高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實驗教學(xué)中應(yīng)用初探

韓忠耀　鄧先擴　劉承貴　唐方方　王傳明

摘 要 目的：為解決在《天然藥物化學(xué)》實驗課程中對目標(biāo)單體化學(xué)成分純度判斷不精準(zhǔn)及在提取、分離、純化等過程不能對目標(biāo)分離成分純度的動態(tài)變化監(jiān)控等問題，加強與提高學(xué)生對現(xiàn)代科學(xué)儀器的實際操作能力，將高效液相應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實驗課程中。方法：結(jié)合黔南民族醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥學(xué)專業(yè)的實際情況，通過學(xué)生分組實驗等方式探索將高效液相色譜儀應(yīng)用于《天然藥物化學(xué)》實驗課堂中。結(jié)果：解決了傳統(tǒng)實驗課程中用薄層層析法與顯色反應(yīng)等不能監(jiān)控天然藥物化學(xué)成分在提取、分離、純化過程中目標(biāo)單體成分純度的動態(tài)變化過程及最終目標(biāo)單體化學(xué)成分具體的純度的問題。結(jié)論：高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實驗課程中的應(yīng)用，能對目標(biāo)單體成分進行純度精準(zhǔn)判斷以及對目標(biāo)分離成分純度的進行動態(tài)監(jiān)控，并能增強學(xué)生對現(xiàn)代科學(xué)儀器的操作能力，但實驗課程中仍存在一些問題，須進一步增強該課程實驗教學(xué)改革。

關(guān)鍵詞 天然藥物化學(xué) 實驗教學(xué) 高效液相 實驗改革

《天然藥物化學(xué)》實驗在實際開展過程中，通常是針對某一個天然藥物中某一個或幾個單體化學(xué)成分為目標(biāo)進行實驗設(shè)計，通過提取、分離、純化等手段，得到目標(biāo)單體化學(xué)成分，最后通常通過薄層層析方法與顯色反應(yīng)等手段對目標(biāo)單體化學(xué)成分進行判斷，但是在實驗過程中，對得到的目標(biāo)單體化學(xué)成分的進行純度判斷始終是個問題，例如：通過薄層層析技術(shù)并結(jié)合對照品比較法，雖然能夠?qū)Φ玫降哪繕?biāo)單體化學(xué)成分的純度進行定性判斷，但是，具體純度是多少呢？為解決諸類問題，將HPLC技術(shù)，即高效液相色譜技術(shù)應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實驗課程中，查閱相關(guān)文獻，未見關(guān)于高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實驗教學(xué)改革中的應(yīng)用的相關(guān)報道。本文通過將高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實驗教學(xué)中進行嘗試，探索實驗過程中對目標(biāo)單體化學(xué)成分具體純度的判斷以及天然藥物在提取、分離及純化等過程中對目標(biāo)單體化學(xué)成分純度進行動態(tài)監(jiān)控等問題的解決方法。

1高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實驗教學(xué)中應(yīng)用的必要性

HPLC技術(shù)，即高效液相色譜技術(shù)是近年來發(fā)展較快、應(yīng)用較廣的一門現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，主要用于天然藥物、中藥及民族藥的含量測定、質(zhì)量控制、定性定量分析等。

通常，該項技術(shù)主要應(yīng)用于《藥物分析》、《中藥制劑分析》、《中藥分析》、《分析化學(xué)》等課程的實驗實踐教學(xué)過程中，較少應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實驗教學(xué)過程中，但是，近年來，隨著天然藥物化學(xué)學(xué)科的發(fā)展、高校職業(yè)教育及適應(yīng)生產(chǎn)與工業(yè)實際的需要，將高效液相色譜儀應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實驗教學(xué)中越來越具有必要性，這是適應(yīng)高校實驗課程多樣化、應(yīng)用型及實驗教學(xué)改進的要求。

將高效液相色譜儀應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實驗教學(xué)過程中也是適應(yīng)現(xiàn)代醫(yī)藥高等院校教學(xué)的需要，并能與現(xiàn)代企業(yè)實踐緊密結(jié)合起來，為此學(xué)校于2013年采購了多種現(xiàn)代化實驗設(shè)施設(shè)備，如Agilent 1260型高效液相色譜儀及相關(guān)配件二極管陣列檢測器、在線真空脫氣機、四元梯度泵等，這些硬件設(shè)施設(shè)備的完善，為將高效液相色譜技術(shù)應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實驗教學(xué)中提供物質(zhì)保障。

