楓糖的遺傳毒性及亞慢性毒性試驗(yàn)研究

宋昕恬，孟令儀，張晶瑩，周博宇，張琨

（1.吉林省疾病預(yù)防控制中心毒理所，吉林長春130062；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林長春130000）

楓糖的遺傳毒性及亞慢性毒性試驗(yàn)研究

宋昕恬1，孟令儀1，張晶瑩1，周博宇1，張琨2，*

（1.吉林省疾病預(yù)防控制中心毒理所，吉林長春130062；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林長春130000）

評(píng)價(jià)楓糖的食用安全性。急性毒性試驗(yàn)，采用限量法，將小鼠禁食（不禁水）16 h后，經(jīng)口灌胃給予受試物，劑量為15.0 g/kgBW，灌胃后觀察14 d；細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)，設(shè)5 000、1 000、200、40、8μg/皿5個(gè)劑量組，及未處理、溶劑、陽性對(duì)照組，采用平板摻入法，對(duì)有組氨酸營養(yǎng)缺陷的5株鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535進(jìn)行回變菌落計(jì)數(shù)；哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)，設(shè)10.0、5.0、2.5 g/kgBW三個(gè)劑量組，環(huán)磷酰胺及陰性對(duì)照組，采用間隔24h兩次經(jīng)口灌胃法進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)數(shù)骨髓嗜多染紅細(xì)胞在總紅細(xì)胞的比例及含微核嗜多染紅細(xì)胞比率；90天喂養(yǎng)試驗(yàn)，設(shè)8.0、6.0、4.0g/kg BW三個(gè)劑量組，摻入飼料喂養(yǎng)90 d，空白對(duì)照組給與正常飼料，觀察體重、食物利用率、血常規(guī)、血生化指標(biāo)及病理檢測。楓糖細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)、骨髓細(xì)胞微核結(jié)果均為陰性，90天喂養(yǎng)試驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較無顯著性差異。楓糖在一定劑量范圍內(nèi)通過系統(tǒng)的體內(nèi)和體外試驗(yàn)驗(yàn)證其具有食用安全性。

楓糖；大鼠；遺傳毒性；亞慢性毒性

在楓樹的樹液中可提煉出一種糖分，被當(dāng)?shù)厝朔Q之為楓糖，用它替代蔗糖加工食品，既增加了礦物質(zhì)又降低了熱量，并且它富含的酚苷成分有抗腫瘤作用，現(xiàn)已成為食品加工原料的新寵[1-2]。有研究表明深色楓糖含有的有益成份更適合應(yīng)用于開發(fā)功能食品及食品添加劑[3]。但是對(duì)于楓糖的遺傳毒性及亞慢性毒性未見相關(guān)報(bào)道，并且，根據(jù)《衛(wèi)生部關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號(hào)》文件，它并不在既是食品又是藥品的物品名單及可用于保健食品的物品名單中。衛(wèi)生部批準(zhǔn)的新資源食品目錄中，楓糖也未獲得批準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序2014及2003版[4-8]，對(duì)其進(jìn)行了細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)、哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)及90天喂養(yǎng)試驗(yàn)。

1材料和方法

1.1試劑與儀器

楓糖（粉末狀）：由創(chuàng)喜（北京）醫(yī)藥科技有限公司提供；GR60DA型立式壓力蒸汽滅菌儀：致微（廈門）儀器有限公司產(chǎn)；DH-500A型電熱恒溫培養(yǎng)箱：上?；|試驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)；SYSMEX-XT2000i型全自動(dòng)血液分析儀：日本；血常規(guī)檢測試劑盒：由上?？迫A東菱診斷用品有限公司提供；TBA-120FR型全自動(dòng)生化分析儀：日本東芝；血生化檢測試劑：由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司提供；環(huán)磷酰胺：由FLUKA公司提供；酪蛋白（純度為98.0%）：由南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)ICR小鼠，雌、雄各25只，體重25.0g～30.0g，SPF級(jí)Wistar大鼠，雌雄各40只，體重65.0 g～85.0 g，由長春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，批準(zhǔn)證號(hào)為SCXK-（吉）2011-0004。本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證，吉?jiǎng)釉O(shè)字10-1005；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)，SYXK-（吉）2010-0011；溫度20℃～22℃、濕度55%～65%。

