高效液相色譜法測定巴中梔子熊果酸含量

齊鶴

摘 要：建立反相高效液相色譜法測定巴中梔子中熊果酸的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（ 取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml） （5∶85：10）為流動相，檢測波長為210nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。熊果酸在0.1～0.55mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系。熊果酸平均回收率分別為99.3%。結論：本法簡便、準確，可用于巴中梔子中熊果酸的含量測定。

關鍵詞：梔子；含量；測定

梔子是茜草科植物梔子的果實。梔子的果實是傳統(tǒng)中藥，具有護肝、利膽、降壓、鎮(zhèn)靜、止血、消腫等作用。梔子氣味：苦、寒、無毒?！端幮再x》記載：“味苦，性大寒，無毒。沉也，陰也。其用有二：療心中懊憹顛倒而不得眠，治臍下血滯小便而不得利。易老云：輕飄而象肺，色赤而象火，又能瀉腫中之火?！睏d子臨床常用于熱病心煩、黃疸尿赤、血熱吐衄、血淋澀痛、目赤腫痛、火毒瘡瘍等。熊果酸是存在于天然植物中的一種三萜類化合物，具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗?jié)儭⒔档脱堑榷喾N生物學效應，熊果酸還具有明顯的抗氧化功能，為梔子主要成分之一。熊果酸具有迅速降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血清轉(zhuǎn)氨酶、消退黃疽、增進食欲、抗纖維化和恢復肝功能的作用[1-5]。梔子生于丘陵山地或山坡灌林中，分布于中南、西南及江蘇、安徽、浙江、江西、福建、臺灣等地。本文采用高效液相法對巴中梔子中的熊果酸的進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：EX1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京皓而普分析設備有限公司）；B03001-004在線脫氣機（上海笛柏實驗設備有限公司）；HH-601超級恒溫水?。ū本└蝗鸷銊?chuàng)科技有限公司）；08890-xx超聲波清洗器（北京中科科爾儀器有限公司）；FA1204CFAC型全自動內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；ULABO實驗室溫度控制器（優(yōu)萊博技術（北京）有限公司）；UV1600紫外可見分光光度計（西安華辰樂天實驗室設備有限公司）；實驗室用高純水制備器（北京科譽興業(yè)科技發(fā)展有限公司）；XSYF-D實驗室廢水處理設備（北京湘順源科技有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：熊果酸

1.4 試劑：甲醇（上海盈公生物技術有限公司）、磷酸（廣州市西隴化工有限公司）、冰醋酸（廣州市西隴化工有限公司）、醋酸鈉（利津縣東海工貿(mào)有限公司）、磷酸二氫銨（上海科豐化學試劑有限公司）、三乙胺（北京亞太龍興化工有限公司）、乙腈（上?？曝S化學試劑有限公司）。

1.5 試藥：巴中梔子

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下。流動相：甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml）（5∶85：10）為流動相，檢測波長：210nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按熊果酸峰計算應不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取熊果酸對照品適量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取供試品，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，精密稱定，用甲醇補足重量，搖勻，濾過。取續(xù)濾液，即得。

2.4 精密度試驗

精密稱取熊果酸對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為0.3mg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.73%，表明本方法精密度良好。

2.5 對照品的線性考察

精密稱取適量熊果酸對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.1、0.15、0.25、0.35、0.4.、0.45、0.55毫克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，熊果酸在0.1～0.55mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.6 重現(xiàn)性試驗

稱取同一批的梔子樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.73%，結果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 準確度試驗

取對照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入熊果酸對照品，按項下方法制備成110%、120%、130%。取模擬樣品照“含量測定”項下方法試驗，計算回收率為99.3%，RSD為0.85%。

2.8 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，再按外標法以峰面積計算樣品的含量，結果樣品的含量分別為0.32毫克/克、0.35毫克/克、0.33毫克/克。

3 討論

分別考察0.04moloL-1磷酸二氫銨溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.01），甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml）（5∶65：30），甲醇-1%冰醋酸溶液（28∶72），甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml）（5∶85：10）不同比例的流動相，結果以甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml）（5∶85：10）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml）（5∶85：10）為流動相為流動相。本實驗采用高效液相法效果好、方法簡便、快捷、準確、專屬性好，可用于巴中梔子中熊果酸的含量測定。

參考文獻

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