中草藥在奶牛乳房炎防治中的應(yīng)用

文│姚燕 李展（貴州省畢節(jié)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

中草藥在奶牛乳房炎防治中的應(yīng)用

文│姚燕 李展（貴州省畢節(jié)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

奶牛的乳房一直處于高度分泌乳汁狀態(tài)，乳房發(fā)病在所難免，因此乳房炎成為奶牛場最常見的疾病。由于乳房炎癥由輕到重是逐步積累的，待外觀看到癥狀時(shí)炎癥已經(jīng)相對嚴(yán)重了，此時(shí)使用抗生素會(huì)嚴(yán)重影響乳汁的品質(zhì)。近年來，乳房炎診治成為業(yè)內(nèi)一個(gè)熱門的研究主題和業(yè)內(nèi)促進(jìn)奶牛養(yǎng)殖發(fā)展的重要課題。建議在飼養(yǎng)管理方面，應(yīng)通過消除奶牛生活環(huán)境中致病因素，減少機(jī)械性過度擠奶導(dǎo)致乳導(dǎo)管未及時(shí)關(guān)閉，奶牛舍內(nèi)及運(yùn)動(dòng)場被糞、尿所污染等因素來預(yù)防乳房炎。還可以利用中草藥副作用小、殘留低、來源方便、不易產(chǎn)生耐藥性、對環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)治療乳房炎。

為了更好對貴州省畢節(jié)地區(qū)奶牛乳房炎進(jìn)行治療和預(yù)防，筆者結(jié)合貴州當(dāng)?shù)刂胁菟幍墓πШY選和評價(jià)臨床效果好的中草藥，借鑒國內(nèi)對中草藥消炎抗菌的一些研究成果，選取貴州當(dāng)?shù)鼐哂锌咕鬃饔玫?種中草藥，運(yùn)用水煎法提取有效成分；并對從畢節(jié)市及周邊地區(qū)奶牛場采集到的奶樣做細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定，分離得到引起乳房炎的2種主要致病菌；用中草藥做體外抑菌試驗(yàn)及臨床治療試驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)臨床用藥并確定有效的單味藥方及復(fù)方藥方。結(jié)果表明：馬齒莧、魚腥草、蒲公英3味中藥對引起奶牛乳房炎的2種病原菌的抑菌效果較好，臨床治療試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)馬齒莧、魚腥草、蒲公英3味中藥聯(lián)合使用的臨床效果最為理想。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料。

（1）奶樣采集。先清洗奶牛乳房并消毒，輕輕按摩乳房，然后擠掉前3把奶，然后把乳房中的奶擠入預(yù)先高壓滅菌好的離心管內(nèi)，密封標(biāo)記低溫保存，盡快做實(shí)驗(yàn)室檢測。

（2）試劑。采用營養(yǎng)肉湯和5%綿羊鮮血平板、THB培養(yǎng)基等常用培養(yǎng)基，相關(guān)試劑等均按標(biāo)準(zhǔn)配制，診斷液購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院中獸醫(yī)研究所藥廠。

（3）中草藥。魚腥草、馬齒莧、黃柏、板藍(lán)根、蒲公英、金銀花等，均為貴州當(dāng)?shù)刂胁菟帯?/p>

2.試驗(yàn)方法。

（1）病原菌分離鑒定。先用診斷液對奶樣進(jìn)行診斷?；旌弦壕鶆?，流動(dòng)性好，無絮狀物屬于陰性（-）；流動(dòng)性稍差，有少許的沉淀物或絮狀物產(chǎn)生屬于弱陽性（+）；流動(dòng)性很差，有明顯的絮狀物或沉淀物產(chǎn)生屬于陽性（++）；絮狀物或沉淀物凝集成膠團(tuán)狀屬于強(qiáng)陽性（+++或++++）。對屬于陽性（++）及以上的奶樣，接種在5%綿羊血瓊脂平板上，在37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24小時(shí)，經(jīng)過染色觀察初步確定菌落類型。再根據(jù)菌落生長特性利用不同培養(yǎng)基進(jìn)行高選擇性培養(yǎng)，在37℃培養(yǎng)箱里培養(yǎng)18～24小時(shí)，經(jīng)革蘭氏染色后鏡檢確定細(xì)菌的種類。

（2）細(xì)菌的生化試驗(yàn)。將在不同培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌，依據(jù)生長特點(diǎn)，染色鏡檢結(jié)果等初步確定為可疑的細(xì)菌，并進(jìn)行相應(yīng)的生化實(shí)驗(yàn)，包括糖類分解實(shí)驗(yàn)、靛基質(zhì)實(shí)驗(yàn)、MR/VP實(shí)驗(yàn)、硫化氫實(shí)驗(yàn)、氧化酶實(shí)驗(yàn)、觸酶實(shí)驗(yàn)、脲酶試驗(yàn)等。

（3）細(xì)菌鑒定。

球菌鑒定：在高鹽培養(yǎng)基上形成淡橙黃色菌落，且分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇；顯微鏡下觀察符合單個(gè)或成雙以葡萄狀排列，在血瓊脂平板培養(yǎng)基上形成圓形，菌落為金黃色、灰白色或檸檬色，周圍有明顯的β-溶血環(huán)，不分解棉籽糖和水楊苷；七葉苷試驗(yàn)陰性的細(xì)菌；明膠試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)、凝固酶試驗(yàn)陽性的即為金黃色葡萄球菌。