1.3方法

1.3.1急性毒性試驗(yàn)

采用限量法，將小鼠禁食（不禁水）16 h后，按體重要求選取雌、雄各10只，經(jīng)口灌胃給予受試物，劑量為15.0 g/kg BW（取37.5 g樣品溶于蒸餾水至50.0mL混勻達(dá)可灌胃最大濃度75%，灌胃1次，灌胃量0.2mL/ 10 g BW）。觀察14 d。主要觀察小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)及軀體運(yùn)動(dòng)有無改變姿勢、叫聲異常、運(yùn)動(dòng)失調(diào)等；自主神經(jīng)有無瞳孔放大或縮小、流涎、流淚等；呼吸系統(tǒng)有無流鼻涕、潮式呼吸等；胃腸系統(tǒng)有無氣脹、腹瀉或便秘等。并記錄出現(xiàn)中毒癥狀的時(shí)間。如果動(dòng)物有死亡，記錄死亡數(shù)、死亡時(shí)間，對(duì)全部動(dòng)物做大體解剖，并在第14天稱量體重，計(jì)算增重。

1.3.2細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)

選取TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535五種組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株。在本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過鑒定后，生物學(xué)性狀均符合要求。測試菌液濃度大于等于1×109活菌數(shù)/mL。試驗(yàn)劑量分為5 000、 1 000、200、40、8μg/皿5組，取5.0 g楓糖加蒸餾水至100mL，均勻混合后濃度為5 000μg/皿，其余4組劑量均按照1/5倍比遞減稀釋；受試液經(jīng)過20min，121℃，0.103MPa高壓滅菌后使用；另設(shè)陽性對(duì)照組、溶劑對(duì)照組及未處理對(duì)照組。在頂層瓊脂中加入試驗(yàn)菌株增菌液、楓糖溶液各0.1mL，代謝活化時(shí)加入代謝活化系統(tǒng)S9混合液0.5mL并混合均勻后倒入底層培養(yǎng)基平板。37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)每皿回變菌落數(shù)。如果受試物回變菌落數(shù)是自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍以上，并具有劑量--反應(yīng)關(guān)系可定為陽性。每個(gè)劑量組做3個(gè)平行板，并在相同實(shí)驗(yàn)條件下重復(fù)做2次，最后分別統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

1.3.3哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

設(shè)10.0、5.0、2.5 g/kg BW三個(gè)劑量組（分別取25.00、12.50、6.25 g受試物溶于蒸餾水至50mL混勻），另設(shè)陰性對(duì)照組（蒸餾水）、陽性對(duì)照組（環(huán)磷酰胺40mg/kg BW：取100mg環(huán)磷酰胺加入生理鹽水至50 mL混勻），選取兩次經(jīng)口灌胃間隔24 h進(jìn)行的試驗(yàn)方法，灌胃量為0.2mL/10 g BW。在末次灌胃6 h后，頸椎脫臼處死小鼠，取股骨擠出骨髓液與小牛血清混合常規(guī)涂片，用甲醇固定后，放入Giemsa染液中染色。用光學(xué)顯微鏡觀察每只小鼠骨髓紅細(xì)胞200個(gè)，計(jì)數(shù)嗜多染紅細(xì)胞所占的比例；觀察嗜多染紅細(xì)胞（PCE）2 000個(gè)，計(jì)數(shù)微核嗜多染紅細(xì)胞頻率，即含微核細(xì)胞率，以千分率表示。

1.3.4 90天喂養(yǎng)試驗(yàn)

