外周血自然殺傷T細(xì)胞表達(dá)水平與原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)的相關(guān)性研究

歐陽(yáng)麗紅,單士剛

(1.湖北省咸寧市中心醫(yī)院 湖北科技學(xué)院附屬第一醫(yī)院 生殖中心,湖北 咸寧,437100;2.湖北科技學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,湖北 咸寧,437100)

外周血自然殺傷T細(xì)胞表達(dá)水平與原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)的相關(guān)性研究

歐陽(yáng)麗紅1,單士剛2

(1.湖北省咸寧市中心醫(yī)院 湖北科技學(xué)院附屬第一醫(yī)院 生殖中心,湖北 咸寧,437100;2.湖北科技學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,湖北 咸寧,437100)

自然殺傷T細(xì)胞;原因不明習(xí)慣性流產(chǎn);外周血

有文獻(xiàn)[1]報(bào)道，自然殺傷T細(xì)胞參與了原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)(URSA)過(guò)程。自然殺傷T細(xì)胞(NKT)具有同時(shí)殺傷T細(xì)胞性質(zhì)的T細(xì)胞及細(xì)胞的能力，而CD56+、CD16+、CD3+則是檢測(cè)自然殺傷T細(xì)胞的標(biāo)志。自然殺傷T細(xì)胞具有細(xì)胞毒性作用和免疫調(diào)節(jié)作用[2]。為進(jìn)一步分析自然殺傷T細(xì)胞與不明習(xí)慣性流產(chǎn)的關(guān)系，本研究對(duì)100例原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)患者外周血中NKT細(xì)胞的表達(dá)水平進(jìn)行了研究，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2014年11月—2015年10月確診為原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)者100例為URSA組，患者平均年齡(35.1±3.2)歲，所有患者均符合下列納入標(biāo)準(zhǔn):① 丈夫精液常規(guī)無(wú)異常情況;②抗自身抗體檢測(cè)結(jié)果為陰性;③ 無(wú)生殖道感染;④ 內(nèi)分泌激素測(cè)試結(jié)果為正常;⑤ 夫妻雙方染色體核型正常;⑥ 連續(xù)3次或以上的自然流產(chǎn)。另選取同期無(wú)URSA正常體檢女性60例為正常組。URSA組進(jìn)一步分為URSA難免流產(chǎn)組、URSA未孕組各50例，正常組進(jìn)一步分為正常已生育組35例、正常妊娠組25例，平均年齡(34.1±2.2)歲，正常已生育組均正常生育過(guò)，其中正常生育1胎者27例，正常生育2胎者23例。

1.2 方法

本次研究所使用的儀器與溶血素均為美國(guó)貝克曼公司生產(chǎn)的 EPICS XL及 Optilyse No-wash lying solution;抗體組合為CD3-FITC/(CD16+CD56)-PE及相應(yīng)的同型對(duì)照抗體;研究所使用的試劑同樣為貝克曼公司生產(chǎn)。

清晨空腹取患者靜脈血2 mL行枸椽酸鈉抗凝處理，然后在樣品反應(yīng)罐中加入相應(yīng)的熒光抗體10 μL以及100 μL枸椽酸鈉抗凝全血混勻;然后選取類(lèi)型相同抗體作為陰性對(duì)照，行20 min避光孵育。加入2 mL PBS,以16 cm為半徑，以1 500 r/min行5 min離心處理，洗滌2次，去上清液;在完成上述操作過(guò)后加入500 μL PBS配成1.0×107/L的細(xì)胞懸液，待上機(jī)。

2 結(jié) 果

URSA未孕組、URSA難免流產(chǎn)組、正常已生育組、正常妊娠組外周血CD56+、CD16+、CD3+自然殺傷T細(xì)胞百分率依次為(2.5±1.4)%、(4.2±2.8)%、(5.0±2.8)%、(13.9±2.3)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在外周血NKT細(xì)胞百分率比較,URSA難免流產(chǎn)組患者是URSA未孕組的2倍，正常妊娠組是正常已生育組的3倍。

