譜峰的保留時(shí)間發(fā)生漂移，需要進(jìn)行數(shù)據(jù)預(yù)處理。

3.3數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)價(jià)

QC實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入MetaboAnalyst3.0軟件進(jìn)行主成分分析，QC數(shù)據(jù)間聚類(lèi)緊密，并集中分布于95%可信區(qū)間內(nèi)，表明數(shù)據(jù)質(zhì)量可靠。為進(jìn)一步驗(yàn)證數(shù)據(jù)質(zhì)量的可靠性，從QC樣本中選取質(zhì)量數(shù)從低到高的10個(gè)離子（離子信號(hào)用m/z與保留時(shí)間（min）表示，計(jì)算結(jié)果顯示各離子的RSD值<3%）見(jiàn)表1，說(shuō)明數(shù)據(jù)可靠。

3.4數(shù)據(jù)結(jié)果分析

無(wú)監(jiān)督PCA方法對(duì)正常組與模型組大鼠之間的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。PCA得分圖（圖2A）中模型組與正常組明顯分離，表明兩組大鼠血漿代謝模式發(fā)生變化。為進(jìn)一步尋找3組之間的差異變量，利用PLSDA進(jìn)行有監(jiān)督的模式識(shí)別，PLSDA得分圖（圖2B）中3組組內(nèi)聚類(lèi)緊密，組間區(qū)分良好，黃芪黃酮組位于兩組之間且趨向于正常組，表明給予黃芪黃酮組分后，脾虛水濕不化證大鼠血漿代謝模式趨向正常。為增加結(jié)果準(zhǔn)確性、評(píng)判模型的有效性以及防止過(guò)度擬合現(xiàn)象，對(duì)PLSDA模型進(jìn)行排列檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)圖2C。在建立的模型中，原始值R2Y=0.949，Q2=0.872，說(shuō)明模型的擬合能力和預(yù)測(cè)能力良好（R2Y表示模型的擬合能力，Q2表示模型的預(yù)測(cè)能力），50次隨機(jī)排列后R2和Q2的截距為0.225，-0.378（排列檢驗(yàn)對(duì)應(yīng)的R2和Q2的截距應(yīng)各小于0.3，0.05[19]），R2和Q2兩者皆在規(guī)定范圍內(nèi)，表明所建模型無(wú)過(guò)度擬合。

〖PS07402.eps，BP#〖TS（〖HK38〖HT5”SS

圖2（A）正常組、模型組PCA得分圖；（B）3組PLSDA得分圖；（C）代謝組學(xué)模型排列檢驗(yàn)法的可靠性驗(yàn)證結(jié)果

3.5潛在標(biāo)志物的鑒定

查詢(xún)HMDB，METLIN和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)，并與質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)及文獻(xiàn)＼[20～22＼]進(jìn)行比對(duì)，3組共有11種內(nèi)源性代謝產(chǎn)物具有顯著性差異（p<0.05），見(jiàn)表2。與正常組相比，模型組中乳酸、磷脂酰膽堿、〖CM（44溶血磷脂酰膽堿、鞘磷脂、甘油磷酸膽堿含量升高，而苯丙氨酸、甜菜堿、丙氨酸、鞘氨醇及纈氨酸含量〖CM）

模型組vs正常組，T/M：黃芪黃酮組vs模型組p<0.05，p<0.01↑上調(diào)；↓下調(diào)。

M/N：Modelgroupvsnormalgroup，T/M：flavonoidsofAstragalusgroupvsmodelgroup，p<0.05，p<0.01↑up；↓down.[BG）W][HT5][HJ]

下降（p<0.05，p<0.01）；黃芪黃酮組與模型組相比11種內(nèi)源性代謝物含量發(fā)生不同程度的回調(diào)（圖3），表明黃芪黃酮組分對(duì)脾虛水濕不化證有一定的治療作用。實(shí)驗(yàn)鑒別出的代謝產(chǎn)物，聯(lián)系其相關(guān)的代謝通路，構(gòu)建了相關(guān)代謝網(wǎng)絡(luò)示意圖。