購買動(dòng)物后在本實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)觀察3 d，隨機(jī)分為3個(gè)不同劑量試驗(yàn)組及對(duì)照組，每組20只雌雄各半。楓糖成人每日推薦攝入量為2.15 g/60 kg BW，高、中、低劑量組攝入量為8.00、6.00、4.00 g/kg BW，分別相當(dāng)于成人攝入量的223、167、112倍。將3個(gè)試驗(yàn)組的楓糖按計(jì)量均勻摻入基礎(chǔ)飼料中，含量依次為10.0%、7.5%、5.0%（受試樣品分3次配制，每次20 kg）。對(duì)照組給與基礎(chǔ)飼料。大鼠飼料攝入量按體重8%計(jì)算，單籠飼養(yǎng)，自由飲食，記錄大鼠體重、進(jìn)食量，連續(xù)觀察90 d。高、中、低劑量組受試物中補(bǔ)充一定量的酪蛋白，分別為478、358、239 g，使得高、中、低劑量組蛋白含量和對(duì)照組一致，同為18.9%。觀察記錄大鼠一般行為表現(xiàn)、中毒癥狀及死亡情況，每周稱取體重1次、攝入量2次并計(jì)算每周食物利用率及總食物利用率。試驗(yàn)中期尾靜脈采血，檢測血液學(xué)及血生化指標(biāo)，包括RBC、Hb、WBC及其五分類，ALT、AST、UREA、Cr、Glu、TP、Alb、TC、TG。試驗(yàn)第90天禁食16 h，于試驗(yàn)91天稱重，按照5.0mL/kg BW腹腔注射1%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液麻醉后，下腔靜脈采血，檢測血液學(xué)及血生化指標(biāo)。對(duì)大鼠進(jìn)行大體解剖，稱取臟器絕對(duì)重量計(jì)算相對(duì)重量即臟體比，并對(duì)肝、脾、腎、胃、十二指腸、睪丸或卵巢進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，方差齊時(shí)，采用LSD法；方差不齊時(shí)，采用Tamhane’s法對(duì)各組間進(jìn)行兩兩比較。

2結(jié)果

2.1急性毒性試驗(yàn)

試驗(yàn)期間，每只小鼠均未見中毒癥狀，死亡數(shù)為零，雌、雄性小鼠：限量法LD50＞15.0 g/kg BW，根據(jù)急性毒性半數(shù)致死劑量分級(jí)屬無毒級(jí)。

2.2細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)

將楓糖在鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535進(jìn)行平板摻入試驗(yàn)，結(jié)果見表2和表3。

表1 第一次細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)結(jié)果（±s）Table1 Resultsof the firstbacterial reversemutation test（±s）

表1 第一次細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)結(jié)果（±s）Table1 Resultsof the firstbacterial reversemutation test（±s）

TA97 TA98 TA100 TA102 TA1535不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S95 000 124.3±7.2 117.3±10.0 32.3±5.0 31.3±4.0 156.0±4.4 165.0±5.2 282.3±7.5 277.0±7.9 20.3±6.1 22.0±4.4 1 000 114.3±11.0 123.3±9.0 37.0±4.4 32.3±5.8 154.3±9.3 164.3±9.1 268.3±7.0 278.3±11.9 14.3±3.8 21.0±4.4 200 116.0±6.6 117.3±11.0 36.0±2.0 36.3±4.0 159.0±9.5 157.0±13.9 286.3±5.1 282.7±8.1 17.3±4.0 19.3±4.0 40 121.7±8.5 121.6±6.5 36.7±3.1 35.7±4.0 170.7±4.5 166.0±11.1 269.7±5.5 269.0±6.6 20.0±4.6 21.7±5.1 8 120.0±8.0 126.3±6.5 33.7±2.1 34.3±5.1 160.3±13.3 162.3±7.1 276.3±13.5 277.3±11.2 18.3±3.2 21.3±6.7未處理對(duì)照124.7±4.0 120.7±9.3 34.0±3.6 35.0±6.1 163.7±10.3 170.0±4.6 289.7±5.1 282.0±8.2 22.7±2.3 18.7±2.9溶劑對(duì)照115.0±7.0 125.7±9.3 37.7±2.5 31.0±6.1 156.7±11.0 166.7±13.7 278.0±9.5 274.3±13.6 23.7±8.1 19.7±8.0陽性對(duì)照1 274.7±99.3 1 349.0±80.3 1 900.3±107.9 2 031.7±92.4 1 200.3±66.3 1 363.7±50.3 1 180.7±37.6 1 005.0±48.8 450.7±72.5 228.7±63.7劑量/（μg/皿）

