• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    馬鞭草中總黃酮的超聲波輔助提取及其抗氧化活性研究

    2013-05-16 01:30:44卞杰松馮紀(jì)南譚巧燕鄧斌
    關(guān)鍵詞:馬鞭草中總超氧

    卞杰松,馮紀(jì)南,譚巧燕,鄧斌*

    (1.湘南學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)系,湖南 郴州423000;2.湘南學(xué)院 財(cái)務(wù)處,湖南 郴州423000)

    0 引言

    馬鞭草(Verbena Officinalis L.)又叫鐵馬鞭、自馬鞭、瘧馬鞭,皆以穗類鞭鞘而得名.為馬鞭草科(Verbenaceae)多年生草本植物馬鞭草的全草或根.常生于河岸、草地、荒地、路邊、田邊及草坡等處,全國(guó)各地均有分布[1].馬鞭草在我國(guó)作為一種傳統(tǒng)的中藥,具有清熱解毒、利尿消腫、活血通經(jīng)等功效,廣泛用于治療傷風(fēng)感冒、水腫、痢疾、黃疸等疾病,被醫(yī)學(xué)專家譽(yù)為21世紀(jì)最具前途的綠色中草藥物之一,全草含有黃酮類、甾醇、氨基酸、內(nèi)酯或酯類和酚性成分[2,3].鑒于黃酮類物質(zhì)具有抗心腦血管病、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、抗過(guò)敏、免疫調(diào)節(jié)等作用,馬鞭草黃酮類化合物的研究日益引起了人們的重視[4,5].黃酮類化合物常用提取方法為有機(jī)溶劑回流提取等,但存在提取時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn).而超聲輔助提取作為一種優(yōu)良的提取方法,具有操作簡(jiǎn)便快捷、提取時(shí)間短及提出率高等特點(diǎn),目前己廣泛應(yīng)用在生物活性物質(zhì)的提取方面[6,7].為進(jìn)一步研究馬鞭草黃酮類化合物的功效,充分利用馬鞭草資源,本實(shí)驗(yàn)以馬鞭草中總黃酮提取率為考察指標(biāo),采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)的方法對(duì)超聲波輔助提取馬鞭草總黃酮的工藝條件進(jìn)行探討,確定其最佳提取工藝,并對(duì)馬鞭草黃酮類化合物物的抗氧化性進(jìn)行測(cè)定,以期為馬鞭草功能性成分的研究開(kāi)發(fā)提供依據(jù).

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    馬鞭草購(gòu)于郴州市老百姓大藥房,置于烘箱中80℃烘干,粉碎、過(guò)60目篩后置于干燥器中備用.無(wú)水乙醇、NaNO2、Al(NO3)3、NaOH、硫酸亞鐵、水楊酸、雙氧水、鄰苯三酚、Tris、鹽酸(以上試劑均為分析純);蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)10080-200306),中國(guó)藥品生物研究所.

    1.2 儀器與設(shè)備

    UV-7502PC型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì),上海欣茂儀器有限公司;DHG-9143BS-III型數(shù)顯電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱,上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;FA2104N型電子分析天平,上海精密科學(xué)儀器有限公司;KQ-500BE型超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司;SHB-IV雙A型循環(huán)水式多用真空泵,鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司;SENCO R201L型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,上海申生科技有限公司;DS-1型高速組織搗碎機(jī),上海標(biāo)本模型廠.

    1.3 方法

    1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    精密稱取干燥至質(zhì)量恒定的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10 mg,用無(wú)水乙醇溶解并定容于50 mL容量瓶中,得到0.2 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液.分別精密吸取 0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液于 10 mL 比色管中,加無(wú)水乙醇至 5.0 mL,加入質(zhì)量濃度 5g/100 mL NaNO2溶液0.3 mL,搖勻放置6 min,再加入質(zhì)量濃度10 g/100mL Al(NO3)3溶液0.3 mL,搖勻放置6 min,最后加1 mol/L NaOH溶液4 mL,用無(wú)水乙醇溶液補(bǔ)至刻度,搖勻放置10 min后,以無(wú)水乙醇為空白對(duì)比,在510 nm處測(cè)定其吸光度,吸光度(A)與溶液質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程 A=10.993C+0.0011,R=0.9997.