3 討 論

URSA是目前臨床婦產(chǎn)科常見(jiàn)的疾病之一，其發(fā)生率約占妊娠總數(shù)的1%～2%[3-4]。近年來(lái)，國(guó)際上已將URSA診斷標(biāo)準(zhǔn)中自然流產(chǎn)次數(shù)降低至2次或2次以上，這使得更多的患者診斷為URSA,亦間接促使URSA發(fā)生率進(jìn)一步提升[5-6]。URSA可以給患者身心健康、家庭團(tuán)結(jié)帶來(lái)巨大影響，由于其發(fā)生機(jī)制至今尚未完全明確，亦無(wú)特效治療方案，因此探索URSA相關(guān)研究成為婦產(chǎn)科學(xué)研究的重要方向之一。NKT細(xì)胞就是指CD3+CD16+CD56+細(xì)胞，其中CD3+是T淋

巴細(xì)胞的標(biāo)志物,CD16+CD56+是NK細(xì)胞的標(biāo)志物。既往研究認(rèn)為NKT細(xì)胞與多種疾病有著十分密切的關(guān)系。鄒原方等[7-8]報(bào)道，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者體內(nèi)CD3+CD56+NKT細(xì)胞數(shù)量下降和功能缺陷，這可能與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生密切相關(guān)[9-10]。

通常情況下，胚胎抗原處于耐受狀態(tài)，一旦免疫調(diào)節(jié)出現(xiàn)了異常，胚胎就有可能會(huì)受到免疫排斥作用，進(jìn)而引發(fā)習(xí)慣性流產(chǎn)的發(fā)生。國(guó)外研究資料[11-12]顯示，自然殺傷T細(xì)胞水平的下降可能與Th1介導(dǎo)自身免疫疾病有關(guān);此外，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡及再生障礙性貧血等疾病也有可能會(huì)造成NKT細(xì)胞水平下降[13-14]。

本研究結(jié)果顯示,URSA未孕組患者外周血中的NKT細(xì)胞表達(dá)水平與正常已生育婦女相比明顯更低，作者認(rèn)為自然殺傷T細(xì)胞對(duì)正常妊娠的維持有一定的促進(jìn)作用[15];其次，正常妊娠組和正常已生育組自然殺傷T細(xì)胞表達(dá)水平并無(wú)顯著差異，這就從側(cè)面提示原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)患者先天或后天自然殺傷T細(xì)胞表達(dá)異常，因此作者認(rèn)為自然殺傷T細(xì)胞與原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)的發(fā)生存在著相對(duì)的必然性關(guān)系。另一方面，由于自然殺傷T細(xì)胞具有分泌Th2以及Th1型細(xì)胞因子的作用，所以有一定的可能性會(huì)對(duì)其細(xì)胞平衡產(chǎn)生影響，由于原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)同Th1介導(dǎo)的自身免疫疾病的免疫基礎(chǔ)具有較高的相似性[16];相關(guān)資料[17-18]報(bào)道顯示，小鼠試驗(yàn)中與本次研究的結(jié)論相似，故認(rèn)為懷孕期間自然殺傷T細(xì)胞的數(shù)量減少，能夠?qū)е耇h1細(xì)胞因子介導(dǎo)的細(xì)胞免疫增強(qiáng)，最終造成原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)的發(fā)生。

與正常健康的生育婦女相比較，正常妊娠自然殺傷T細(xì)胞表達(dá)相對(duì)較高，與習(xí)慣性流產(chǎn)患者相比則顯著更高(P<0.05),這就提示在懷孕后，自然殺傷T細(xì)胞會(huì)有較大幅度的提高，但提高的幅度并不足以發(fā)揮免疫耐受的作用。

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A

1672-2353(2017)17-223-02

10.7619/jcmp.201717084

2017-03-12

湖北省衛(wèi)計(jì)生委青年人才項(xiàng)目(WJ2015Q034)

單士剛