瘦肉精膠體金快速檢測

黃益鳴

（四川省營山縣淥井鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)管理站，四川 營山 637700）

瘦肉精膠體金快速檢測

黃益鳴

（四川省營山縣淥井鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)管理站，四川 營山 637700）

瘦肉精是指在飼料和畜牧生產(chǎn)中，國家禁止使用的β-腎上腺素受體激動劑類化合物，其包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等十幾種物質(zhì)。

瘦肉精屬于非蛋白質(zhì)激素，使用后會在豬體中形成殘留，尤其是在豬的肝臟等內(nèi)臟器官形成高殘留，并進(jìn)而危害人體健康。

瘦肉精主要導(dǎo)致人出現(xiàn)肌肉震顫、心慌、戰(zhàn)栗、頭疼、惡心、嘔吐等癥狀，其對高血壓、心臟病、甲亢和前列腺肥大患者危害更大，嚴(yán)重時可致人死亡。

1 瘦肉精檢測樣本

1.1 采集人員 樣品由不少于2人的檢測單位人員采集。采集樣品后，采集人員應(yīng)填寫采樣單。

1.2 采集比例 飼喂不同品牌、批次飼料的豬（牛、羊）2～3頭；運(yùn)輸?shù)呢i（牛、羊）每批次（同一車、船運(yùn)輸?shù)模?0頭以上的不少于3%的抽樣，50頭以下的抽樣1～2頭；屠宰場同一批豬（牛、羊）50頭以下的，至少抽檢1頭，50頭以上的，不少于3%的抽樣。豬（牛、羊）來自多個養(yǎng)殖場（戶）的，抽樣樣品應(yīng)涵蓋每個場（戶），每個場（戶）抽檢數(shù)量不少于1頭。

1.3 樣品液制備

1.3.1 尿樣 用干燥、潔凈的離心管或適當(dāng)容器采集50mL左右被檢畜尿液作樣品。如不立即進(jìn)行檢測，尿樣在2～8℃條件下可保存24h，保存樣品時要避免其失效和受污染。

1.3.2 組織樣本 組織樣本（包括被檢畜的瘦肉、肝臟、肺臟和腎臟）應(yīng)立即檢測或收集在塑料袋中及時送檢。若不能及時檢測，樣本在2～8℃條件下可保存24 h，-20℃冷凍條件下可保存一周，冷凍時忌反復(fù)凍融。

檢測前，組織樣本應(yīng)剪碎，并稱取1g裝入離心管中，加1mL提取液后蓋緊管蓋，放入沸水中加熱10～15min，然后取出離心管靜置至室溫，再移出上清液作樣品液備用。

1.3.3 飼料樣本 研碎飼料，稱取1g放入5mL離心管，然后加入2mL去離子水充分混勻，5min后，用濾紙過濾液體（如上清液仍然渾濁，則用5000～10000r/min離心5min），再移出上清液作樣品液備用。

1.4 樣品分裝保存 現(xiàn)場檢測為陰性的，樣品不需留樣。需要進(jìn)行確證的檢測樣品或風(fēng)險檢測樣品，應(yīng)分裝、封存后送檢和保存，分裝樣品分作三份，按檢測用樣、檢測單位留樣、被抽檢單位留樣進(jìn)行標(biāo)記，并粘貼加蓋檢測單位印鑒的封條，所有樣品的編號應(yīng)當(dāng)與被檢畜的耳標(biāo)號對應(yīng)。樣品運(yùn)輸、保存應(yīng)在低溫條件下進(jìn)行，長期保存的應(yīng)在-20℃以下凍存。

2 檢測項(xiàng)目

檢測被檢畜尿樣、組織和飼料中的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇?xì)埩簟?/p>

3 檢測卡質(zhì)量要求

瘦肉精膠體金檢測卡的靈敏度、穩(wěn)定性、交叉反應(yīng)等參數(shù)應(yīng)符合相關(guān)要求；假陽性率應(yīng)不高于5%，假陰性率為零；鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺檢測限應(yīng)不高于3μg/L，沙丁胺醇檢測限應(yīng)不高于5μg/L。