    1.3.2 馬鞭草中總黃酮的提取及含量測(cè)定

    稱取處理好的馬鞭草粉末2.000 g于錐形瓶中,在不同條件下進(jìn)行超聲波輔助提取,提取液經(jīng)抽濾后用相同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液定容至一定體積,準(zhǔn)確吸取一定體積的提取液,加0.05 g/mL亞硝酸鈉溶液0.2 mL,搖勻后放置6 min,加0.1 g/mL硝酸鋁溶液0.2 mL,搖勻后放置6 min,加1.0 mol/L氫氧化鈉溶液2.0 mL,再加乙醇定容至10 mL,搖勻,放置15 min,510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,根據(jù)回歸方程由吸光度求出各處理一定體積的提取液中黃酮的含量,并按照(1)計(jì)算出黃酮類化合物提取率.在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選取4因素3水平進(jìn)4行L9(34)正交試驗(yàn),確定最佳提取工藝.

    1.3.3 馬鞭草中黃酮類化合物對(duì)羥基自由基的清除率測(cè)定

    參照文獻(xiàn)[8]的方法.取5 支具塞試管依次向其中各加入 2.0 mmol/L FeSO42.0 mL、1.0 mmol/L H2O22.0 mL,振蕩,搖勻.再加入6.0 mmol/L水楊酸3.0 mL,搖勻,于37℃水浴加熱15 min.加熱完畢于510 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度A0.之后分別向 5 支試管中加入待試樣品(馬鞭草的乙醇提取物,黃酮含量為 0.4312 mg/mL)0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,接著再分別添加超純水 0.8、0.6、0.4、0.2、0.0 mL,搖勻,繼續(xù)水浴加熱 15 min,待加熱完畢后再次分別測(cè)其吸光度 Ax.對(duì)照實(shí)驗(yàn):用 2.0 mL 蒸餾水取代H2O2溶液,嚴(yán)格重復(fù)上述過(guò)程,測(cè)吸光度Ax0,則樣品對(duì)羥自由基的清除率計(jì)算見(jiàn)式(2).

    1.3.4 馬鞭草中黃酮類化合物對(duì)超氧陰離子自由基的抗氧化作用

    1.3.4.1 對(duì)超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定

    參照文獻(xiàn)[9,10]的方法.取6 支試管,分別編號(hào)為 0、1、2、3、4、5,各加入4.5 mL pH8.2 的50 mmol/LTris-HC1 緩沖液,再分別加入質(zhì)量濃度為 0.4335 mg/mL 的黃酮提取液 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,然后依次加蒸餾水 1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.0 mL,混勻后在25℃恒溫水浴中保溫20 min,取出后立即加入在25℃預(yù)熱過(guò)的3.0 mmol/L鄰苯三酚溶液0.3 mL(以10.0 mmol/LHCl溶液配制)啟動(dòng)反應(yīng).5 min后加4滴10.0 mol/L鹽酸終止反應(yīng).同時(shí)另取 6支試管,分別編號(hào)為 0’、1’、2’、3’、4’、5’,按上述步驟依次加入 Tris-HCl緩沖液、黃酮類化合物提取液和蒸餾水,然后分別加10.0 mmol/L鹽酸0.3 mL,5 min后加4滴10.0 mol/L鹽酸終止反應(yīng).在325 nm 處用管0調(diào)零,測(cè)管0’的吸光度,為A對(duì)照;用管1調(diào)零,測(cè)管1’的吸光度,為A加藥1,再依次用管 2、3、4、5 調(diào)零測(cè)管 2’、3’、4’、5’的吸光度,得 A加藥2、A加藥3、A加藥4、A加藥5.按照式(3)計(jì)算各質(zhì)量濃度黃酮類化合物提取液對(duì)超氧陰離子自由基的清除率.

    1.3.4.2 對(duì)超氧陰離子自由基生成速度的抑制率測(cè)定

    按照上述(黃酮類化合物提取液對(duì)超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定)的反應(yīng)體系,反應(yīng)啟動(dòng)后,每30 s測(cè)一相應(yīng)的A值,至5 min止.將所得的A值與時(shí)間進(jìn)行回歸分析,其斜率為超氧陰離子自由基的生成速度V.然后按公式(4)計(jì)算出各質(zhì)量濃度黃酮類化合物提取液對(duì)超氧陰離子自由基生成速度的抑制率.

