喉組織中相關(guān)特異性蛋白異常的表達(dá)及臨床意義

曾漢榮，楊虹女，李文星，涂興，孔維佳

(1.枝江市人民醫(yī)院耳鼻咽喉科，湖北 枝江 443200；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)生命科學(xué)學(xué)院，湖北 武漢 430022)

喉組織中相關(guān)特異性蛋白異常的表達(dá)及臨床意義

曾漢榮1，楊虹女1，李文星2，涂興2，孔維佳2

(1.枝江市人民醫(yī)院耳鼻咽喉科，湖北 枝江 443200；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)生命科學(xué)學(xué)院，湖北 武漢 430022)

目的探討喉組織中相關(guān)特異性蛋白異常的表達(dá)及其臨床意義。方法所有病理標(biāo)本來源于2012年5月至2015年2月間我院耳鼻咽喉頭頸外科因喉部不同病因需要接受手術(shù)治療住院患者，其中，喉癌組織標(biāo)本(喉癌組)、喉聲帶息肉組織標(biāo)本(息肉組)和喉癌前病變組織標(biāo)本(癌前組)各69例。喉癌標(biāo)本按照2010年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期和病理分級(jí)。采用過氧化物酶標(biāo)記鏈酶卵蛋白素染色法檢測(cè)各組標(biāo)本中人乳頭狀瘤病毒16E7蛋白(HPV16E7)和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白D1(Cyclin D1)表達(dá)水平。采用相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和比較各組間HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率和相關(guān)性差異。結(jié)果喉癌組HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)出現(xiàn)于細(xì)胞核，為大量黃褐色粗大顆粒，陽(yáng)性表達(dá)率分別為44.93%和52.17%，明顯強(qiáng)于息肉組(分別為2.90%和8.70%)和癌前組(分別為5.80%和23.19%)，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，癌前組HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率較息肉組也明顯提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在喉癌臨床分期中，HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率在Ⅰ～Ⅳ期中隨著分期增加呈上升趨勢(shì)(P＜0.01)；在喉癌病理分級(jí)中，HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率隨分化程度減弱，均表現(xiàn)為Ⅲ級(jí)＞Ⅱ級(jí)＞Ⅰ級(jí)(P＜0.01)；HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率與喉癌發(fā)生率均具有顯著正相關(guān)(r=0.79、0.86，P= 0.003，0.002)，兩者相互間陽(yáng)性表達(dá)率也呈顯著正相關(guān)(r=0.68，P=0.005)。結(jié)論喉癌的發(fā)生和發(fā)展與HPV16E7和Cyclin D1過度表達(dá)密切相關(guān)，因此，對(duì)HPV16E7和Cyclin D1檢測(cè)有利于提高患者的臨床早期診斷和生存預(yù)后。

喉癌；人乳頭狀瘤病毒16E7蛋白；細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白D1；陽(yáng)性表達(dá)

