脾陽虛大鼠腹腔消化吸收結(jié)構(gòu)表面微循環(huán)血流量變化及其機制研究

喬海峰++劉文俊++劉旭東++王凌志++劉慧慧++王德山++單德紅

[摘要]目的 研究脾陽虛模型大鼠腹腔主要消化吸收結(jié)構(gòu)表面微循環(huán)血流量的變化，并從血栓素A2（TXA2）/前列環(huán)素2（PGI2）（T/P）比值方面探討其發(fā)生機制。方法 選取16只SPF級雄性SD大鼠，隨機分為對照組和脾陽虛組（模型組），每組8只。采用激光散斑技術(shù)檢測大鼠肝、胰腺、胃、小腸和小腸系膜等表面微循環(huán)的實時血流量，采用ELISA法檢測血清TXA2和PGI2水平。結(jié)果 與對照組相比，模型組大鼠肝左葉、肝右側(cè)葉、胰腺、胃和小腸的血流量及T/P比值均顯著增加（均P<0.01），但小腸系膜血流量和血清PGI2濃度卻明顯減少（均P<0.01）。結(jié)論 脾陽虛時腹腔主要消化結(jié)構(gòu)存在血流增加現(xiàn)象，其機制與T/P比值升高有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]脾陽虛；血流量；肝；胰腺；胃；小腸；血栓素A2；前列環(huán)素2

[中圖分類號] R-332 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）02（c）-0109-03

Study of blood flows in main visceral organs of digestion and absorption in spleen yang deficiency and its underlying mechanism

QIAO Hai-feng1，2 LIU Wen-jun1 LIU Xu-dong1 WANG Ling-zhi1 LIU Hui-hui1 WANG De-shan1 SHAN De-hong1▲

1.Center Hospital of Chaoyang City in Liaoning Province，Chaoyang 122000，China；2.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，China

[Abstract]Objective To study blood flow changes of main visceral organs of digestion and absorption in spleen yang deficiency and its possible mechanism from the ratio of thromboxane A2 （TXA2） and prostacyclin （PGI2）.Methods 16 SPF rats were randomly divided into the control and the spleen yangdeficiency group （the model group），8 rats in each group.Laser speckle was used to detect blood flow changes in liver，pancreas，stomach，small intestine （SI） and its mesenterium.ELISA was employed to measure serum thromboxane A2 （TXA2） and prostacyclin （PGI2） concentrations.Results Compared with those in the control group，blood flows inliver left and right lobes，pancreas，stomach and small intestine and TXA2/PGI2 （T/A） value were significantly increased in the model group （all P<0.01），but blood flow of SI mesenterium and serum PGI2 level were decreased obviously in the model group （all P<0.01）.Conclusion There is enhancement of blood flows in main visceral organs of digestion and absorption in spleen yang deficiency，and its underlying mechanism might be attributed to the increase of T/P value.

[Key words]Spleen yang deficiency；Blood flux；Liver；Pancreas；Stomach；Small intestine；Thromboxane A2；Prostacyclin 2脾陽虛證是臨床常見證候，常是脾氣虛的進一步發(fā)展，既有食少、腹脹、便溏等脾氣虛的表現(xiàn)，又有脾陽溫煦作用減弱所導(dǎo)致的脘痛喜溫喜按、形寒肢冷等虛寒癥狀。中醫(yī)認(rèn)為脾為氣血生化之源，氣為血之帥，脾陽虛時不僅氣血化生不足，同時還會出現(xiàn)陽氣虛衰所致血行不利的情況。研究顯示，脾陽虛患者存明顯的甲襞與舌微循環(huán)的血液流速減慢、異形管襻增多[1]，提示機體表層血流減少，但內(nèi)臟血流是否也存在異常尚不清楚。為此，本研究主要利用激光散斑技術(shù)，觀察脾陽虛大鼠腹腔主要消化吸收結(jié)構(gòu)表面微循環(huán)的血流量變化，并從血栓素A2（thromboxane A2，TXA2）/前列環(huán)素（prostacyclin，PGI2）（T/P）比值方面探討其可能機制。

1材料與方法

1.1實驗動物與分組

16只SPF級雄性SD大鼠，購自遼寧省本溪巿實驗動物中心[SCXK（遼）-2010-0001]，體質(zhì)量（200±10）g，隨機分為對照組和脾陽虛組（模型組），每組8只。飼養(yǎng)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心[SYXK（遼）-2013-000-9]，室溫18～23℃，相對濕度45%～55%，自由飲水進食，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，開始實驗。