    2 結(jié)果與討論

    2.1 單因素試驗(yàn)

    2.1.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)馬鞭草總黃酮提取效果的影響

    在超聲提取溫度為60℃、超聲提取時(shí)間20 min、超聲波功率400 W、固液比1∶30(g/mL)的條件下,分別考察體積分?jǐn)?shù)為40%、50%、60%、70%、80% 的乙醇溶液對(duì)馬鞭草總黃酮提取效果的影響,結(jié)果如圖1所示.

    從圖1可以看出,提取率隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大而提高,當(dāng)乙醇濃度上升至70%以后,總黃酮的提取率提高幅度趨于平穩(wěn),雖然在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi),用80%乙醇作為提取劑時(shí),得到的提取率最高,但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)此時(shí)提取出的非黃酮類干擾物質(zhì)也越多,同時(shí)考慮到經(jīng)濟(jì)效益、提取成本等問(wèn)題,選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)在60% ~70%范圍內(nèi)是適宜的.

    2.1.2 超聲提取時(shí)間對(duì)馬鞭草總黃酮提取效果的影響

    在超聲提取溫度為60℃、超聲波功率400 W、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、固液比1∶30(g/mL)條件下,分別考察超聲提取時(shí)間為5 min、10 min、15 min、20 min、25 min條件下,超聲輔助提取對(duì)馬鞭草中總黃酮提取效果的影響,結(jié)果如圖2所示.

    從圖2可以看出,超聲提取時(shí)間在5~20 min之間提取率變化較大,在20 min達(dá)到最大值,然后提取率隨著時(shí)間的延長(zhǎng)開(kāi)始下降,這可能是時(shí)間過(guò)長(zhǎng),黃酮類物質(zhì)易于分解,且時(shí)間過(guò)長(zhǎng),溫度容易偏高,使細(xì)胞內(nèi)蛋白凝固,黃酮類物質(zhì)不易溶出.因此超聲提取時(shí)間控制在20 min左右較佳,有鑒于此,在以下的正交實(shí)驗(yàn)中提取時(shí)間不再作為一個(gè)主要因素予以考察.

    圖1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)馬鞭草中總黃酮提取率的影響

    圖2 超聲提取時(shí)間對(duì)馬鞭草中總黃酮提取率的影響

    2.1.3 超聲波功率對(duì)馬鞭草總黃酮提取效果的影響

    在超聲溫度60℃、超聲時(shí)間20 min、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、固液比1∶30(g/mL)的條件下,分別考察超聲功率為300 W、400 W、500 W、600 W、700 W時(shí),提取工藝對(duì)馬鞭草總黃酮提取效果的影響,結(jié)果如圖3所示.

    圖3 超聲波功率對(duì)馬鞭草中總黃酮提取率的影響

    圖4 超聲提取溫度對(duì)馬鞭草中總黃酮提取率的影響

    由圖3可知,隨著超聲功率的提高,總黃酮的提取率逐漸增加,在超聲功率為500 W時(shí)達(dá)到最大,之后反而降低,因此選擇500 W功率為適宜超聲功率.

    2.1.4 超聲提取溫度對(duì)馬鞭草總黃酮提取效果的影響

    在超聲功率400 W、超聲時(shí)間20 min、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、固液比1∶30(g/mL)條件下,分別考察超聲提取溫度為30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃時(shí)對(duì)馬鞭草總黃酮提取效果的影響,結(jié)果如圖4所示.

    從圖4可以看出,隨著提取溫度的升高,總黃酮的提取率也隨之升高,當(dāng)溫度達(dá)到60~70℃時(shí)總黃酮提取率處于較高值,當(dāng)溫度高于75℃以后,總黃酮的提取率隨著溫度升高而開(kāi)始降低,這是因?yàn)闇囟冗^(guò)高時(shí),乙醇(沸點(diǎn)78℃)對(duì)提取物質(zhì)間的氫鍵的締合力降低,溶解度減小,故總黃酮的提取率減小,提取效果降低.因此,可將超聲輔助提取溫度控制在70℃附近為宜.

