菌糠用作菌劑吸附劑的初步探索*

劉冬華，伍善東，肖 蕾，孔利華

（湖南省微生物研究院植保室，湖南 長沙 410009）

〈生理生化〉

菌糠用作菌劑吸附劑的初步探索*

劉冬華，伍善東**，肖 蕾，孔利華

（湖南省微生物研究院植保室，湖南 長沙 410009）

為了獲得適合于解淀粉芽孢桿菌4-3菌液的吸附劑，分別選用麥麩、草炭、菌糠吸附解淀粉芽孢桿菌4-3發(fā)酵菌液，進(jìn)行了常溫下的保藏試驗(yàn)。結(jié)果表明，以菌糠作為吸附劑保藏效果最好，保藏14個(gè)月時(shí)，處理4的活菌數(shù)最多，為6.5×108CFU·mL-1，草炭次之，麥麩最差。

菌糠；吸附劑；保藏

菌糠（fungus chaff）是在食用菌生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的一類廢棄物。它是由食用菌菌絲在培養(yǎng)料中充分生長產(chǎn)生子實(shí)體，在子實(shí)體采收完后遺留下來的培養(yǎng)料殘余，故而又稱之為菇渣 （mushroom residue）。隨著食用菌工廠化栽培的發(fā)展，產(chǎn)生大量菌糠，對廢棄菌渣的再利用研究已成為近年研究熱點(diǎn)。如李碧瓊等[1]利用廢菌渣栽培姬松茸；談峰[2]利用木腐菌菌糠栽培雙孢蘑菇；張丕奇等[3]利用黑木耳菌渣栽培黑木耳；劉明廣等[4]利用杏鮑菇菌渣作為有機(jī)肥栽培雪菜；秦翠靜等[5]在飼料中應(yīng)用菌糠做為反芻動(dòng)物的粗飼料；李勝杰等[6-7]利用蘆筍桿菌渣作為有機(jī)肥栽培黃瓜和辣椒。本文分別選用菌糠、草炭和麥麩做為菌劑的吸附劑，比較了菌糠、草炭和麥麩的保藏效果，其中以菌糠作為吸附劑保藏效果最好，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）4-3，為從油菜中分離的內(nèi)生菌，保藏的編號(hào)為CCTCC

1.2 培養(yǎng)基配方及其培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基配方：甘露醇1.8 g、胰蛋白胨1.6 g、NaCl 0.4 g、磷酸二氫鉀0.4 g、硫酸鎂0.3 g、1%鉬酸鈉溶液0.4 mL、1%的檸檬酸鐵溶液0.5 mL、1%硫酸錳溶液0.2 mL，500 mL三角瓶裝量100 mL，pH7.2。培養(yǎng)溫度32℃，轉(zhuǎn)速220 r·min-1。

1.3 吸附劑的處理

將麥麩、草炭、菌糠烘干，粉碎后過40目篩。將3種吸附劑分別稱取200 g分裝于聚乙烯塑料袋中，每種9袋，用套環(huán)封蓋后于126℃滅菌60 min。每次滅菌后需將袋中可能結(jié)塊的內(nèi)容物充分拍碎后再進(jìn)行下一次滅菌。經(jīng)反復(fù)滅菌5次后將袋內(nèi)吸附劑充分拍勻后備用。

1.4 吸附菌液后的保藏和活菌計(jì)數(shù)

將發(fā)酵好的解淀粉芽孢桿菌4-3菌液，經(jīng)活菌計(jì)數(shù)為2.60×109，分別按以下處理加入菌液，每個(gè)樣品重復(fù)3次，用封口機(jī)密封后，將菌劑充分拍勻，常溫條件下保藏。

處理1：草炭200 g、菌液100 mL；處理2：草炭200 g、菌液150 mL；處理3：草炭200 g、菌液200 mL；處理4：菌糠200 g、菌液100 mL；處理5：菌糠200 g、菌液150 mL；處理6：菌糠200 g、菌液200 mL；處理7：麥麩200 g、菌液100 mL；處理8：麥麩200 g、菌液150 mL；處理9：麥麩200 g、菌液200 mL。

將做好的各個(gè)菌液吸附劑樣品，任意三選一剪開袋口，用接種鏟取出，準(zhǔn)確稱取1.00 g至放了50粒玻璃珠的100 mL無菌水三角瓶中，200 r·min-1振蕩30 min，吸取振蕩好的菌液0.5 mL至4.5 mL無菌水中進(jìn)行稀釋，稀釋至10-9，每次吸取前均將稀釋菌液在振蕩器上振蕩1 min，隨后從10-7、10-8、10-9各吸取0.5 mL稀釋菌液于滅過菌的平皿中，每平行3皿，然后加入20 mL左右滅菌培養(yǎng)基（約45℃），充分搖勻，待其完全冷卻后，將平皿倒置于28℃恒溫箱中培養(yǎng)3 d～4 d，計(jì)數(shù)活菌數(shù)。每間隔1個(gè)月取樣1次進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。

1.5 保藏菌液吸附劑水分含量的測定

將保藏的各個(gè)菌液吸附劑樣品，各處理隨機(jī)選1袋，剪開袋口，用滅菌的接種鏟取出樣品，準(zhǔn)確稱取1.0 g～2.0 g樣品到干凈平皿中，編號(hào)，將取出的樣品置于105℃電熱恒溫干燥箱中烘干至恒重，準(zhǔn)確稱重并記錄，取完樣品后馬上將保藏樣品封口，重復(fù)取樣2次并記錄結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 吸附菌液后的保藏和活菌計(jì)數(shù)

各種菌液吸附劑樣品在各保藏時(shí)期的活菌計(jì)數(shù)檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