喉癌(laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC)是耳鼻咽喉頭頸外科最常見的惡性腫瘤，占全部喉癌的96%～98%。人乳頭瘤病毒(human papiloma-virus， HPV)感染是其發(fā)病的主要病因，并和細(xì)胞周期調(diào)控蛋白(cyclin)一道在LSCC發(fā)生中起著決定性作用[1]。作為一種致癌原癌基因病毒，HPV的高危型早期編碼區(qū)E7基因及其編碼核磷酸蛋白(HPV16E7蛋白)被認(rèn)為與口咽喉腫瘤密切相關(guān)原癌基因。它通過干擾和加快喉組織中細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白D1(Cyclin D1)過表達(dá)[2]，造成細(xì)胞周期循環(huán)途徑中G1/S關(guān)卡(G1/S checkpoint)失控，喉組織細(xì)胞生長(zhǎng)變得無序增加，出現(xiàn)嚴(yán)重未成熟和/或異常細(xì)胞，從而導(dǎo)致LSCC發(fā)生發(fā)展[3]。研究HPV16E7、Cyclin D1與癌生物學(xué)行為關(guān)系及其相關(guān)程度，有利于了解LSCC發(fā)生發(fā)展及其治療方式。本實(shí)驗(yàn)將采用鏈霉卵白素-辣根過氧化物酶(streptavidin-perosidase，SP)技術(shù)，檢測(cè)臨床上LSCC、聲帶息肉(vocal cord polyp，VCP)和喉癌前病變(laryngeal precarcinoma lesions，LPL)組織中HPV16 E7和Cyclin D1表達(dá)，旨在為臨床了解LSCC發(fā)病機(jī)制和早期診斷及其基因治療靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病理標(biāo)本均來源于2012年5月至2015年2月間在我院耳鼻咽喉頭頸外科因喉部不同病因，經(jīng)術(shù)前電子喉鏡、病變組織活檢等確定需要接受手術(shù)治療住院患者，最終經(jīng)過病理科作HE染色，醫(yī)師診斷得出相應(yīng)結(jié)果并出具診斷報(bào)告。每一例病理組織離體后，迅速用生理鹽水沖洗血跡，無菌手術(shù)刀在中心部位切取組織，置于10%中性福爾馬林中固定，常規(guī)石蠟包埋，供HE和免疫組織化學(xué)染色。其中，喉癌組織標(biāo)本(LSCC組)69例，來自行根治性手術(shù)部位，男性57例，女性12例，年齡42～79歲，平均(60.5± 12.3)歲；LSCC納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)既往無喉部手術(shù)史；(2)手術(shù)前沒有接受任何放療、化療或免疫治療；(3)不伴不典型增生；(4)無并發(fā)其他癌癥及急、慢性病史；根據(jù)2010年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期：Ⅰ期17例，Ⅱ期24例，Ⅲ期17例，Ⅳ期11例；按腫瘤分化程度分級(jí)：Ⅰ級(jí)(高度分化)24例，Ⅱ級(jí)(中度分化)33例，Ⅲ級(jí)(低度分化)12例。聲帶息肉標(biāo)本(VCP組)69例，為本院同時(shí)期行聲帶息肉摘除住院患者；喉癌前病變標(biāo)本(LPL組)69例，為喉角化病、喉黏膜白斑病、疣狀增生等異常病灶需要住院進(jìn)行手術(shù)根治患者[4]。VCP組和LPL組中病理材料來源時(shí)間、納入標(biāo)準(zhǔn)、性別和年齡資料與LSCC組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)、具有可比性。對(duì)于上述所有標(biāo)本均在實(shí)驗(yàn)前再次行HE染色，由3名經(jīng)驗(yàn)豐富病理科醫(yī)師對(duì)切片組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)再次行病理學(xué)定性確診。

1.2 主要儀器和試劑 脫水機(jī)、包埋機(jī)和切片機(jī)(Leica公司，德國(guó))；生物學(xué)顯微鏡(BX-63，Olympus公司，日本)；圖像獲取數(shù)字分析系統(tǒng)(NIH Image 1.6，Kontronm公司，德國(guó))；酶標(biāo)儀(Synergy HF，Bio-tek公司，美國(guó))；Western blot轉(zhuǎn)移電泳儀(XCell SureLock，Invitrogen公司，美國(guó))；雙通道熒光掃描儀(ODY-2182，Li-Cor公司，美國(guó))，紫外凝膠成像系統(tǒng)(VL，Vilber公司，法國(guó))。兔抗人HPV16E7、Cyclin D1和GAPDH單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Epitomics公司；SP免疫組化測(cè)試盒、DAB-H2O2試劑盒、磷酸鹽緩沖液(PBS)、3%H2O2等購(gòu)自基因生物工程有限公司；溴酚藍(lán)、TBST緩沖液、脫脂奶粉均購(gòu)自Sigma公司。

1.3 方法

1.3.1 SP法檢測(cè)蛋白表達(dá) 將各組標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟包埋等步驟制成蠟塊，后作連續(xù)切片，厚度為4 μm。每一個(gè)標(biāo)本留取10張切片用作檢測(cè)兩種蛋白，每種蛋白5張。將各組待檢測(cè)切片放入烤箱中烘烤、二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化，蒸餾水和PBS反復(fù)沖洗修復(fù)，3% H2O2液孵育后，滴加非免疫羊血清封閉去除血清。根據(jù)SP免疫組化測(cè)試盒上說明，分別在各組織切片上滴加稀釋比例為1：100的Ⅰ抗兔抗人HPV16E7或Cyclin D1單克隆抗體(50 μL/張)、Ⅱ抗鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液，Ⅲ抗辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素液。最后滴加DAB-H2O2顯色劑染色，蘇木素復(fù)染，鹽酸乙醇分化，并經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，40×40倍顯微鏡下檢測(cè)、圖像獲取數(shù)字分析系統(tǒng)保存圖片于計(jì)算機(jī)供分析使用。