    2.1.5 固液比對(duì)馬鞭草黃酮類化合物提取效果的影響

    在超聲功率400 W、超聲時(shí)間20 min、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、超聲溫度60 ℃條件下,分別考察固液比為 1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50(g/mL)時(shí)對(duì)馬鞭草黃酮類化合物提取效果的影響,結(jié)果如圖5所示.

    由圖5可知,隨著固液比的增大,總黃酮提取率逐步升高,當(dāng)固液比達(dá)到1∶40后,進(jìn)一步提高固液比,提取率增加趨于緩慢,考慮提取效益、溶劑成本及回收問(wèn)題,選取固液比為1∶40(g/mL)是適宜的.

    2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

    綜合單因素試驗(yàn)的結(jié)果,利用極差法確定出乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲提取時(shí)間、固液比、超聲提取溫度為影響馬鞭草中總黃酮提取效果的主要因素,對(duì)上述4個(gè)因素以總黃酮提取率為評(píng)判指標(biāo),選用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)優(yōu)選方案設(shè)計(jì),其因素水平設(shè)置見(jiàn)表1,試驗(yàn)結(jié)果如表2所示.

    圖5 固液比對(duì)馬鞭草中總黃酮提取率的影響

    表1 因素水平設(shè)計(jì)表

    表2 L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

    由表2結(jié)果可知,影響馬鞭草中總黃酮提取率4個(gè)主要因素的主次順序?yàn)?D>B>A>C,即固液比>超聲波功率>提取溫度>乙醇體積分?jǐn)?shù).通過(guò)極差分析,結(jié)果表明,正交試驗(yàn)得到的最佳提取工藝為:A3B2C3D3,即在提取時(shí)間20 min,選用固液比為1∶40(g/mL),乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%,超聲輔助提取溫度為70℃,超聲波功率為500 W.采用上述最佳提取工藝條件進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)驗(yàn),得到的馬鞭草中黃酮類化合物提取率分別為2.88%、2.87%、2.86%,進(jìn)而得出黃酮類化合物提取率的平均值為2.87%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.121%.由此可見(jiàn),經(jīng)過(guò)正交實(shí)驗(yàn)篩選出來(lái)的馬鞭草中總黃酮提取工藝條件是最優(yōu)的組合,實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠,具有良好的可操作性和重現(xiàn)性.

    2.3 鞭草中黃酮類化合物對(duì)羥自由基的抗氧化性

    近來(lái)大量研究成果表明,黃酮類化合物一方面通過(guò)其清除自由基的作用,直接抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、從而提高機(jī)體免疫力而實(shí)現(xiàn)抗癌、防癌的作用,另一方面,該類化合物還能有效地阻止脂質(zhì)過(guò)氧化引起的細(xì)胞破壞,起到天然抗氧化劑的功效[11].由圖6可以看出,馬鞭草中黃酮類化合物對(duì)羥自由基有很高的清除率,在一定范圍內(nèi)隨著黃酮質(zhì)量濃度的增大,清除率逐漸增大,最高可達(dá)90%以上,也即清除率與黃酮的用量存在著一定的量效關(guān)系.

    圖6 馬鞭草黃酮質(zhì)量濃度對(duì)羥基自由基清除率的影響

    圖7 馬鞭草黃酮質(zhì)量濃度對(duì)超氧陰離子自由基清除率和抑制率的影響

    2.4 馬鞭草中黃酮類化合物對(duì)超氧陰離子自由基的抗氧化性

    由圖7可以看出,在所選質(zhì)量濃度范圍內(nèi),馬鞭草黃酮對(duì)鄰苯三酚自氧化體系所產(chǎn)生的超氧陰離子自由基同樣具有良好的消除和抑制作用,且馬鞭草黃酮清除和抑制超氧陰離子自由基的能力隨著黃酮加入量的增加而明顯上升,即清除和抑制率與黃酮的用量存在著一定的量效關(guān)系.

    3 結(jié)論

    (1)超聲波提取方法具有操作簡(jiǎn)便、無(wú)需加熱、提取率高、速度快、效果好、提取物結(jié)構(gòu)不被破壞等優(yōu)點(diǎn),該研究通過(guò)超聲波輔助提取馬鞭草中總黃酮的單因素和正交試驗(yàn)確定了總黃酮提取的最優(yōu)條件:乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)70%、固液比1∶40(g/mL)、超聲功率500 W、超聲溫度70℃條件下提取20 min,在此條件下提取率可達(dá)2.87%.