桿菌鑒定：不分解尿素、VP實(shí)驗(yàn)陰性、枸櫞酸鹽實(shí)驗(yàn)陰性、硫化氫實(shí)驗(yàn)陰性、MR實(shí)驗(yàn)陽性、靛基質(zhì)實(shí)驗(yàn)陽性；鏡檢形態(tài)兩端鈍圓、無芽孢的革蘭氏陰性短桿菌；伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上形成黑色帶金屬光澤的菌落，分解葡萄糖、麥芽糖、甘露醇的即鑒定為大腸桿菌。

（4）中草藥液制備。分別稱取各單味中藥100克，浸泡在100毫升蒸餾水中，大火煮開沸騰后文火慢煮30分鐘，共水煎2次，用6層紗布過濾，煎煮2次合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至100毫升，藥液濃度約1克/毫升，121℃高壓滅菌30分鐘后冷藏保存。

（5）細(xì)菌接種與培養(yǎng)。鏈球菌選用2%小牛血清培養(yǎng)基，金黃色葡萄球菌和大腸桿菌選用肉湯培養(yǎng)基，接種后置于37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)。后將培養(yǎng)后的菌液用生理鹽水稀釋，保證菌液的濃度大約在1.5×108cfu/毫升，無菌備用。

（6）濃縮中草藥液稀釋。先測定最小抑菌濃度，然后進(jìn)行不同培養(yǎng)基與100%中藥煎劑進(jìn)行倍比稀釋，稀釋度為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16……1∶2048，加入1%葡萄糖、0.002%品紅，121℃高壓滅菌15分鐘。設(shè)置試驗(yàn)組12支試管，對照組12支試管兩組，試驗(yàn)組和對照組的前11支稀釋方法相同，即加入2毫升中藥，混合均勻后，吸出2毫升加入第2支，依次類推，一直加到11支吸出2毫升倒掉，試驗(yàn)組第12支做菌液對照，對照組第12支不加中藥，也不加菌液。試驗(yàn)組每支試管內(nèi)加稀釋的菌液0.1毫升，在37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)，根據(jù)試管中的顏色變化計(jì)算最小抑菌濃度，此試驗(yàn)重復(fù)做3次，最后采用平均值確定最小抑菌濃度。

（7）臨床試驗(yàn)。根據(jù)確定的最小抑菌濃度，篩選出抑菌作用最強(qiáng)的單味中藥，將患有乳房炎的奶牛進(jìn)行分組，分別一一對應(yīng)進(jìn)行臨床治療，觀察治療效果，每個(gè)實(shí)驗(yàn)均設(shè)對照組，篩選出最佳治療藥方，指導(dǎo)臨床用藥。

二、結(jié)果

1.乳房炎檢測結(jié)果。從采集的584份乳樣中，用乳房炎診斷液檢測，共檢測出來乳房炎221份，占到總樣品的37.84%。

2.細(xì)菌的分離鑒定。通過乳房炎診斷液檢測、分離、培養(yǎng)等步驟，最終分離得到89株致病菌，主要有大腸桿菌和金色葡萄球菌兩種，其中大腸桿菌占35.96%，金黃色葡萄球菌占64.04%。

3.抑菌強(qiáng)弱對比。選取的中草藥濃縮液對大腸桿菌的最小抑菌濃度依次為：馬齒莧＜魚腥草＜蒲公英＜金銀花＜板藍(lán)根＜黃柏。

選取的中草藥濃縮液對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度依次為：魚腥草＜金銀花＜蒲公英＝黃柏＜馬齒莧＜板藍(lán)根。

對于大腸桿菌、金黃色葡萄球菌均有抑制作用，且抑菌效果由強(qiáng)到弱

依次為馬齒莧、魚腥草、蒲公英。

4.臨床治療效果。將上面抑菌效果最強(qiáng)的三種中藥單味藥、組方分成七組：魚腥草＋蒲公英；馬齒莧＋魚腥草＋蒲公英；馬齒莧；魚腥草；蒲公英；馬齒莧＋魚腥草；馬齒莧＋蒲公英。將患有乳房炎的奶牛相應(yīng)的也分成七組，每組30頭，每10頭為1個(gè)重復(fù)，治療量為每次灌服1000毫升，每天2次，7天1個(gè)療程，連用3個(gè)療程。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次求平均值，且均設(shè)對照組，觀察臨床治愈率，結(jié)果見表1。

表1 中藥對于乳房炎的臨床治療效果

三、結(jié)論

乳房炎即乳癰，發(fā)生主要原因是飼養(yǎng)不當(dāng)，臥床潮濕不潔，細(xì)菌滋生而侵害乳房，導(dǎo)致乳房腫脹，病牛因腫痛拒絕擠奶，而導(dǎo)致癥狀加劇，加之?dāng)D奶后乳頭管未完全關(guān)閉，使微生物上行侵入乳腺組織。因此本研究選取了6種具有活血化瘀、消炎殺菌、涼血消癰、清熱燥濕、瀉火解毒的中藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

細(xì)菌的分離培養(yǎng)鑒定表明，引起畢節(jié)及周邊地區(qū)奶牛乳房炎的主要細(xì)菌為大腸桿菌及金黃色葡萄球菌，單味藥抑菌試驗(yàn)中，馬齒莧、魚腥草、蒲公英對上述兩種菌有較好的抑菌作用，而板藍(lán)根、金銀花、黃柏的抑菌作用較差，這可能是由藥物有效成分的結(jié)構(gòu)和特性所決定的，復(fù)方中同時(shí)含有馬齒莧、魚腥草、蒲公英這三種中藥對奶牛乳房炎的臨床治愈效果最好，而同時(shí)含有兩種中藥的治療效果次之，表明對于抑菌作用較強(qiáng)的三味單味中藥聯(lián)合使用，會(huì)增強(qiáng)其藥效進(jìn)而更好的治療奶牛乳房炎，說明這三味中藥之間不存在配伍禁忌，具體機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。