1.3.2 結(jié)果判讀 由3位病理科醫(yī)師組成診斷小組以雙盲法形式分別對(duì)所有切片進(jìn)行獨(dú)立閱片，得出相應(yīng)結(jié)果，當(dāng)3位專家獨(dú)立觀察結(jié)果不一致時(shí)，經(jīng)討論最終判讀切片病理性質(zhì)特征。根據(jù)檢測(cè)HPV16E7和Cyclin D1表達(dá)說明書提供資料，染色陽(yáng)性對(duì)照用已知宮頸鱗狀細(xì)胞癌病例切片1張，陰性對(duì)照是取各組切片1張，PBS取代Ⅰ抗，分別依照上述免疫組化相關(guān)步驟同時(shí)進(jìn)行操作、染色和鏡檢，得出結(jié)果作為參考。HPV16E7或Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)特征均為細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色或棕褐色細(xì)小和/或粗大顆粒。結(jié)合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定[5]：光學(xué)顯微鏡下(40×40倍)對(duì)每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，按陽(yáng)性細(xì)胞所占整個(gè)觀察細(xì)胞百分比平均數(shù)劃分，當(dāng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占整個(gè)觀察細(xì)胞數(shù)百分比＜5%，視為陰性(-)，5%～25%為弱陽(yáng)性(+)，25%～50%為中度陽(yáng)性(++)，＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。+、++、+++統(tǒng)稱陽(yáng)性表達(dá)，－為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Origin 6.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，兩兩比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率或百分比表示，兩兩比較采用χ2分割法；相關(guān)性分析用Pearson相關(guān)系數(shù)(r)法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)病理特征比較 HPV16E7和Cyclin D1在VCP組沒有陽(yáng)性表達(dá)或表達(dá)極少，整個(gè)細(xì)胞染成淺藍(lán)色或藍(lán)色；在LPL組有少量陽(yáng)性表達(dá)，其病理特征為細(xì)胞核出現(xiàn)與背景染色不一樣細(xì)而少黃色顆粒；在LSCC組，陽(yáng)性表達(dá)非常強(qiáng)烈，更多細(xì)胞核出現(xiàn)黃色或黃褐色細(xì)網(wǎng)狀或粗大顆粒，陽(yáng)性細(xì)胞染色較深，呈灶狀或彌漫分布，見圖1。

圖1 各組中HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)病理特征比較（SP×400）

2.2 各組HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率比較 與VCP組比較，LPL組HPV16E7陽(yáng)性表達(dá)率稍有增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.48，P＞0.05)，Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率增加明顯(χ2=4.97，P＜0.05)；LSCC組HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率顯著上升(χ2= 33.49、30.80，P均＜0.05)。與LPL組比較，LSCC組HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率均顯著增加(χ2= 27.91、16.74，P均＜0.05)，見表1。

表1 HPV16E7和Cyclin D1在各組中陽(yáng)性表達(dá)率比較[例（%）]

2.3 LSCC組HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期和病理分級(jí)的關(guān)系 在臨床分期中，HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率在Ⅰ～Ⅳ期隨分期增加呈上升趨勢(shì)，即Ⅳ期＞Ⅲ期＞Ⅱ期＞Ⅰ期；HPV16E7陽(yáng)性表達(dá)率從Ⅰ期過渡到Ⅲ期時(shí)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 4.45，P＞0.10)，但Ⅳ期與其他幾期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.79，P＜0.05)。Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率隨著分期增加而顯著增加，各期間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.36，P＜0.05)，見表2。在病理分級(jí)中，HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率隨著病理組織分化程度減弱、分級(jí)增加呈現(xiàn)逐級(jí)增加趨勢(shì)，即Ⅲ級(jí)＞Ⅱ級(jí)＞Ⅰ級(jí)，各級(jí)間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.81、32.57，P＜0.005)，見表3。

2.4 LSCC與HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率之間相關(guān)性比較 在喉癌組織中HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率與LSCC發(fā)生率均具有顯著正相關(guān)(r=0.79、 0.86，P=0.003、0.002)；HPV16E7陽(yáng)性表達(dá)率與Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)也呈顯著正相關(guān)(r=0.68，P=0.005)。