3.6標(biāo)記物代謝通路分析

脾虛水濕不化證模型大鼠血漿中乳酸含量升高，見(jiàn)圖3F。乳酸在機(jī)體內(nèi)的代謝途徑大致有兩條：一是完全氧化為CO2和H2O供能，二是通過(guò)糖異生途徑轉(zhuǎn)化為葡萄糖，上述兩條代謝途徑皆需要氧氣[23]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M中乳酸含量顯著高于正常組，可能是由于對(duì)氧的利用率下降所致。陳磊等[14]研究發(fā)現(xiàn)乳酸在脾虛證模型大鼠脾臟中也具有同樣的變化趨勢(shì)。黃芪黃酮組分干預(yù)后大鼠血中乳酸含量下調(diào)，表明黃芪黃酮組分可能通過(guò)糾正低氧狀態(tài)而發(fā)揮治療作用。

苯丙氨酸、纈氨酸及丙氨酸皆為生糖氨基酸。在體內(nèi)酶的作用下纈氨酸分解產(chǎn)生琥珀酰輔酶A。苯丙氨酸在酶的作用下先生成酪氨酸，后者體內(nèi)繼續(xù)分解代謝最終形成乙酰乙酸和延胡索酸，丙氨酸參與體內(nèi)丙氨酸葡萄糖循環(huán)途徑，在脫氨酶的作用下生成丙酮酸，亦可轉(zhuǎn)化為葡萄糖儲(chǔ)存能量[23]。相關(guān)代謝物的代謝網(wǎng)絡(luò)示意圖如圖4所示，3種氨基酸的代謝產(chǎn)物為三羧酸循環(huán)代謝底物。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠體內(nèi)3種氨基酸含量下調(diào)（見(jiàn)圖3H，J和K），表明脾虛大鼠體內(nèi)氨基酸代謝紊亂而間接導(dǎo)致能量代謝功能下降[22]，黃芪黃酮組分干預(yù)后，3種氨基酸水平回調(diào)，表明黃芪黃酮組分干預(yù)脾虛水濕不化過(guò)程中通過(guò)調(diào)節(jié)體內(nèi)氨基酸水平而間接調(diào)控三羧酸代謝發(fā)揮治療作用。

溶血磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿、甘油磷脂酰膽堿三者皆屬于膽堿類(lèi)化合物。三者在體內(nèi)能夠促進(jìn)脂肪燃燒[24]。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，高脂低蛋白飲食造成大鼠脾虛證候，致飲食減少[6]，糖攝入及運(yùn)化不足，導(dǎo)致糖分解供能障礙。機(jī)體為維持基本生命活動(dòng)，代償性動(dòng)員脂肪分解供能[24]，脂肪分解供能過(guò)程中體內(nèi)上述膽堿類(lèi)物質(zhì)含量上調(diào)（見(jiàn)圖3A，B和E），但過(guò)度動(dòng)員導(dǎo)致體內(nèi)脂肪代謝紊亂[24]。楊宇峰等[21]在利用代謝組學(xué)研究脾腎氣虛證時(shí)發(fā)現(xiàn)，患者血漿中溶血磷2脂酰膽堿與正常組相比有上調(diào)的趨勢(shì)，與本研究結(jié)果一致。黃芪黃酮組分干預(yù)后，大鼠脾虛癥狀緩解，飲食增加，能量代謝恢復(fù)，不再代償性分解脂肪。膽堿類(lèi)物質(zhì)在干預(yù)后下調(diào)，表明黃芪黃酮組分通過(guò)健脾利水作用，恢復(fù)能量代謝而使脂肪代謝恢復(fù)正常。