4 檢測原理

瘦肉精膠體金檢測卡應(yīng)用了競爭抑制免疫層析的原理，檢測時樣本中的瘦肉精在流動的過程中與膠體金（或膠體硒）標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和NC膜檢測線上瘦肉精-蛋白偶聯(lián)物的結(jié)合。如果樣本滲出液中瘦肉精含量大于3ng/mL，檢測線不顯色，則結(jié)果為陽性，若檢測線顯紅色，則結(jié)果為陰性。

5 操作步驟

5.1 待檢樣品液恢復(fù)至室溫。

5.2 將檢測卡平放，用滴管吸取待檢樣品液2～3滴垂直加于加樣孔后，開始計(jì)時。

5.3 3～5min后根據(jù)示意圖判定檢測結(jié)果，30min之后結(jié)果判定無效。

6 結(jié)果判定

6.1 陰性（-） 兩條紫紅色帶出現(xiàn)表示樣品中鹽酸克倫特羅低于3 ng/mL、萊克多巴胺低于3ng/mL、沙丁胺醇低于5ng/mL，或不含有。

6.2 陽性 （+） 檢測T線無顯色表示樣品中鹽酸克倫特羅高于3 ng/mL、萊克多巴胺高于3ng/mL、沙丁胺醇高于5ng/mL。

6.3 無效 未出現(xiàn)質(zhì)控線C線，表明操作不正確或檢測卡已失效。

7 檢測注意事項(xiàng)

檢測卡應(yīng)在打開1h內(nèi)使用；檢測時避免陽光直射和空調(diào)直吹；如果尿樣和組織提取樣本出現(xiàn)沉淀或渾濁物，應(yīng)離心后再檢測；不潔尿樣（如含有漂白劑、明礬等）可能導(dǎo)致產(chǎn)生錯誤結(jié)果，其應(yīng)離心后再檢測。

自來水、蒸餾水或去離子水不能作陰性對照；金標(biāo)卡儲存于陰涼的干燥處，切勿冷凍，其有效期為18個月。

8 處理

8.1 檢測陰性 檢測結(jié)果為陰性的，所檢測的豬（牛、羊）、豬（牛、羊）產(chǎn)品、飼料中不含瘦肉精，可按要求飼養(yǎng)、運(yùn)輸、屠宰或銷售。

8.2 檢測陽性 檢測結(jié)果為陽性或疑似陽性的，應(yīng)立即進(jìn)行二次快速檢測，如二次快速檢測結(jié)果為陽性，應(yīng)立即禁止同批豬（牛、羊）、同批豬（牛、羊）產(chǎn)品、飼料移動或?qū)ζ溥M(jìn)行封存，同時應(yīng)向當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)主管部門報(bào)告，并及時采樣進(jìn)行確證檢測。

如二次快速檢測結(jié)果為陰性的，需進(jìn)行第三次快速檢測，若檢測結(jié)果為陰性，應(yīng)按陰性結(jié)果處理，檢測結(jié)果為陽性的，按陽性結(jié)果處理。

8.3 確證陰性 確證檢測結(jié)果為陰性的，檢測機(jī)構(gòu)應(yīng)出具確證檢測報(bào)告，并及時告知送樣單位。

8.4 確證陽性 確證檢測結(jié)果為陽性的，送樣單位在收到確證檢測結(jié)果24h內(nèi)，應(yīng)書面向當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)主管部門報(bào)告，同時告知被抽樣單位。當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)主管部門應(yīng)根據(jù)報(bào)告及時查處違法單位，并通報(bào)公安機(jī)關(guān)。

9 快速檢測方法比較

瘦肉精膠體金檢測卡用于定性被檢畜尿液（如豬尿、牛尿、羊尿等）中的鹽酸克倫特羅殘留，整個檢測只需要5～10 min左右，其靈敏度為3 ng/mL。采用該檢測卡進(jìn)行檢測快速方便，適用于屠宰場、農(nóng)貿(mào)市場、超市等現(xiàn)場快速檢測。

采用瘦肉精ELISA試劑盒可檢測被檢畜尿、肌肉、肝臟及飼料中的鹽酸克倫特羅。該試劑盒可同時用于處理96個樣品，操作時間少于45min，靈敏度為 0.025～0.1 ng/mL，其相對于膠體金檢測卡檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，適用于實(shí)驗(yàn)室快速檢測。

S816.17

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1001-8964（2017）09-0037-02

2017-07-25