表2 喉癌中HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率在臨床分期中比較[例(%)]

表3 喉癌中HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率在病理分級(jí)中比較[例(%)]

3 討 論

LSCC是在大量不典型增生-癌變遺傳病變積累基礎(chǔ)上發(fā)生，其生物學(xué)行為是一種細(xì)胞周期紊亂性疾病，與原癌基因激活、抑癌基因失活、轉(zhuǎn)錄基因失調(diào)等異常生物學(xué)行為密切相關(guān)[6]。HPV16E7是致癌的重要轉(zhuǎn)化基因，負(fù)責(zé)早期區(qū)編碼HPV調(diào)整、轉(zhuǎn)換及蛋白復(fù)制。有關(guān)它在LSCC組織中陽(yáng)性表達(dá)的機(jī)制還不明確。隨著對(duì)細(xì)胞調(diào)控認(rèn)識(shí)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)患者遭受HPV感染后，負(fù)責(zé)控制細(xì)胞周期進(jìn)程Cyclin D1將發(fā)生明顯異常表達(dá)[7]，這在本實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)，LSCC組織中HPV16E7蛋白表達(dá)及其陽(yáng)性率均明顯高于LPL以及VCP組織，而伴隨LSCC組織中HPV16E7陽(yáng)性增加，Cyclin D1表達(dá)及其陽(yáng)性率也顯著高于LPL以及VCP組織。提示HPV可能是一種重要致癌病毒，且對(duì)喉組織具有趨嗜性，使得喉組織在HPV反復(fù)感染下積累到一定量后，造成LSCC發(fā)生。在此基礎(chǔ)上，出現(xiàn)HPV16E7和處于細(xì)胞周期控制部位關(guān)鍵蛋白Cyclin D1表達(dá)水平顯著增加[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在喉癌組織中，HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率分別達(dá)到44.93%和52.17%，說明在喉癌發(fā)生過程中，HPV嚴(yán)重感染侵襲喉組織使得HPV16E7成為喉癌發(fā)生啟動(dòng)因素，Cyclin D1增加引起細(xì)胞周期紊亂，加速喉組織細(xì)胞異化，使得Cyclin D1成為加速和延續(xù)喉癌發(fā)生的維持因素。臨床上通過檢測(cè)喉組織中HPV16E7和Cyclin D1異常增加，能夠從側(cè)面反映出喉組織性質(zhì)改變及惡化傾向[9]。另外，在LPL組織中，亦發(fā)現(xiàn)HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率也明顯高于VCP組織，提示臨床對(duì)于一些不典型增生和結(jié)構(gòu)改變喉組織角化病、黏膜白班、疣狀增生等需要引起高度重視，盡早開展藥物治療或擇期手術(shù)，加強(qiáng)喉癌前病變防治與篩查，動(dòng)態(tài)觀察HPV16E7和Cyclin D1數(shù)值變化，把喉組織惡變趨勢(shì)消除在萌芽狀態(tài)[10]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，隨著喉癌腫瘤臨床分期增加，HPV16E7和Cyclin D1在Ⅰ～Ⅳ期之間陽(yáng)性表達(dá)逐步增多。提示臨床一旦檢測(cè)到喉組織中HPV16E7和Cyclin D1蛋白陽(yáng)性表達(dá)逐步增強(qiáng)，發(fā)生喉癌風(fēng)險(xiǎn)極高，喉癌細(xì)胞增殖調(diào)控明顯增速、擴(kuò)大和增多，喉癌細(xì)胞生成活躍程度增加，臨床上應(yīng)采取積極治療措施，并為喉癌不同時(shí)段選擇正確治療方案[11]。另外，隨著喉癌組織病理程度加重，細(xì)胞分化程度減弱，喉組織中HPV16E7和Cyclin D1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率都呈逐漸增加趨勢(shì)，提示喉癌病理分型早于自身臨床表現(xiàn)，當(dāng)喉癌組織出現(xiàn)臨床表現(xiàn)并檢測(cè)出HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)時(shí)，喉癌病理特征顯得更加嚴(yán)重，分化程度極低。說明喉組織中HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)與喉癌臨床分期和病理分級(jí)均具有顯著相關(guān)性，檢測(cè)喉組織中HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)，可用于喉癌惡性程度的評(píng)定，對(duì)喉癌患者早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療顯得特別重要，兩者可作為判斷喉癌惡性程度和預(yù)后的一個(gè)重要參考指標(biāo)[12]。