    (2)抗氧化性實(shí)驗(yàn)表明,馬鞭草中黃酮類化合物具有良好的清除羥自由基、超氧陰離子自由基的能力,在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)出良好的量效關(guān)系,可作為食品功能因子,在醫(yī)藥和保健食品工業(yè)中有著很好的應(yīng)用前景.

    [1]張立衛(wèi),羅玉梅.馬鞭草臨床應(yīng)用近況[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2007,23(03):351-353.

    [2]陳改敏,張建業(yè),洪廣峰,等.馬鞭草中總黃酮的含量測(cè)定[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2006,23(8):798-799.

    [3]肖培根.新編中藥志(第三卷)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2002.32.

    [4]孟良玉,蘭桃芳,盧佳琨,等.敗醬草中黃酮類化合物的提取及其抗氧化活性[J].食品科學(xué),2010,31(24):214-217.

    [5]卞杰松,鄧斌,王存嫦,等.超聲波提取馬鞭草中黃酮類化合物的工藝研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(6):1420-1421.

    [6]嚴(yán)偉,李淑芬,田松江.超聲波協(xié)助提取技術(shù)[J].化工進(jìn)展,2002,21(9):469-651.

    [7]趙兵,王玉春,歐陽(yáng)潘,等.超聲波在植物提取中的應(yīng)用[J].中草藥,1999,30(9):1-3.

    [8]曹曉霞,李翠芹,王喆之.翅莖香青中黃酮類物質(zhì)的提取及其抗氧化性研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2008,8(4):692-694.

    [9]秦小明,林華娟,寧恩創(chuàng),等.金花茶葉水提物的抗氧化活性研究[J].食品科技,2008(2):189-191.

    [10]章愛(ài)華,鄧斌,蔣剛彪,等.馬齒莧黃酮提取液抗氧化活性的初步研究[J].食品科技,2008(8):140-145.

    [11]烏蘭格日樂(lè),白海泉,翁慧.黃酮抗氧化活性研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào),2008,23(3):277-280.