1.2脾陽虛模型的復(fù)制及評價

按文獻方法[2-3]復(fù)制大鼠脾陽虛模型并評價，即模型組大鼠首先在15 d內(nèi)，先飽食1 d，再禁食2 d，共5個循環(huán)，同時每日35～37℃游泳至力竭；然后每日灌服20%番瀉葉水浸劑（2 ml/100 g），早晚各1次，連續(xù)7 d。模型評價標(biāo)準(zhǔn)及方法為：消瘦，檢測體質(zhì)量；食少，代謝籠檢測24 h進含水量；神疲，曠場實驗法；乏力，檢測雙前肢抓力；畏寒，檢測肛溫；便溏，檢測大便含水率。

1.3血流量檢測方法

10%水合氯醛（0.35 ml/100 g）麻醉大鼠后，仰臥位固定，從下腹部正中逆時針方向沿左、右肋下緣依次剪開皮膚和肌層，充分暴露肝左葉和右側(cè)葉、胰腺、胃、小腸和小腸系膜等部位后，放置于恒溫箱內(nèi)10 min以上。打開FLPI2-MOOR型激光散斑實時成像系統(tǒng)（英國Moor公司），調(diào)整焦距至圖像清晰，檢測上述結(jié)構(gòu)單位面積平均血流灌注量（BPU，數(shù)碼信號）。記錄參數(shù)：像機增益為128；曝光時間為20 ms；濾波為25幀；采樣間隔為1000 ms；記錄時間為5 min；圖像分辨率為752×580。

1.4 TXA2和PGI2含量檢測

采用ELISA法檢測。取完成血流檢測大鼠，于腹主動脈取血，放置20 min后3000 r/min離心25 min，取血清凍存?zhèn)溆?。?yīng)用Bio-Rad美國伯樂iMark酶標(biāo)儀，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作（試劑盒購于武漢默沙克生物科技有限公司，批號：69-21720，69-21834）。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析

利用激光散斑實時成像系統(tǒng)的圖像處理程序?qū)Ω鹘Y(jié)構(gòu)表面散斑血流圖進行分析，計算每只動物同一結(jié)構(gòu)同一部位的平均血流灌注值。采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

模型組前5個部位（肝左葉、肝右側(cè)葉、胰腺、胃、小腸）的血流及T/P比值均高于對照組，小腸系膜血流和PGI2濃度低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.01）（表1）。

3討論

中醫(yī)認(rèn)為脾能夠消化吸收食物，又能將營養(yǎng)物質(zhì)及時外運，以供機體所需。脾失健運，則會導(dǎo)致氣血化生不足，如遷延不愈則可轉(zhuǎn)為脾陽虛，進而出現(xiàn)虛寒癥狀。由于寒象是鑒別脾氣虛證與脾陽虛證的重要依據(jù)，因此從寒象入手研究脾陽虛證的發(fā)生機制更有針對性。脾陽虛的寒象主要有脘痛喜溫喜按、形寒肢冷等，因其均為患者主觀感受，難以再現(xiàn)于大鼠，特別是無較為客觀的評價手段，因此多認(rèn)定肛溫下降為脾陽虛證大鼠的虛寒表現(xiàn)[4-6]。本研究前期工作也采用類似方法，顯示脾陽虛證大鼠出現(xiàn)了虛寒表現(xiàn)[3]。

脾陽虛的虛寒癥狀主要原因是氣血化生不足，氣虛難以行血，從而導(dǎo)致機體失去氣血的溫煦和濡養(yǎng)。中醫(yī)認(rèn)為“氣為血之帥，血為氣之母”，這是說氣血的相互依賴關(guān)系；而“血為氣之配，氣升則升，氣降則降，氣凝則凝，氣滯則滯”，則著重指出氣為血行之動力。盡管對中醫(yī)“氣”的物質(zhì)基礎(chǔ)還沒有統(tǒng)一認(rèn)識[7-9]，但可以通過觀察血行情況反推“氣”的狀態(tài)。臨床報道顯示，脾陽虛患者的甲襞與舌微循環(huán)的血液流速減慢、異形管袢增多，提示機體末梢血流障礙減慢[1]，推測是陽氣虛衰導(dǎo)致了血行不利，但這種情況是否也發(fā)生在內(nèi)臟目前還無相關(guān)報道。