作為一種細(xì)胞周期紊亂性疾病，喉腔惡性腫瘤形成通路主要來自細(xì)胞周期網(wǎng)絡(luò)調(diào)控系統(tǒng)中G1/S期循環(huán)途徑，該調(diào)控系統(tǒng)在外來分裂刺激因素HPV強(qiáng)烈作用下，HPV16E7被激活并過度表達(dá)，直接或間接激活和增大處于G1中期Cyclin D1調(diào)控功能，最終造成喉癌腫瘤發(fā)生和發(fā)展[13]。所以，HPV16E7和Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率與喉癌發(fā)生率均具有顯著正相關(guān)，且HPV16E7陽(yáng)性表達(dá)率與Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)也呈現(xiàn)顯著正相關(guān)。提示喉癌生成可能與患者遭受HPV感染，刺激喉組織中HPV16E7過度表達(dá)，并引起Cyclin D1活性增加有關(guān)。HPV16E7可能是促使喉癌形成的啟動(dòng)因素和初始條件，在其刺激因素作用下，誘發(fā)喉組織細(xì)胞周期中Cyclin D1過表達(dá)，并與細(xì)胞周期依賴性激酶結(jié)合，促使轉(zhuǎn)錄因子E2F與抑制蛋白分離而充分發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子作用，使喉組織中未成熟細(xì)胞在形成過程中跨過G1/S關(guān)卡，快捷由G1期向S期演進(jìn)，致使未分化喉組織細(xì)胞無序增殖。并且Cyclin D1功能異常，阻斷干擾素產(chǎn)生，增加外源DNA整合及突變，抵抗細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞永生化，最終造成細(xì)胞增殖失控而促進(jìn)喉癌發(fā)生[14]?？傊戆┑陌l(fā)生和發(fā)展與HPV嚴(yán)重感染宿主細(xì)胞造成HPV16E7過度表達(dá)，并刺激Cyclin D1惡性增加密切相關(guān)。對(duì)喉組織中HPV16E7和Cyclin D1檢測(cè)有利于提高臨床對(duì)喉癌發(fā)病原因及其機(jī)制認(rèn)識(shí)，對(duì)喉癌早期預(yù)防、診斷和治療，以及患者預(yù)后評(píng)價(jià)均具有重要的臨床意義。

[1]Gupta S,Gupta S.Role of human papillomavirus in oral squamous cell carcinoma and oral potentially malignant disorders:A review of the literature[J].Indian J Dent,2015,6(2):91-98.

[2]Rodrigo JP,García-Pedrero JM,Suárez C,et al.Biomarkers predicting malignant progression of laryngeal epithelial precursor lesions:a systematic review[J].Eur Arch Otorhinolaryngol,2012,269(4): 1073-1083.

[3]劉馨蓮,殷舞,李淑蓉.細(xì)胞周期蛋白在喉癌組織中的表達(dá)及意義[J].實(shí)用癌癥雜志,2011,26(6):585-587.

[4]張紅凱,劉紅剛.喉癌前病變的分類及其臨床病理學(xué)研究現(xiàn)狀[J].中華病理學(xué)雜志,2010,39(8):570-573.

[5] Wijnhoven SW,Van Steeg H.Transgenic and knockout mice for DNA repair functions in carcinogenesis and mutagenesis[J].Cancer Lett,2006,236(1):32-38.

[6]Li X,Gao L,Li H,et al.Human papillomavirus infection and laryngeal cancer risk:a systematic review and meta-analysis[J].J Infect Dis,2013,207(3):479-488.

[7]Papadimitrakopoulou V,Lzzo JG,Liu DD,et al.Cyclin D1 and cancer development in laryngeal premalignancy patients[J].Cancer Prev Res,2009,2(1):14-21.

[8]Rodrigo JP,Alvarez-Alija G,Menendez ST,et al.Cortactin and focal adhesion kinase as predictors of cancer risk in patients with laryngeal premalignancy[J].Cancer Prev Res,2011,4(8):1333-1341.

[9]Ahmed RA,Shawky Ael-A,Hamed RH.Prognostic significance of cyclin D1 and E-cadherin expression in laryngeal squamous cell carcinoma[J].Pathol Oncol Res,2014,20(3):625-633.