    猜你喜歡
    馬鞭草中總超氧
    檸檬馬鞭草不是馬鞭草
    新青年(2023年12期)2023-12-18 13:43:42
    馬鞭草
    正交試驗(yàn)優(yōu)化馬鞭草中馬鞭草苷和戟葉馬鞭草苷的水提取工藝
    Statistics
    China Textile(2017年10期)2017-12-25 12:43:00
    二氧化鈦光催化產(chǎn)生超氧自由基的形態(tài)分布研究
    熒光/化學(xué)發(fā)光探針成像檢測(cè)超氧陰離子自由基的研究進(jìn)展
    天冬中總氨基酸及多糖的提取工藝研究
    正交試驗(yàn)法優(yōu)化苦豆子總生物堿的超聲提取工藝
    大孔吸附樹(shù)脂分離純化蒲公英中總黃酮的工藝研究
    辣椒素對(duì)茶油的抗氧化與清除超氧陰離子自由基活性研究
    91精品国产国语对白视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 中文字幕高清在线视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产又爽黄色视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 精品少妇久久久久久888优播| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲熟女毛片儿| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 狂野欧美激情性xxxx| 国产极品天堂在线| 婷婷色麻豆天堂久久| 男女免费视频国产| 国产精品国产三级专区第一集| 两性夫妻黄色片| 极品人妻少妇av视频| 国产成人欧美在线观看 | 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲男人天堂网一区| 欧美人与善性xxx| 亚洲成人av在线免费| 永久免费av网站大全| 婷婷色综合大香蕉| 一区二区三区精品91| 久久久久久久久久久免费av| 色婷婷av一区二区三区视频| 看免费成人av毛片| 亚洲成人av在线免费| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲国产欧美在线一区| 多毛熟女@视频| 久久青草综合色| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 国产精品偷伦视频观看了| 最黄视频免费看| 大码成人一级视频| 久久97久久精品| 婷婷色综合www| 亚洲成人手机| www日本在线高清视频| 少妇人妻精品综合一区二区| 97在线人人人人妻| 国产精品久久久人人做人人爽| 在线精品无人区一区二区三| 伊人亚洲综合成人网| 久久人妻熟女aⅴ| 免费观看av网站的网址| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久久国产精品麻豆| 国产免费福利视频在线观看| 大香蕉久久成人网| 日韩精品有码人妻一区| 一级片'在线观看视频| 黄片播放在线免费| 日韩免费高清中文字幕av| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品久久久人人做人人爽| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产精品一国产av| 热re99久久国产66热| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美xxⅹ黑人| 日韩av免费高清视频| 五月天丁香电影| 久久狼人影院| 大香蕉久久成人网| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 欧美在线黄色| 国产黄色免费在线视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产在线一区二区三区精| 精品午夜福利在线看| 在现免费观看毛片| 久久亚洲国产成人精品v| 日韩大码丰满熟妇| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲精品在线美女| 女人久久www免费人成看片| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 9191精品国产免费久久| 久久婷婷青草| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产99久久九九免费精品| 男人舔女人的私密视频| 90打野战视频偷拍视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 老司机影院成人| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲美女黄色视频免费看| 天美传媒精品一区二区| 丁香六月天网| 日韩av不卡免费在线播放| av一本久久久久| 一级黄片播放器| 熟女av电影| 欧美精品一区二区免费开放| 9191精品国产免费久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品日本国产第一区| 婷婷色综合www| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美 日韩 精品 国产| 啦啦啦啦在线视频资源| 最近2019中文字幕mv第一页| 午夜影院在线不卡| 亚洲精品视频女| 青青草视频在线视频观看| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲成色77777| 99热网站在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 夫妻性生交免费视频一级片| 少妇被粗大猛烈的视频| 日本欧美国产在线视频| 熟女av电影| 男人操女人黄网站| 欧美人与性动交α欧美软件| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品女同一区二区软件| 九九爱精品视频在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲av电影在线进入| 色婷婷av一区二区三区视频| 久热爱精品视频在线9| 精品一区二区三卡| 少妇被粗大猛烈的视频| 午夜激情av网站| 深夜精品福利| 久久久久国产一级毛片高清牌| 美女国产高潮福利片在线看| 精品酒店卫生间| 亚洲国产av影院在线观看| 精品国产国语对白av| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 又大又爽又粗| 一区二区三区乱码不卡18| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 色视频在线一区二区三区| 99久久人妻综合| 亚洲av日韩在线播放| 欧美国产精品一级二级三级| 久久久久久人妻| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久久久久久免费视频了| 乱人伦中国视频| 国产福利在线免费观看视频| 国产成人av激情在线播放| 老熟女久久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 精品国产国语对白av| 一区福利在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| av卡一久久| 午夜影院在线不卡| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美97在线视频| 青草久久国产| 国产精品久久久久成人av| 欧美变态另类bdsm刘玥| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲国产最新在线播放| 免费看av在线观看网站| 九草在线视频观看| 又大又黄又爽视频免费| xxxhd国产人妻xxx| 极品少妇高潮喷水抽搐| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 咕卡用的链子| 国产精品二区激情视频| 国产男人的电影天堂91| 蜜桃国产av成人99| 亚洲一码二码三码区别大吗| av国产精品久久久久影院| 新久久久久国产一级毛片| 一级,二级,三级黄色视频| 一区二区三区四区激情视频| 久久婷婷青草| 操美女的视频在线观看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲av电影在线进入| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 