棕櫚酰肉堿（圖3D），體內(nèi)長(zhǎng)鏈脂酰CoA與肉毒堿結(jié)合轉(zhuǎn)化為脂酰肉毒堿（如棕櫚酰肉堿）進(jìn)入線(xiàn)粒體內(nèi)膜，實(shí)現(xiàn)脂肪酸在線(xiàn)粒體內(nèi)進(jìn)行β氧化，為機(jī)體供能[25]。甜菜堿（圖3I），體內(nèi)可由膽堿轉(zhuǎn)化而來(lái)[25]。甜菜堿作為一種甲基供體，可為甲基化產(chǎn)物肉堿提供甲基，促進(jìn)肉堿合成。本實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠體內(nèi)脂肪代謝活躍，導(dǎo)致肉堿含量被動(dòng)增加，故棕櫚酰肉堿含量升高，而甲基供體的甜菜堿含量下調(diào)。這可能與脾虛導(dǎo)致的運(yùn)化水谷精微減少相關(guān)，體內(nèi)代償性分解脂肪，故棕櫚酰肉堿含量升高，而甜菜堿含量下調(diào)[26]。黃芪黃酮組分干預(yù)后，糖代謝恢復(fù)正常，脂肪動(dòng)員減弱，棕櫚酰肉堿在大鼠體內(nèi)含量下調(diào)，而甜菜堿含量上調(diào)。

綜上所述，脾虛水濕不化證大鼠代謝組學(xué)研究表明，疾病大鼠體內(nèi)能量代謝、脂肪代謝、氨基酸代謝等微觀指標(biāo)代謝異常，這與前期疾病大鼠體重、自主活動(dòng)等宏觀指標(biāo)研究結(jié)果相符[9]。黃芪黃酮組分可能通過(guò)調(diào)節(jié)上述代謝通路發(fā)揮健脾利水作用，使脾虛水濕不化證大鼠宏觀指標(biāo)恢復(fù)正常，上述代謝組學(xué)研究結(jié)果表明，黃芪黃酮組分確為黃芪藥材健脾利水的藥效成份之一。

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AbstractAmethodofhighperformanceliquidchromatographycoupledwithtimeofflightmassspectrometrywasusedtodetecttheendogenousmetaboliteschangesinplasmaofnormalrats，ratsofdampnessstagnancyduetospleendeficiencyandAstragalusflavonecomponentinterventionrats.MetabolismmapofratplasmawasobtainedandthemechanismofAstragalusflavonoidsondampnessstagnancyduetospleendeficiencywasstudied.Ratmodelwithdampnessstagnancyduetospleendeficiencywasestablishedbyhighfatandlowproteindietplusloadswimming.Liquidchromatographytandemmassspectrometrywasusedfortheanalysisofratplasmasample，and0.05%formicacidwaterwith0.05%formicacidacetonitrileasthemobilephasewasappliedingradientelutionwithHaloC18chromatographiccolumn.Inthisstudy，partialleastsquaresdiscriminantanalysisandvarianceanalysiswereusedtoscreenthepotentialbiomarkers，itwasfoundthatthemetabolicprofileoftheAstragalusflavonoidswasdifferentfromthatofthemodelgroup，whichwasclosetothatofthenormalgroup.Atotalof11potentialbiomarkerswereidentified，includingglycerolphospholipids，sphingolipids，aminoacids，andsoon.Themetabolicpathwaysofbiomarkersincludingthreetricarboxylicacidcycle，glycerolphospholipidmetabolism，fattyacidmetabolism，aminoacidmetabolismandsoon，whichmainlyrelatedtoenergymetabolismandfatmetabolisminthebody.RelatedindexesofratswithsyndromeofspleendeficiencyofwateranddampnessweresignificantlycallbackafterAstragalusflavoneintervention，includingmacroindicatorssuchasbodyweight，independentactivitiesandmicroindicatorssuchasmetabolicmarkers，bloodlipidsandothers.TheresultshowedthatAstragalusflavonoidsplayedtheroleofstrengtheningthespleenanddrainingthewatermainlythroughregulatingtheenergymetabolism，fatmetabolismandsoon.

KeywordsAstragalusflavonoids；Dampnessstagnancyduetospleendeficience；Metabolics；Highperformanceliquidchromatographytimeofflightmassspectrometry

（Received5October2016；accepted9December2016）

ThisworkweresupportedbytheNationalBasicResearchProgramofChina（Nos.2013CB5318000）.