研究連續(xù)切片聯(lián)合免疫組化染色在臨床Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌前哨淋巴結(jié)隱性轉(zhuǎn)移檢測中的應(yīng)用

石瑞芳

研究連續(xù)切片聯(lián)合免疫組化染色在臨床Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌前哨淋巴結(jié)隱性轉(zhuǎn)移檢測中的應(yīng)用

石瑞芳

目的 研究連續(xù)切片(SS)聯(lián)合免疫組化染色(IHC)在臨床Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌前哨淋巴結(jié)(SLN)隱性轉(zhuǎn)移檢測中的應(yīng)用價(jià)值。方法 240例確診為Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌的患者, 取術(shù)中獲取的560枚SLN,第2n片設(shè)為對照組［行SS聯(lián)合伊紅-蘇木素染色法(SS-HE)］, 第2n-1片設(shè)為觀察組［行SS、伊紅-蘇木素染色法聯(lián)合IHC(SS-HE-IHC)］, 各280片。對比兩組的SLN隱性轉(zhuǎn)移檢出率。結(jié)果 觀察組間距100 μm、200 μm、300 μm的SLN隱性轉(zhuǎn)移檢出率分別為8.93%、11.07%、7.86%, 均高于對照組的4.29%、6.07%、3.21%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 與SS-HE相比, SS-HE-IHC可以進(jìn)一步提高SLN隱性轉(zhuǎn)移的檢出率, 其最佳檢測距離為200 μm, 可將SS-HE-IHC應(yīng)用于臨床Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌SLN隱性轉(zhuǎn)移檢測中。

連續(xù)切片；免疫組化；乳腺癌；前哨淋巴結(jié)；隱性轉(zhuǎn)移

SLN指的是自乳房原發(fā)腫瘤向內(nèi)乳及腋窩區(qū)域淋巴池引流的第1個(gè)或多個(gè)淋巴結(jié)［1］。SLN活檢可以準(zhǔn)確的對乳腺癌患者腋窩淋巴結(jié)的病理學(xué)改變進(jìn)行評估, 有利于術(shù)中盡早確定需行腋窩清掃的部位［2］。術(shù)后行病理學(xué)檢測有助于進(jìn)一步驗(yàn)證淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移, 方便確立下一步治療方案。本研究對部分SLN行SS-HE-IHC, 旨在評價(jià)其用于乳腺癌SLN隱性轉(zhuǎn)移檢測中的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2015年4月～2016年6月于本院接受乳腺癌SLN活檢術(shù)并經(jīng)術(shù)中印片細(xì)胞學(xué)、病理學(xué)及術(shù)后常規(guī)病理檢查確診為Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌的患者240例作為研究對象。取術(shù)中獲取的560枚SLN, 應(yīng)用前哨淋巴結(jié)切割器, 每隔1.5 mm進(jìn)行切割, 后對切面行印片。第2n片設(shè)為對照組, 第2n-1片設(shè)為觀察組, 各280片。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床檢查腋窩淋巴結(jié)未提示伴有病灶轉(zhuǎn)移, 經(jīng)超聲檢查可見≤5 cm的原發(fā)腫瘤的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有腋窩手術(shù)史的患者；②同一乳腺多發(fā)腫瘤的患者。

1.2 方法 對照組行SS-HE, 將第2n片SLN包埋于蠟塊中進(jìn)行切片, 每隔100～150 mm留取3張石蠟白片。其中2張備用,擬行IHC, 1張行常規(guī)HE；觀察組行SS-HE-IHC。60℃烤片1 h, 兩次進(jìn)行二甲苯脫蠟, 5 min/次。按照無水乙醇-無水乙醇-95%-85%-75%乙醇的順序浸入梯度乙醇和蒸餾水中充分水化, 5 min/次。后行IHC, 過程為：①10 min內(nèi)源性過氧化物酶封閉, 磷酸緩沖液(PBS)沖洗；②10 min蛋白非特異性結(jié)合點(diǎn)封閉, PBS沖洗；③1 h一抗工作液孵育RT, PBS沖洗；④10 min二抗工作液孵育RT, PBS沖洗；⑤10 min SP工作液孵育RT, PBS沖洗；⑥D(zhuǎn)BA顯色3～7 min, 蘇木素復(fù)染。⑦采用1%鹽酸分化液分化10 s；⑧置于75%-85%-95%-100%-100%乙醇溶液中逐級脫水, 5 min/次, 二甲苯浸沒2次, 5 min/次, 加中性樹脂蓋玻片封片并晾干；⑨顯微鏡成像系統(tǒng)中拍片。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 檢測后, 對切片重新編號, 鏡下觀察并根據(jù)橫截面的最大值確定其轉(zhuǎn)移灶大小。單灶：單灶最大徑≥2 mm則判定為宏轉(zhuǎn)移；≤0.2 mm則判定為孤立腫瘤細(xì)胞；處于0.2～2 mm之間的轉(zhuǎn)移灶則視為微轉(zhuǎn)移。多灶：若轉(zhuǎn)移灶間距<最大轉(zhuǎn)移灶直徑, 則轉(zhuǎn)移灶直徑與轉(zhuǎn)移灶間距即為轉(zhuǎn)移灶大??；若轉(zhuǎn)移灶間距>最大轉(zhuǎn)移灶直徑, 則轉(zhuǎn)移灶的直徑即為其大小。與手術(shù)結(jié)果對照并對比兩組間距100 μm、200 μm、300 μm的SLN隱性轉(zhuǎn)移檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組間距100 μm、200 μm、300 μm的SLN隱性轉(zhuǎn)移檢出率分別為8.93%、11.07%、7.86%, 均高于對照組的4.29%、6.07%、3.21%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組的隱性轉(zhuǎn)移檢出率比較［n(%)］