中醫(yī)“重道輕器，重神輕形”，對脾的實體認(rèn)識較為淡化，其定位至今仍存爭議，但至少涉及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的消化系統(tǒng)[10-13]。本研究利用激光散斑技術(shù)檢測肝、胰腺、胃、小腸和小腸系膜等部位表面微循環(huán)血流情況。由于上述結(jié)構(gòu)均位于腹腔內(nèi)，傳統(tǒng)的激光多普勒技術(shù)難以一次性精確測量所有部位的微循環(huán)情況，因此本研究采用了激光散斑成像技術(shù)。該技術(shù)為非接觸和無創(chuàng)傷的檢測技術(shù)，能夠一次性對大范圍組織或器官表面血流情況進行快速采樣，又因為采樣過程中無需使用染料或示蹤劑，幾乎對局部微循環(huán)血流無任何影響，結(jié)果更為真實可靠，所以該技術(shù)已逐漸取代激光多普勒，成為微循環(huán)研究領(lǐng)域的新興技術(shù)。激光散斑技術(shù)的基本原理是：激光照射粗糙組織表面（高度變化大于激光的波長）后產(chǎn)生散射，由于到達相機成像面的光程差不同，不同散射光之間會在成像面形成隨機干涉現(xiàn)象，從而在空間分布上出現(xiàn)明暗變化的顆粒圖樣，即散斑。由于激光散斑技術(shù)的圖像分辨率更高、時間分辨率更靈敏，其在中醫(yī)藥科研中的應(yīng)用逐漸增加[14-18]。

本研究結(jié)果顯示，模型組小腸系膜血流量明顯下降，而其他部位血流卻顯著增加，存在分化現(xiàn)象。由于肝、胰腺、胃和小腸等器官表面微循環(huán)血流增加，提示脾陽虛時血液更多地停留于腹腔內(nèi)，出現(xiàn)血滯現(xiàn)象。結(jié)合前述肢體末梢血流減少的現(xiàn)象，推測脾陽虛發(fā)生時血液因陽氣虛損而難以充分外運，造成血聚于內(nèi)臟，進而造成肢體失于氣血的溫煦和濡養(yǎng)，而出現(xiàn)形寒肢冷等寒象。至于模型組小腸系膜血流減少的原因，可能主要是脾失健運所導(dǎo)致的氣血化生不足。從能量代謝的角度來說，脾陽虛屬于機體產(chǎn)熱不足的一種狀態(tài)。對于恒溫動物來說，體溫的維持依賴于產(chǎn)熱與散熱的平衡，產(chǎn)熱大于散熱則體溫升高，反之下降。安靜狀態(tài)下，機體產(chǎn)熱主要依賴內(nèi)臟，特別是肝臟，而散熱主要由皮膚完成。皮膚散熱的多少與局部微循環(huán)的血流量關(guān)系密切，增加血流量能夠促進散熱，反之則減少散熱。脾陽虛時機體因飲食減少而出現(xiàn)產(chǎn)熱不足，為了維持體溫，機體就會減少散熱，主要途徑就是調(diào)整全身血液分布，即減少皮膚表層微循環(huán)血流量，在抑制散熱的同時，又減少了血液中營養(yǎng)物質(zhì)的消耗，而內(nèi)臟部分因為血液內(nèi)運而呈現(xiàn)血流量增加的情況，也因此強化了相關(guān)內(nèi)臟功能活動，如肝臟內(nèi)各種生化反應(yīng)旺盛，產(chǎn)熱增加，從而達到維持體溫的目的。

機體血流分布受多種因素影響，其中TXA2和PGI2的關(guān)系較受重視[19-21]。TXA2是前列腺素轉(zhuǎn)化過程中所產(chǎn)生的一種不穩(wěn)定中間產(chǎn)物，具有強烈收縮血管的作用。PGI2主要產(chǎn)生于血管內(nèi)皮細胞，因其脂溶性較好，可以穿過血管內(nèi)膜直達肌層，引起血管舒張。通常認(rèn)為，T/P比值增大可收縮血管，增加血流阻力，而比值變小則舒張血管，降低血流阻力[22-23]。TXA2、PGI2及其比值在脾陽虛中的作用目前還較少報道。研究結(jié)果顯示，模型組TXA2水平變化不明顯，但PGI2濃度顯著下降，而T/P比值明顯增加，提示脾陽虛時血管舒張程度下降，收縮相對增強，從而導(dǎo)致內(nèi)臟血液外流困難，這可能就是脾陽虛時腹腔主要結(jié)構(gòu)血流增加的重要之一，但詳細機制還需深入探討。

綜上所述，脾陽虛時腹腔主要消化結(jié)構(gòu)存在血流增加現(xiàn)象，這可能是氣虛行血不利的客觀表現(xiàn)，其發(fā)生機制與T/P比值升高有關(guān)。

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（收稿日期：2017-01-10 本文編輯：祁海文）