[10]趙峰,蘇家坤,黃小英,等.喉癌前病變分子標(biāo)志物研究進(jìn)展[J].國(guó)際耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2015,29(1):39-42.

[11]Gheit T,Abedi-Ardekani B,Carreira C,et al.Comprehensive analysis of HPV expression in laryngeal squamous cell carcinoma[J].J Med Virol,2014,86(4):642-646.

[12]Krecicki T,Smigiel R,Fraczek M,et al.Studies of the cell cycle regulatory proteins P16,cyclin D1 and retinoblastoma protein in laryngeal carcinoma tissue[J].J Laryngol Otol,2004,118(9):676-680.

[13]Stasikowska-Kanicka O,W?growska-Danilewicz M,Danilewicz M. Effect of human papillomavirus on cell cycle-related proteins p16INK4A,p21waf1/cip1,p53 and cyclin D1 in sinonasal inverted papilloma and laryngeal carcinoma.An in situ hybridization study [J].Folia Histochem Cytobiol,2011,49(1):34-40.

[14]Sanchez GI,Kleter B,Gheit T,et al.Clinical evaluation of polymerase chain reaction reverse hybridization assay for detection and identification of human papillomavirus type 16 variants[J].J Clin Virol,2011,51(3):165-169.

Effects and clinical significances of abnormal expressions of key proteins of laryngeal tissues on patients with laryngeal squamous cell carcinoma

ZENG Han-rong1,YANG Hong-nv1,LI Wen-xing2,TU Xing2,KONG Wei-jia2. 1.Department of Otolaryngology,the People's Hospital of Zhijiang City,Zhijiang 443200,Hubei,CHINA;2.College of Life Science&Technology,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430022,Hubei,CHINA

ObjectiveTo investigate the effects and clinical significances of abnormal expressions of human papillomavirus 16E7 protein(HPV16E7)and cell cycle protein D1(Cyclin D1)on patients with laryngeal squamous cell carcinoma.MethodsAll the pathologic specimens were collected from the patients with laryngeal diseases who underwent surgical treatment because of different causes in Department of Otolaryngology of our hospital from May 2012 to February 2015,which included laryngeal squamous cell carcinoma(LSC group)and vocal cord polyp(VCP group)as well as laryngeal precarcinoma lesions(LPL group),with 69 cases in each group.According to the correlated standard of 2010 InternationalAnti-CancerAssociation,the clinical stage and pathological degree were further developed in the specimens of LSC group.The expression levels and clinical pathological features of HPV16E7 and Cyclin D1 were detected through the immunohistochemical SP staining methods.Moreover,the positive expression rate and correlational difference were analyzed and compared by statistical software in the three groups.ResultsThe positive expressions of HPV16E7 and Cyclin D1 were observed in cell nucleus in LSC group,which got a great number of thick and brown particles.Compared with VCP and LPL groups,the positive expression rate of HPV16E7 and Cyclin D1 were significantly increased in LSC group(44.93%vs 2.90%and 5.80%,52.17%vs 8.70%and 23.19%,respectively),P＜0.01.Compared with VCP group,the positive expression rate of HPV16E7 and Cyclin D1 in LPV group were significantly increased(P＜0.05).The positive expression rate of HPV16E7 and Cyclin D1 were increasingly grown up from stageⅠto stageⅣ,and raised with degreeⅢ＞degreeⅡ＞degreeⅠin LSC group(P＜0.01,respectively).The positive expression rate of the two proteins had significant positive correlation with the incidence of LSC(r=0.79,0.86,P=0.003,0.002),and positive expression rate of HPV16E7 had also completed positive correlation with that of Cyclin D1 in LSC group(r=0.68,P=0.005).ConclusionThe occurrence and development of laryngeal carcinoma might have the significant relationship with HPV16E7 and Cyclin D1 in patients with LSC.To detect HPV16E7 and Cyclin D1 in laryngeal organization of patients might contribute to enhancement of early diagnosis and prognosis of survival of laryngeal carcinoma patients in clinic.

Laryngeal squamous cell carcinoma(LSCC);Human papillomavirus 16E7 protein(HPV16E7); Cell cycle protein D1(Cyclin D1);Positive expression

R767

A

1003—6350（2017）05—0743—04

2016-09-07)

曾漢榮。E-mail：zenghr1963@163.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.05.019