热re99久久国产66热| 成人午夜精彩视频在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲成色77777| 丰满乱子伦码专区| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| netflix在线观看网站| h视频一区二区三区| 99香蕉大伊视频| 热99国产精品久久久久久7| a级片在线免费高清观看视频| 精品国产一区二区久久| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 操美女的视频在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久99一区二区三区| 免费观看性生交大片5| 美女午夜性视频免费| 午夜av观看不卡| 中文字幕精品免费在线观看视频| 色94色欧美一区二区| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲成人免费av在线播放| 日韩av在线免费看完整版不卡| 99久久综合免费| 免费看不卡的av| 99热网站在线观看| 免费看av在线观看网站| 男女边摸边吃奶| 中文字幕高清在线视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲国产av影院在线观看| 免费黄色在线免费观看| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产毛片在线视频| 777米奇影视久久| 久久久久久人人人人人| 18在线观看网站| av电影中文网址| 久久亚洲国产成人精品v| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲欧美激情在线| 精品国产露脸久久av麻豆| 中国国产av一级| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 在线天堂最新版资源| 国产极品天堂在线| 大片电影免费在线观看免费| 黄色毛片三级朝国网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 成人免费观看视频高清| 成人黄色视频免费在线看| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 老司机影院毛片| 狂野欧美激情性xxxx| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲熟女精品中文字幕| 人人澡人人妻人| 一级,二级,三级黄色视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 亚洲精华国产精华液的使用体验| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产黄色免费在线视频| 在线观看国产h片| 免费黄色在线免费观看| 成年动漫av网址| 美女大奶头黄色视频| 2018国产大陆天天弄谢| 下体分泌物呈黄色| 午夜福利乱码中文字幕| 久久久亚洲精品成人影院| 激情五月婷婷亚洲| 最近的中文字幕免费完整| 1024香蕉在线观看| 大香蕉久久成人网| 久久青草综合色| 在线观看www视频免费| 黄色一级大片看看| 亚洲美女视频黄频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲七黄色美女视频| 777米奇影视久久| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久影院123| 妹子高潮喷水视频| 久久久国产精品麻豆| 色吧在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 日本欧美视频一区| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产高清国产精品国产三级| 热re99久久精品国产66热6| 99国产精品免费福利视频| 亚洲国产av新网站| 精品久久久精品久久久| 一级爰片在线观看| 国产av码专区亚洲av| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲伊人色综图| 国产男女超爽视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 曰老女人黄片| 1024香蕉在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 好男人视频免费观看在线| 国产又爽黄色视频| 老鸭窝网址在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 国产精品一二三区在线看| 99re6热这里在线精品视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 欧美变态另类bdsm刘玥| 视频在线观看一区二区三区| 多毛熟女@视频| 美女视频免费永久观看网站| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产麻豆69| 9热在线视频观看99| 亚洲国产看品久久| 久久免费观看电影| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 国产高清国产精品国产三级| 久久精品久久久久久久性| 国产在线免费精品| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲精品日韩在线中文字幕| 午夜久久久在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 天天添夜夜摸| 欧美中文综合在线视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久精品人人爽人人爽视色| 精品午夜福利在线看| 久久精品久久久久久久性| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 一级片免费观看大全| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲图色成人| 人成视频在线观看免费观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 欧美日韩亚洲高清精品| 午夜福利免费观看在线| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 一二三四在线观看免费中文在| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 免费观看a级毛片全部| 人妻人人澡人人爽人人| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 我要看黄色一级片免费的| 国产av一区二区精品久久| 亚洲国产av新网站| 最近2019中文字幕mv第一页| 晚上一个人看的免费电影| 国产日韩欧美视频二区| 欧美日本中文国产一区发布| 制服诱惑二区| 国产精品av久久久久免费| 亚洲综合色网址| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产熟女欧美一区二区| 两个人看的免费小视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产成人精品无人区| 天堂8中文在线网| 亚洲国产成人一精品久久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产成人av激情在线播放| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 老鸭窝网址在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 999久久久国产精品视频| 欧美xxⅹ黑人| 我的亚洲天堂| 国产色婷婷99| 亚洲精品,欧美精品| av电影中文网址| 尾随美女入室| 一级毛片 在线播放| 亚洲熟女毛片儿| 国产av精品麻豆| 欧美少妇被猛烈插入视频| 韩国精品一区二区三区| 国产精品 国内视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 秋霞伦理黄片| 欧美日韩一级在线毛片| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久久精品免费免费高清| 精品久久久久久电影网| 亚洲精品在线美女| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 