四川獼猴桃軟腐病防治初步研究

胡容平，石軍，林立金，葉慧麗*，姚琳，周游

(1.四川省農業(yè)科學院植物保護研究所/農業(yè)部西南作物有害生物綜合治理重點實驗室，四川成都610066;2.綿陽市農業(yè)科學研究院，四川綿陽621023;3.四川農業(yè)大學果蔬研究所，四川成都611130)

四川獼猴桃軟腐病防治初步研究

胡容平1，石軍2，林立金3，葉慧麗1*，姚琳1，周游3

(1.四川省農業(yè)科學院植物保護研究所/農業(yè)部西南作物有害生物綜合治理重點實驗室，四川成都610066;2.綿陽市農業(yè)科學研究院，四川綿陽621023;3.四川農業(yè)大學果蔬研究所，四川成都611130)

本試驗以木霉菌(Trichoderma spp.)為生防篩選材料，針對獼猴桃軟腐病(葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea)，通過對峙培養(yǎng)、難揮發(fā)性代謝產物的拮抗試驗以及5種殺菌劑對病原菌的毒力測定，為獼猴桃軟腐病生物、化學防治提供參考的理論依據。結果表明，菌株T156-37對葡萄座腔菌的拮抗效果最好，抑制率達到66.11%。木霉菌株T163-8的難揮發(fā)性代謝產物對葡萄座腔菌的抑制作用最好，抑制率達到63.26%。25%咪鮮胺在室內生測試驗效果顯著，其次是30%苯醚甲環(huán)唑.丙環(huán)唑，EC50(μg/ mL)分別是0.3825和10.2351。

獼猴桃;軟腐病;木霉;生物防治;毒力測定

獼猴桃素有“維C之王”的美譽，深受廣大消費者喜愛［1］。四川生態(tài)條件適宜栽植獼猴桃，栽培面積已近4萬hm2，是四川省具有重要經濟價值的水果之一，為提高農民收入，增加社會、經濟效益做出了巨大貢獻［3］。但隨著獼猴桃種植面積的擴大和種植時間的延長，病蟲害問題日益突出，特別是采后病害對獼猴桃產業(yè)的發(fā)展影響很大，其中獼猴桃軟腐病是貯藏期的重要病害［4－5］，采后發(fā)病率通常在10%左右，嚴重者可達20%以上，大大降低了獼猴桃的商品性，給獼猴桃生產造成了重大損失［6］。

1985年Pennycook在新西蘭于首次報道獼猴桃軟腐病以來［7］，其防治方法就一直受到重視，但大都采用傳統單一的化學防治方法，既污染環(huán)境，又增加農殘，長期使用還產生了抗藥性，難以達到理想防治效果［8－9］。隨著綠色植保理念的不斷深入，運用生物防治手段控制植物病害已越來越受到世界各國的重視［10－11］。在植物真菌病害生物防治中，木霉(Trichoderma spp.)是一種重要的生防因子，具有廣闊的生防應用前景。木霉在20世紀30年代就被確認具有生防能力，并且在國內外研究中，利用木霉防治植物病害特別是真菌引起的腐爛病害報道較多［12－14］。本研究結合篩選生防木霉菌與高效低毒化學藥劑的綜合防治方法，為獼猴桃軟腐病的有效防治提供參考。

表1 供試藥劑Table 1 Tested pesticides

1 材料與方法

1.1 供試材料

病原菌:葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)，獼猴桃產區(qū)采樣分離、鑒定所得。供試生防菌株:共20株木霉(Trichoderma spp.)，于產區(qū)采集獼猴桃植株根際土樣，分離純化所得，部分菌株由四川農業(yè)大學植病系提供。培養(yǎng)基:PDA(馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基)。供試藥劑見表1。

1.2 試驗方法

1.2.1 木霉對葡萄座腔菌的對峙培養(yǎng)菌塊的制備:取分離獲得的葡萄座腔菌和木霉，分別接種于PDA平板培養(yǎng)基上，于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d，然后用直徑5 mm的已經滅菌的打孔器在菌落邊緣打取菌塊備用。對峙培養(yǎng):在直徑9 cm的PDA平板培養(yǎng)基上，在相距3 cm處分別接入上述制備好的木霉菌塊和葡萄座腔菌塊，將兩菌株菌片同時接種到PDA平板上，以單獨接種各供試菌的菌塊為對照，置于培養(yǎng)箱中25℃黑暗培養(yǎng)3 d。每處理設3個重復，定期觀察葡萄座腔菌的生長情況，記錄生長直徑［15］。