各處理在常溫陰涼處保藏的前3個(gè)月，菌劑菌數(shù)呈緩慢增加狀態(tài)，在保藏3個(gè)月時(shí)達(dá)到峰值，其中以處理5的活菌數(shù)最多，為127.0×108CFU·mL-1，隨著保藏時(shí)間的增加，各處理活菌數(shù)逐漸減少。保藏5個(gè)月時(shí)，處理 4的活菌數(shù)最多，為9.6×108CFU·mL-1；當(dāng)保藏14個(gè)月時(shí)，處理4的活菌數(shù)最多，為6.5×108CFU·mL-1，當(dāng)菌劑水分含量越低時(shí)，則菌劑菌數(shù)變化趨勢越平穩(wěn)。

表1 各處理不同保藏時(shí)間的活菌數(shù)Tab.1 Number of viable bacteria in the different treatments and preservation time

在菌劑的保藏過程中，活菌計(jì)數(shù)時(shí)顯示麥麩最容易受到霉菌污染，菌糠則易受細(xì)菌類雜菌污染（原因不詳）。在保藏14個(gè)月時(shí)，以麥麩作為吸附劑的處理7～處理9，因?yàn)槊咕喽鴽]有進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。

解淀粉芽孢桿菌4-3發(fā)酵菌液分別經(jīng)菌糠、草炭和麥麩這三種吸附劑吸附后，經(jīng)過14個(gè)月的保藏試驗(yàn)，進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)后確定菌糠做為吸附劑的保藏效果最好，草炭次之，麥麩最差，菌糠用作解淀粉芽孢桿菌4-3的吸附劑是完全可行的。

2.2 各處理水分含量的測定

各處理水分含量的差異除了由添加的菌液量不同造成的，還可能是由于封口的套環(huán)蓋留有一小口，具一定的透氣性，在滅菌時(shí)有蒸汽進(jìn)入造成。結(jié)果顯示麥麩最容易吸水，菌糠次之，草炭最不易吸水，各處理水分含量見表2。

菌劑的含水量（菌液添加量）與菌數(shù)的變化呈現(xiàn)含水量越少菌數(shù)變化越穩(wěn)定的趨勢?？梢栽诒ＷC菌劑活菌數(shù)量的前提下，盡可能降低菌劑含水量，會(huì)更有利于菌劑的保藏。

表2 各處理的水分含量Tab.2 Moisture content of the different treatment

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明菌糠是1種良好的吸附劑，可以用作菌劑、菌肥吸附劑進(jìn)行下一步的試驗(yàn)。

解淀粉芽孢桿菌4-3菌液使用菌糠吸附后，3個(gè)處理在常溫保藏14個(gè)月后的活菌數(shù)與保藏初始時(shí)的活菌數(shù)變化不大，均可達(dá)108CFU·mL-1以上，其中處理4活菌數(shù)變化與保藏初始時(shí)的活菌數(shù)基本相當(dāng)，說明菌糠作為吸附劑的穩(wěn)定性很好。吸附劑的穩(wěn)定性與菌液的添加量（菌劑含水量）密切相關(guān)，它們之間的相關(guān)性有待于進(jìn)一步研究。

[1]李碧瓊，陳政明，凌龍振，等.利用廢菌渣栽培姬松茸優(yōu)良菌株的篩選試驗(yàn)[J].中國食用菌，2016，35（5）：9-11.

[2]談峰.不同木腐菌菌糠對雙孢蘑菇生長和產(chǎn)量的影響[J].中國食用菌，2016，35（5）：12-16.

[3]張丕奇，戴肖東，韓增華，等.黑木耳菌渣再利用栽培黑木耳試驗(yàn)[J].食用菌，2016，38（4）：24-25.

[4]劉明廣，陳毛華，丁寅寅，等.杏鮑菇菌渣有機(jī)肥栽培雪菜試驗(yàn)[J].食用菌，2016，38（3）：67-68.

[5]秦翠靜，程書梅，廉紅霞，等.菌糠在飼料中的應(yīng)用研究[J].食用菌，2016，221（2）：5-6.

[6]李勝杰，魏云輝，胡中娥，等.蘆筍桿菌渣有機(jī)肥在黃瓜栽培上的應(yīng)用效果[J].中國食用菌，2016，35（2）：28-31.

[7]魏云輝，李勝杰，胡中娥，等.富硒蘆筍稈菌渣有機(jī)肥在辣椒上的應(yīng)用研究[J].食用菌，2016，38（2）：79-82.

Study on Fungus Chaff Used as Inoculants Adsorbent

LIU Dong-hua,WU Shan-dong,XIAO Lei,KONG Li-hua
(Hunan Institute of Microbiology,Changsha 410009,China)

In order to obtain the optimal adsorbent of Bacillus amyloliquefaciens 4-3,the wheat bran,peat and mushroom substrate were separately used as adsorbent of B.amyloliquefaciens 4-3,meanwhile,the preservation test was performed at room temperature.The results showed that the best adsorbent was the mushroom substrate in the preservation test,and the viable count of treatment 4 was the best among them,which was 6.5×108CFU·mL-1.The second one was peat and the worst one was wheat bran.

fungus chaff;adsorbent;preservation

S646.9

A

1003-8310（2017）02-0030-03

10.13629/j.cnki.53-1054.2017.02.009

湖南省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2015NK3056）。

劉冬華（1956-），男，本科，副研究員，主要從事植物保護(hù)與肥料研究。E-mail:505212109@qq.com

**通信作者：伍善東（1978-），男，本科，工程師，主要從事植物保護(hù)與微生物肥料研究。E-mail:1059995305@qq.com

2017-01-23M2014320。