表2 第二次細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)結(jié)果（±s）Table2 Resultsof second bacterial recovery test（±s）

表2 第二次細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)結(jié)果（±s）Table2 Resultsof second bacterial recovery test（±s）

TA97 TA98 TA100 TA102 TA1535不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S95000 122.7±4.6 120.7±11.4 35.7±4.2 36.7±3.2 157.7±7.0 162.7±6.0 285.0±7.2 268.7±8.1 15.0±5.6 23.7±7.4 1000 116.0±9.5 118.7±12.1 34.3±5.1 36.0±6.1 162.3±11.0 169.3±7.0 269.3±10.0 277.3±11.9 16.0±7.2 20.3±4.5 200 113.3±9.1 121.7±9.3 30.7±2.5 38.3±2.5 163.3±6.0 157.3±8.4 276.7±10.6 285.7±6.8 21.0±7.9 24.3±6.4 40 120.7±9.5 119.7±11.4 34.0±3.6 36.3±5.0 161.0±12.1 158.3±8.4 278.0±9.2 280.0±14.4 18.0±3.6 19.7±4.7 8 118.0±12.1 124.7±4.0 36.7±4.0 30.7±2.5 164.3±8.5 162.0±10.8 269.0±11.5 272.0±8.9 22.7±5.1 25.0±5.6未處理對(duì)照120.0±6.2 126.3±5.9 35.7±5.1 32.0±3.0 156.0±7.0 165.3±4.2 270.3±9.3 271.0±10.4 19.3±3.1 16.7±2.9溶劑對(duì)照116.0±11.8 121.0±8.7 34.7±2.9 35.3±3.2 158.7±8.6 162.0±6.0 275.0±6.0 283.7±5.0 24.7±3.8 19.0±4.4陽性對(duì)照1 360.3±102.3 1 406.0±144.0 1 882.3±65.1 2 085.7±33.5 1 178.3±128.4 1 277.3±97.9 1 237.7±73.1 1 041.0±61.5 475.7±35.2 256.3±54.5劑量/（μg/皿）

在加和不加S9混合液的情況下，8μg/皿～5 000μg/皿5個(gè)劑量組均未引起試驗(yàn)菌株的回復(fù)突變菌落數(shù)顯著增加，判斷細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)結(jié)果為陰性。

2.3哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

10.0、5.0、2.5 g/kg BW三個(gè)劑量組微核細(xì)胞率與陰性對(duì)照組比較差異無顯著性（P＞0.05）；陽性對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜0.01），各劑量組PCE/NCE比值均不少于對(duì)照組的20%。提示楓糖骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果陰性，各組動(dòng)物未見細(xì)胞毒性作用。

2.4 90天喂養(yǎng)試驗(yàn)

2.4.1一般情況觀察及對(duì)體重、飲食的影響

試驗(yàn)期間大鼠生長狀態(tài)良好，飲食及日常行為表現(xiàn)未見異常，未見中毒及死亡。各組間體重、飼料攝入量、食物利用率及大鼠臟體比未見顯著性差異（P＞0.05）。