1.2.2 木霉難揮發(fā)性代謝產物對葡萄座腔菌的拮抗作用圓盤濾膜法測定:鋪無菌玻璃紙于PDA平板上，在玻璃紙中央接種直徑為5 mm的木霉菌塊，28℃恒溫培養(yǎng)。設置3個重復。待木霉菌絲長滿玻璃紙前，將玻璃紙移去。在平板中央接種已活化的葡萄座腔菌塊，28℃下恒溫培養(yǎng)。以不接木霉菌塊的PDA平板接種葡萄座腔菌作對照。培養(yǎng)到預定時間后，取出培養(yǎng)皿測量菌落直徑，每個菌落用十字交叉法測量直徑2次，取平均值。

1.2.3 5種殺菌劑對葡萄座腔菌的毒力測定采用殺菌劑室內生長速率法測定。將PDA培養(yǎng)基加熱融化，待其冷卻至40～45℃，添加鏈霉素(濃度1 %)3.3 mL/L后分別配置藥劑的母液，母液分別用定量無菌水稀釋成所需濃度，加入到冷卻的培養(yǎng)基中，制成含不同濃度藥劑的含藥培養(yǎng)基，充分搖勻后倒入培養(yǎng)皿(培養(yǎng)皿直徑為9 cm)。加入等體無菌水的PDA平板為對照。培養(yǎng)基凝固后，用打孔器(5 mm)制取已活化的菌餅，菌絲面朝下接種于含藥培養(yǎng)基中央，每種農藥稀釋成5個濃度梯度，每個處理3次重復，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱內光照培養(yǎng)，5 d后十字交叉測量供試病菌在含不同藥劑的培養(yǎng)基上的菌落直徑，與對照比較計算各藥劑處理對菌落擴展的生長抑制率。

1.2.4 毒力方程的計算將藥劑對菌絲的抑制率轉換成機率值(Y)，藥劑各濃度(μg/mL)轉換成對數值(X)，然后進行線性回歸分析，求出毒力回歸方程Y=A+BX和相關系數，最后計算出各藥劑對病菌菌絲生長的抑制中濃度(EC50)。分析比較不同殺菌劑對供試病菌菌絲生長速率的影響。

2 結果與分析

2.1 木霉對葡萄座腔菌的抑制作用

從表2可看出，供試的20株木霉對葡萄座腔菌菌絲生長均有一定的抑制作用，此批菌株抑制率50 %以上的占90%，其中菌株T156-37的抑制率極顯著大于其他菌株，達到66.11%，抑制效果最差的是菌株T143-12，其抑制率為44.56%。

2.2 木霉難揮發(fā)性代謝產物對葡萄座腔菌的抑制作用

從表3可看出，供試的20株木霉產生的難揮發(fā)性代謝產物對葡萄座腔菌菌絲生長均有一定抑制作用。抑制率50%以上的菌株占35%，其中木霉菌株T163-8抑制率極顯著高于其它菌株，達到63.82 %，菌株T7-17抑制效果最差，抑制率只有28.75%。比較對峙培養(yǎng)，代謝產物對病原菌的抑制效果不盡相同，存在明顯差異。

在簡東亮的眼里，李若什么都好，長得漂亮，性格開朗，工作也很努力上進。只是有一點讓簡東亮不理解，那就是李若對鞋子有著狂熱的嗜好，她可以忍餓挨凍，但鞋子不能不買。

表2 木霉對葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)的抑制率Table 2 Inhibition rate of Trichoderma on Botryosphaeria dothidea

表3 木霉難揮發(fā)性代謝產物對葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)的抑制率Table 3 Inhibition rate of Trichoderma difficult volatilemetabolites on Botryosphaeria dothidea

續(xù)表2 Continued table 2

表4 5種殺菌劑對葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)的毒力測定Table 4 Virulence of tested 5 kinds of fungicides to pathogen of Botryosphaeria dothidea