综合色丁香网| 九九爱精品视频在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产在视频线精品| 国产一卡二卡三卡精品 | 国产av国产精品国产| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产亚洲欧美精品永久| 成年av动漫网址| 超色免费av| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲男人天堂网一区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产深夜福利视频在线观看| 国产极品天堂在线| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 精品人妻在线不人妻| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 久久久久久久国产电影| 这个男人来自地球电影免费观看 | 日韩人妻精品一区2区三区| 我要看黄色一级片免费的| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 极品少妇高潮喷水抽搐| 69精品国产乱码久久久| 秋霞在线观看毛片| 天天操日日干夜夜撸| 咕卡用的链子| 岛国毛片在线播放| 国产人伦9x9x在线观看| 日韩电影二区| 亚洲精品乱久久久久久| 免费黄网站久久成人精品| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲精品日本国产第一区| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产1区2区3区精品| 亚洲男人天堂网一区| 少妇人妻 视频| 国产亚洲一区二区精品| 日韩av不卡免费在线播放| a级毛片黄视频| 免费观看人在逋| 日韩欧美精品免费久久| 成年人免费黄色播放视频| 人人澡人人妻人| 国产一卡二卡三卡精品 | 秋霞在线观看毛片| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲欧洲国产日韩| 久久韩国三级中文字幕| 深夜精品福利| 在线观看国产h片| 青春草视频在线免费观看| 国产97色在线日韩免费| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 热re99久久国产66热| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产av一区二区精品久久| 久久久国产一区二区| 又黄又粗又硬又大视频| 不卡av一区二区三区| 免费高清在线观看日韩| 亚洲,一卡二卡三卡| 不卡视频在线观看欧美| 国产人伦9x9x在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日本wwww免费看| 18禁观看日本| 免费在线观看黄色视频的| 如何舔出高潮| av在线观看视频网站免费| 久热爱精品视频在线9| 永久免费av网站大全| 不卡av一区二区三区| 免费观看av网站的网址| 我要看黄色一级片免费的| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产在视频线精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 天天添夜夜摸| 亚洲成人手机| 国产欧美亚洲国产| 久久97久久精品| 国产在线免费精品| 卡戴珊不雅视频在线播放| 捣出白浆h1v1| 日本av手机在线免费观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 美女中出高潮动态图| 色综合欧美亚洲国产小说| 美女中出高潮动态图| 久久久国产一区二区| 成年动漫av网址| 亚洲欧洲日产国产| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲国产av新网站| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲精品国产av蜜桃| bbb黄色大片| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 日韩制服骚丝袜av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 日韩制服骚丝袜av| 日日啪夜夜爽| 国产97色在线日韩免费| 少妇精品久久久久久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲免费av在线视频| 精品亚洲成国产av| xxx大片免费视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 在线观看三级黄色| 日韩精品免费视频一区二区三区| xxx大片免费视频| 久久婷婷青草| 精品一区在线观看国产| 如何舔出高潮| 亚洲天堂av无毛| 亚洲国产成人一精品久久久| 99热国产这里只有精品6| 韩国精品一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产人伦9x9x在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产免费视频播放在线视频| 成年人免费黄色播放视频| 国产99久久九九免费精品| 岛国毛片在线播放| av国产久精品久网站免费入址| 国产成人精品久久二区二区91 | 亚洲精品美女久久av网站| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲七黄色美女视频| 久久人人爽人人片av| 日本午夜av视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲综合色网址| 熟女av电影| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 成年美女黄网站色视频大全免费| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产熟女午夜一区二区三区| av在线app专区| 男女边吃奶边做爰视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 99久久99久久久精品蜜桃| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲五月色婷婷综合| 制服诱惑二区| 国产深夜福利视频在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲成人国产一区在线观看 | 97精品久久久久久久久久精品| 成人黄色视频免费在线看| 日日啪夜夜爽| 国产精品三级大全| 日本黄色日本黄色录像| 婷婷色综合www| 亚洲精品aⅴ在线观看| 另类精品久久| e午夜精品久久久久久久| 久久久精品免费免费高清| 免费观看性生交大片5| 在线天堂最新版资源| 97精品久久久久久久久久精品| 美女主播在线视频| tube8黄色片| 制服人妻中文乱码| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久久久网色| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 中文字幕色久视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 一级黄片播放器| 少妇人妻 视频| avwww免费| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲天堂av无毛| 无遮挡黄片免费观看| 国产精品一区二区在线不卡| 90打野战视频偷拍视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美精品一区二区免费开放| 极品少妇高潮喷水抽搐| 激情五月婷婷亚洲| videosex国产| 欧美日韩精品网址| 操出白浆在线播放| 青春草视频在线免费观看| xxxhd国产人妻xxx| 国产免费福利视频在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产97色在线日韩免费| 午夜免费男女啪啪视频观看| av卡一久久| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美成人精品欧美一级黄| av又黄又爽大尺度在线免费看| 人妻一区二区av| 一本大道久久a久久精品| 国产精品偷伦视频观看了| videos熟女内射| 国产片内射在线|