2.4.2對(duì)血液學(xué)及各項(xiàng)生化指標(biāo)的影響

90天喂養(yǎng)試驗(yàn)中期及末期分別對(duì)大鼠的血紅蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞及白細(xì)胞的五分類進(jìn)行檢測；同時(shí)還對(duì)大鼠的九項(xiàng)生化指標(biāo)（ALT、AST、BUN、Cr、GLU、TP、ALB、TC、TG）進(jìn)行檢測。各項(xiàng)指標(biāo)均在本實(shí)驗(yàn)室歷史正常值范圍內(nèi)，與對(duì)照組比較，未見顯著性差異（P＞0.05）。部分檢測結(jié)果見表3。

2.4.3病理學(xué)檢查結(jié)果

90天喂養(yǎng)試驗(yàn)病理學(xué)檢查結(jié)果見圖1～圖12。

表3 90天喂養(yǎng)試驗(yàn)中期及末期雄性血液學(xué)檢查結(jié)果（±s）Table3 Resultsof 90-day feeding test in them id and late-stagemalehem atology test（±s）

表3 90天喂養(yǎng)試驗(yàn)中期及末期雄性血液學(xué)檢查結(jié)果（±s）Table3 Resultsof 90-day feeding test in them id and late-stagemalehem atology test（±s）

白細(xì)胞分類/% LYMP MONO NEUT EO BASO中期雄性對(duì)照組10 147.20±5.75 8.03±0.29 5.13±0.68 79.25±2.39 2.63±0.49 17.04±2.08 1.08±0.30 0.00±0.00高劑量組10 143.20±5.39 7.76±0.29 5.88±0.78 79.23±3.06 2.77±0.50 16.84±1.25 1.15±0.28 0.01±0.03中劑量組10 143.90±7.49 7.87±0.39 5.94±1.00 79.56±3.00 2.91±0.98 16.48±1.33 1.01±0.33 0.04±0.07低劑量組10 145.80±6.27 7.98±0.30 5.30±0.98 78.82±3.44 2.62±0.33 17.55±1.54 1.00±0.33 0.01±0.03末期雄性對(duì)照組10 145.10±6.54 8.36±0.55 5.05±0.70 78.28±2.24 3.10±0.85 17.47±1.70 1.15±0.31 0.00±0.00高劑量組10 142.00±5.70 8.18±0.59 5.30±0.73 77.28±2.81 3.89±1.10 17.37±1.40 1.32±0.36 0.04±0.08中劑量組10 143.90±5.65 8.30±0.43 5.16±0.79 78.36±2.31 3.89±1.18 16.38±2.01 1.37±0.28 0.00±0.00低劑量組10 144.80±6.14 8.22±0.61 5.22±0.93 78.49±3.17 3.16±0.85 17.21±1.98 1.14±0.21 0.00±0.00性別劑量組動(dòng)物數(shù)/只血紅蛋白/（g/L）紅細(xì)胞/（×1012/L）白細(xì)胞/（×109/L）

表4 90天喂養(yǎng)試驗(yàn)中期及末期雄性生化檢驗(yàn)結(jié)果（±s）Table4 Resu ltsof 90-day feeding test in them id and late-stagemalebiochem ical test（±s）

表4 90天喂養(yǎng)試驗(yàn)中期及末期雄性生化檢驗(yàn)結(jié)果（±s）Table4 Resu ltsof 90-day feeding test in them id and late-stagemalebiochem ical test（±s）