2.3 種殺菌劑對葡萄座腔菌的毒力測定

供試藥劑對葡萄座腔菌菌絲生長均具有不同程度的抑制作用。藥劑EC50的大小是衡量藥劑毒力大小的指標，藥劑EC50越小說明該藥劑的毒力越強。對葡萄座腔菌殺菌能力最強的是25%咪鮮胺EC，其EC50為0.3825μg/mL，其次是30%苯醚甲環(huán)唑.丙環(huán)唑EC，EC50為10.2351μg/mL，42.4%唑醚.氟酰胺SC的殺菌效果最差，75%百菌清WP和12.5%烯唑醇WP殺菌效果一般。

3 結論與討論

3.1 木霉對葡萄座腔菌的拮抗作用

通過木霉與葡萄座腔菌對峙培養(yǎng)試驗結果表明菌株T156-37對葡萄座腔菌的抑制效果最好，抑制率達到66.11%。此批試驗菌株系經過初篩后的菌株，均有一定的抑制效果，但不同木霉菌株對同一葡萄座腔菌株生防效果也存在顯著性差異，一定程度上可以說明木霉菌寄生?；浴Ｒ虼?，在木霉菌的生物防治應用中，須針對不同的病原菌采用不同的木霉菌株。相關研究報道［16］，木霉的存在多種拮抗機制，并且?guī)追N作用方式或是協同或是單一，但就哪種作用方式占主導地位，還需通過后續(xù)試驗研究論證，以找到準確的抗性機制，為研制有效木霉菌生防菌提供依據。

3.2 木霉難揮發(fā)性代謝產物對葡萄座腔菌的抑制作用

木霉在生命活動中能夠產生抗真菌的代謝產物。木霉菌株T163-8的代謝產物對葡萄座腔菌的抑制作用最好，抑制率達到63.26%。不同木霉菌株間的防治效果有顯著性差異，可能是由于不同木霉菌株的代謝產物含量、成分存在差異，或者由于木霉菌存在不同的生理小種而產生不同作用性質的代謝物，從而引起抑制效果呈顯著性差異。此次試驗還發(fā)現有些木霉菌株及其難揮發(fā)性代謝物對葡萄座腔菌的抑制效果都比較好，而有些菌株與其產生的代謝產物抑制效果呈負相關，說明生防菌株及其代謝產生之間的關系值得進一步研究。

3.3 殺菌劑對葡萄座腔菌的毒力測定

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(責任編輯 陳虹)

Prelim inary Study on Control Efficiency against Soft Rot Disease of K iw ifruit in Sichuan

HU Rong-ping1，SHI Jun2，LIN Li-jin3，YE Hui-li1*，YAO Lin1，ZHOU You3
(1.Institute of Plant Protection，Sichuan Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Integrated Pest Management on Crops in Southwest，Ministry of Agriculture，Sichuan Chengdu 610066，China;2.Mianyang Academy of Agricultural Sciences，Sichuan Mianyang 621023，China;3.Institute of Pomology and Olericulture，Sichuan Agricultural University，Sichuan Chengdu 611130，China)

Trichoderma spp.，as the biocontrol selectionmaterial，wasused to focuson the biocontrol of kiwifruit soft rot(Botryosphaeria dothidea)in thisexperiment，the confrontation culture of T.spp.and itsantagonistic testson non-volatilemetaboliteswere conducted，and the virulence of five kinds of fungicides to pathogen were determined to provide a reference for the biochemical and chemical control of kiwifruit soft rot.The results showed that the strain T156-37 had the best antagonistic effects on B.dothidea，and the inhibition rate reached 66.11 %.The inhibition rate of non-volatilemetabolites in Trichoderma strain T163-8 was63.26%.The 25%prochloraz in the indoor test resultswere significant，followed by the30%difenoconazoleyl.propiconazole，which EC50(μg/mL)were0.3825 and 10.2351，respectively.

Kiwifruit;Soft rot disease;Trichoderma spp.;Biocontrol control;Toxicity assay

S436.634

A

1001－4829(2017)2－0366－05

10.16213/j.cnki.scjas.2017.2.021

2016－01－30

四川省應用基礎項目“獼猴桃軟腐病菌遺傳多樣性及致病力、抗性評價體系研究”(2013JY0115);四川省科技支撐項目“利用熒光定量PCR技術建立獼猴桃軟腐病檢測預測體系”(2015NZ0036);四川省創(chuàng)新能力提升工程項目“四川獼猴桃儲藏期病害主要種類、發(fā)生特點及防治技術研究”(2014CXSF-018)

胡容平(1980－)，男，四川營山人，碩士，助理研究員，主要從事植物病害的研究，*為通訊作者，E-mail:44573780 @qq.com。