3 討論

SLN陽性尤其是>2 mm的大體轉(zhuǎn)移是乳腺癌的重要預(yù)測因素。常規(guī)行SLN清掃術(shù)有助于及時(shí)了解腫瘤的發(fā)展趨勢并確定分期治療方案［3］。目前, 臨床尚無SLN隱性轉(zhuǎn)移的病理學(xué)檢測方案［4］。目前認(rèn)為, 對SLN的檢測至少應(yīng)發(fā)現(xiàn)>2 mm的轉(zhuǎn)移灶, 但切片方式、標(biāo)本置于蠟塊中的位置、轉(zhuǎn)移灶較深及淋巴結(jié)大小等因素均可能造成漏檢, 預(yù)后不良［5］。

SS-HE是最早應(yīng)用于檢測乳腺癌SLN隱性轉(zhuǎn)移的方式,其具有經(jīng)濟(jì)、操作簡單等優(yōu)勢, 但是對于SLN隱性微轉(zhuǎn)移的檢出率較低［6-8］。本研究對術(shù)中印片、病理學(xué)及術(shù)后常規(guī)病理檢查結(jié)果均為陰性的患者進(jìn)行了不同的病理檢測。結(jié)果顯示, 觀察組不同間距的SLN隱性轉(zhuǎn)移檢出率均高于對照組,且兩組以200 μm為檢測距離的檢出率較高, 提示SS-HEIHC對SLN隱性轉(zhuǎn)移的檢出率較高, 且兩種檢測方法的最佳檢測距離均為200 μm。目前認(rèn)為, SS可以顯著提高隱性轉(zhuǎn)移的檢出率, 但其近乎將SLN完全切光, 因此工作量較大、耗時(shí)長、費(fèi)用高等劣勢也隨之體現(xiàn)出來。IHC可以彌補(bǔ)HE病理檢測的不足, SS-HE-IHC可以在常規(guī)病理學(xué)檢查的基礎(chǔ)上進(jìn)一步檢測出20%的隱性微轉(zhuǎn)移病灶［9-12］。結(jié)合SLN病理檢測特點(diǎn)及我國國情, 作者推薦以下SLN病理檢測模式：①術(shù)中SLN的評估方向包括印片細(xì)胞學(xué)、淋巴結(jié)切面的視診及快速冰凍切片；②所有SLN必須測量大小、計(jì)數(shù)、記錄下放射性核素?cái)z取值及標(biāo)記是否藍(lán)染；③對于可疑轉(zhuǎn)移患者或高危患者, 可以間距為200 μm進(jìn)行SS-HE-IHC；④病理學(xué)報(bào)告需包含隱性轉(zhuǎn)移評斷標(biāo)準(zhǔn)并標(biāo)明其轉(zhuǎn)移方式及分類(微轉(zhuǎn)移、單個(gè)或成簇的細(xì)胞、普通轉(zhuǎn)移；是否伴有多灶轉(zhuǎn)移等)［13-16］；⑤淋巴結(jié)需保持≤2 mm的間距沿長軸切開,每枚SLN應(yīng)準(zhǔn)備≥1個(gè)完整的切面行HE。

綜上所述, 與SS-HE相比, SS-HE-IHC可以進(jìn)一步提高SLN隱性轉(zhuǎn)移檢出率, 其最佳檢測距離為200 μm, 可將SS-HE-IHC應(yīng)用于臨床Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌SLN隱性轉(zhuǎn)移檢測中。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.05.018

2017-01-22］

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