2 高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實驗教學(xué)中應(yīng)用探索

2.1 知識準(zhǔn)備

對《天然藥物化學(xué)》理論教學(xué)過程中加強了高效液相色譜儀的應(yīng)用的學(xué)習(xí)和講解，通過在理論教學(xué)中應(yīng)用講授法、案列分析法、視頻播放、Flash展示、小組討論等方法，學(xué)生基本掌握了該儀器的相關(guān)知識。

2.2 實驗的選擇、實驗設(shè)計及分組

黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)專業(yè)《天然藥物化學(xué)》實驗共安排五個實驗，以“黃連中鹽酸小檗堿的提取、分離與鑒定”為例，按照實驗講義，學(xué)生分小組分別開展實驗。將高效液相色譜技術(shù)分別對藥材粗粉浸泡液、滲漉液、過濾液（石灰乳調(diào)PH后）、濃鹽酸調(diào)試液、鹽酸小檗堿粗品（鹽析純化）、純品共六個操作過程中鹽酸小檗堿進行純度測定，進行全程動態(tài)監(jiān)控。實驗的開展，首先是按照實驗教材全程完成傳統(tǒng)實驗的基礎(chǔ)上，再利用實驗過程中比較耗時的滲漉過程及整個實驗結(jié)束后，離線開展高效液相動態(tài)全程監(jiān)控檢測的相關(guān)操作。

2.3 授課教師示范引導(dǎo)

實驗前準(zhǔn)備：對高效液相色譜儀使用前對照品溶液的制備、供試品溶液的制備、濾膜、濾頭、過濾器及流動相的制備等，邊操作演示邊介紹，讓學(xué)生熟識使用精密儀器高效液相色譜儀前的一些操作要領(lǐng)及注意事項。

在開展實驗的過程中，教師首先介紹高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)、基本原理、操作要領(lǐng)及操作時注意事項。然后答疑，對學(xué)生的疑問進行解答。最后，以對照品溶液的檢測為例進行全程演示。

通過教師演示，讓學(xué)生熟識并掌握高效液相色譜儀的各種操作要領(lǐng)及注意事項，為學(xué)生實際動手操作奠定基礎(chǔ)。

2.4 學(xué)生實際操作

教師演示后，學(xué)生以小組為單位，按照實驗設(shè)計分別收集藥材粗粉浸泡液、滲漉液等六個操作過程中間體適量及純品適量，然后按照供試品溶液的制備方法，進行處理，分別用0.45€%em 微孔濾膜濾過到液相小瓶、編號，即得各操作過程中間體供試品溶液及純品的供試品溶液。然后與對照品溶液，分別加入到高效液相進樣區(qū)相應(yīng)位置，對號入座。

2.5 相關(guān)保障措施

根據(jù)檢測數(shù)量與檢測時間等，由于儀器設(shè)備的限制，為保證實驗的順利開展，分小組開展實驗，同時，保證流動相的量要高于實際用量，根據(jù)預(yù)測時間，分時間段依次進行檢測。每小組檢測結(jié)束后，離線方式打開數(shù)據(jù)處理軟件，分別查看藥材粗粉浸泡液、滲漉液等六個操作過程鹽酸小檗堿的純度，記錄在實驗記錄中。用EXCEL軟件或SPSS 18.0軟件繪制不同階段鹽酸小檗堿的純度動態(tài)變化曲線數(shù)據(jù)圖。

3 結(jié)果與討論

將高效液相色譜儀應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實驗課程中，這種探索的結(jié)果是成功的，解決了學(xué)生實驗操作中對純度的精準(zhǔn)檢測，動態(tài)監(jiān)控了目標(biāo)化學(xué)成分純度在提取、分離、純化等各階段動態(tài)變化，同時，提高了學(xué)生的動手操作能力，但是，在實驗的開展過程中，也存在一定的問題，如儀器設(shè)備少，不能滿足實際教學(xué)的需要，整個實驗開展下來比較費時，同時，在精密儀器室開展實驗，缺少專業(yè)實驗員，建議設(shè)立專業(yè)實驗員教學(xué)崗位。

（通訊作者：王傳明）

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