TG/（mmol/L）中期雄性對(duì)照組10 29.4±3.9 90.7±8.2 5.13±0.77 56.9±4.4 5.37±1.02 56.2±3.6 32.5±1.9 1.83±0.17 0.52±0.09高劑量組10 30.5±5.5 91.2±9.0 5.13±0.77 56.4±5.1 5.94±0.92 57.5±4.2 32.7±2.2 1.85±0.17 0.56±0.07中劑量組10 28.9±4.4 88.8±7.5 5.53±0.65 55.6±4.6 5.80±0.80 55.8±4.5 32.6±2.4 1.83±0.14 0.54±0.10低劑量組10 28.4±5.7 90.2±8.2 5.45±0.79 57.3±4.2 5.74±0.67 56.8±4.5 31.9±1.9 1.86±0.12 0.56±0.10末期雄性對(duì)照組10 30.3±3.6 96.3±8.4 5.76±0.87 60.5±3.5 6.26±0.78 60.6±3.7 36.0±2.0 2.17±0.13 0.62±0.11高劑量組10 31.2±3.3 102.2±11.3 5.97±0.93 61.2±3.0 6.02±1.07 61.9±3.8 37.0±2.0 2.17±0.17 0.70±0.07中劑量組10 30.4±3.9 99.6±11.3 5.64±0.84 62.8±3.3 6.06±0.97 61.8±3.3 36.6±2.3 2.22±0.16 0.64±0.11低劑量組10 29.5±4.0 102.9±8.1 5.73±0.73 59.5±3.0 6.21±0.72 60.6±3.9 36.3±2.6 2.15±0.15 0.67±0.07性別劑量組動(dòng)物數(shù)/只（U/L）AST/（U/L）UREA/（mmol/L）ALT/Cr/（μmol/L）（mmol/L）TP/（g/L）Alb/（g/L）TC/（mmol/L）Glu/

圖1 肝臟（對(duì)照組）Fig.1 Liver（controlgroup）

圖2 肝臟（高劑量組）Fig.2 Liver（high dosegroup）

圖3 脾臟（對(duì)照組）Fig.3 Sp leen（controlgroup）

圖4 脾臟（高劑量組）Fig.4 Spleen（high dosegroup）

圖5 胃（對(duì)照組）Fig.5 Stomach（controlgroup）

圖6 胃（高劑量組）Fig.6 Stomach（high dosegroup）

圖7 腎臟（對(duì)照組）Fig.7 K idney（controlgroup）

圖8 腎臟（高劑量組）Fig.8 K idney（high dosegroup）

3個(gè)劑量組（分別為人體攝入量的223、167、112倍）與對(duì)照組雌、雄性大鼠在實(shí)驗(yàn)期間未見軀體運(yùn)動(dòng)及神經(jīng)系統(tǒng)異常，毛發(fā)光澤、未見流涎、流涕、流淚，排泄物無異常，各組間大鼠體重未見明顯差異。對(duì)各組大鼠臟器進(jìn)行大體解剖觀察未見異常改變。高劑量組及對(duì)照組40只大鼠（雌、雄各半）的肝、脾、腎、胃、十二指腸、性腺（睪丸或卵巢）經(jīng)病理學(xué)檢查均未見與楓糖相關(guān)的病理改變，故未對(duì)中、低劑量組大鼠作組織病理學(xué)觀察。

圖9 卵巢（對(duì)照組）Fig.9 Ovary（controlgroup）

圖10 卵巢（高劑量組）Fig.10 Ovary（high dosegroup）

圖11 睪丸（對(duì)照組）Fig.11 Testis（controlgroup）

圖12 睪丸（高劑量組）Fig.12 Testis（high dosegroup）

3討論

本試驗(yàn)根據(jù)2014年頒布的GB 15193.1-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》對(duì)楓糖進(jìn)行了遺傳毒性及亞慢性毒性檢測。急性毒性試驗(yàn)可以在短時(shí)間內(nèi)觀察動(dòng)物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，結(jié)果為無毒級(jí)。細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)檢測楓糖對(duì)微生物（細(xì)菌）的基因突變作用，預(yù)測其遺傳毒性和潛在的致癌作用；哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)通過分析動(dòng)物骨髓紅細(xì)胞，檢測楓糖是否引起成熟紅細(xì)胞染色體損傷或有絲分裂裝置損傷，預(yù)測其致突變性。這兩項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，提示楓糖對(duì)基因哺乳類動(dòng)物體細(xì)胞染色體無損傷作用[9]。90天喂養(yǎng)試驗(yàn)通過長期喂飼不同劑量的楓糖，檢測其對(duì)動(dòng)物引起的有害效應(yīng)的劑量、毒作用性質(zhì)和靶器官，估計(jì)亞慢性攝入的危害性，結(jié)果顯示各劑量均未觀察到其對(duì)大鼠生長發(fā)育、血常規(guī)、血生化及病理檢測等指標(biāo)有異常影響。楓糖在本試驗(yàn)劑量范圍內(nèi)未觀測到致突變性及毒性作用，為對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的開發(fā)研究，納入保健食品及新資源食品名錄，提供理論依據(jù)。

[1]張桂英,趙海軍,信振江,等.楓糖對(duì)小鼠抗運(yùn)動(dòng)疲勞能力的影響[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2008,29(6):644-646

[2]Yuan T,Wan CP,Gonzalez-Sarrias,etal.Phenolic Glycosides from SugarMaple(Acer saccharum)Bark[J].JournalofNaturalProducts, 2011,74(11):2472-2476

[3]Singh A S,Jones,AM P,etal.Variation and Correlation of Properties in Different Grades of Maple Syrup[J].PLANT FOODS FOR HUMANNUTRITION,2014,69(1):50-56

[4]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB 15193.1-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2015:1-6

[5]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB 15193.3-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2015:1-3

[6]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB 15193.4-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2015:1-3

[7]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB 15193.5-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2015:1-3

[8]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB 15193.13-2015食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)90天經(jīng)口毒性試驗(yàn)[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2015

[9]陳文學(xué),楊銘,于德偉,等.人參果食用安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)[J].毒理學(xué)雜志,2015,29(2):160-163

Study on Genetic Toxicity and Sub Chronic Toxicity Text of M ap le Sugar

SONGXin-tian1，MENG Ling-yi1，ZHANG Jing-ying1，ZHOUBO-yu1，ZHANGKun2，*
（1.Disease ControlPrevention of Jilin Province，Changchun 130062，Jilin，China；2.The Second Hospitalof Jilin University，Changchun 130000，Jilin，China）

The purposeof the presentstudywas to investigate the toxicity ofmaple sugaron rats.Acute Toxicity test：Used limitedmethod，ICRmice after a fastof16 h，can nothelp butwater，observed in 14 days after given subjectsby oral in 15.0 g/kg BW dose.Ames test：Setup 5 000，1 000，200，40，8μg/dish 5 dose groups，untreated group，solventgroup，positive controlgroup.Used plate incorporationmethod，counted thenumberof reverse colonieswith 5 kinds of histidine nutrition deficiency Strain TA97，TA98，TA100，TA102 and TA1535. Mammalian ErythocyteMicronucleus test：Seted 10.0，5.0，2.5 g/kg BW three dose groups，cyclophosphamide group and negative control group.Two oral administration during 24 h.calculated proportion of bonemarrow polychromatic erythrocytes in total red blood cells.90 day feeding test：Seted 8.0，6.0 4.0 g/kg BW three dose groups.Mixed feed for90 days，blank controlgroupwasgiven normal feed.Observed bodyweight，food utilization，blood routine，blood biochemical indexes and pathological examination.The result of Ames text and Mammalian Erythocyte Micronucleus testofmaple sugarwasnegative.Therewasno significantdifference compared to blank controlgroup aboutvarious index of90 days feeding text.Maple sugar is confirmed edible safety by system tests in vivoand in vitro testata certain dose range.

maplesugar；rat；genetic toxicity；sub chronic toxicity

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.05.008

2016-06-14

宋昕恬（1979—），女（漢），副主任醫(yī)師，碩士，主要從事食品毒理學(xué)研究。

*通信作者：張琨（1968—），女（漢），主任醫(yī)師，博士，主要從事毒理學(xué)研究。