HPLC測(cè)定清心安眠顆粒中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量

閆 冬田 原陳 雪翟延君

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110032

HPLC測(cè)定清心安眠顆粒中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量

閆 冬1田 原2陳 雪1翟延君1

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110032

目的：建立HPLC法測(cè)定清心安眠顆粒中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量。方法：采用Agilent TC－C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－水（65∶35）；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；流速：1 mL/min；柱溫：30℃。結(jié)果：五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分別在0.62～3.1μg（r＝1）、3.8～19μg（r＝1）、1.98～9.9μg（r＝0.9997）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。平均加樣回收率：五味子醇甲為99.88%，RSD為1.45%（n＝6）；五味子甲素為102.08%，RSD為2.25%（n＝6）；五味子乙素為101.53%，RSD為0.76% （n＝6）。結(jié)論：本法操作簡(jiǎn)單、快速、重現(xiàn)性好，可用于清心安眠顆粒的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；清心安眠顆粒；五味子醇甲；五味子甲素；五味子乙素

清心安眠顆粒是在遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院著名老中醫(yī)彭靜山教授的臨床經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上經(jīng)田維柱教授加減化裁改進(jìn)而成的有效方劑。由五味子，枸杞，酸棗仁和百合組成，具有清心除煩，安神定志的功效。為了有效地控制該顆粒的質(zhì)量，保證臨床用藥的療效穩(wěn)定、安全可靠，采用高效液相色譜測(cè)定清心安眠顆粒中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量。該方法靈敏度高，操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可用于清心安眠顆粒的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀（G1379A真空脫氣機(jī)，G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器，G1315A柱恒溫箱，G1311A四元梯度泵，G1315B二極管陣列檢測(cè)器，Agilent B.04.03化學(xué)工作站）；HN101－3A型電熱鼓風(fēng)干燥箱；AE－240電子分析天平；DK－98－1型電熱恒溫水浴箱。

1.2 試藥 五味子、酸棗仁藥材 （均購(gòu)自河北安國(guó)，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)翟延君教授鑒定）五味子醇甲對(duì)照品 （批號(hào)：110857－200507）、五味子甲素（批號(hào)：0764－200107）、五味子乙素（批號(hào)：110765200306）均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；水為娃哈哈純凈水，甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Agilent TC－C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－水（65：35）；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；流速：1 mL/min；柱溫：30℃。在此條件下，供試品中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素與其他組分峰均能達(dá)到基線分離，保留時(shí)間分別為五味子醇甲約為7.7min；五味子甲素約為29.1min；五味子乙素約為47.8min，理論板數(shù)按中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素峰計(jì)均不低于2000；分離度均大于2。符合中國(guó)藥典2010年版一部附錄系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。

2.2 樣品制備

2.2.1 陰性對(duì)照試驗(yàn) 取處方量以相同工藝制備的陰性對(duì)照 （無(wú)五味子），按上述方法測(cè)定，結(jié)果為：陰性對(duì)照色譜圖中在與五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)吸收即色譜峰的出現(xiàn)，結(jié)果表明陰性對(duì)照 （含百合、枸杞子、酸棗仁）用相同制備方法下提取的成分在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)吸收，故其五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素成分測(cè)定無(wú)干擾。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取五味子醇甲對(duì)照品、五味子甲素對(duì)照品、五味子乙素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，分別加甲醇制成每1mL含0.31mg的溶液、每1mL含1.9mg的溶

液、每1mL含0.99mg的溶液，混合即得。

2.2.3 供試品溶液的制備［1］取顆粒劑3g，精密稱(chēng)定，加甲醇50m L，精密稱(chēng)定，超聲提取30min，再精密稱(chēng)定，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取對(duì)照品溶液5μL與供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。對(duì)照品、供試品、陰性液色譜見(jiàn)圖1。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對(duì)照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素色譜峰面積，以進(jìn)樣量X（μg）與峰面積Y，得回歸方程為：五味子醇甲Y＝1209X＋23.35，r＝1；五味子甲素Y＝380.46X－2.27，r＝1；五味子乙素Y＝173.53X－2.9，r＝0.9997；且五味子醇甲在0.62～3.1μg，五味子甲素在3.8～19μg，五味子乙素在1.98～9.9μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.3.2 精密度試驗(yàn) 分別取上述對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定五味子醇甲R(shí)SD為0.112%；五味子甲素為0.94%；五味子乙素為0.64%。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述供試品溶液，分別在0、2、4、6、8h進(jìn)樣，測(cè)定五味子醇甲R(shí)SD為0.48%；五味子甲素1.93%；五味子乙素1.59%，表明樣品在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品6份，每份約3g，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備，進(jìn)樣測(cè)定五味子醇甲平均含量為1.077mg/g、RSD為1.87%（n＝6）、五味子甲素平均含量為0.178mg/g、RSD＝2.27%（n＝6）、五味子乙素平均含量為0.374mg/g、RSD＝2.16%（n＝6）。

2.3.5 加樣回收試驗(yàn) 分別取已知含量供試品（五味子醇甲平均含量為0.538mg/g、五味子甲素平均含量為0.089mg/g、五味子乙素平均含量為0.187mg/g），加入定量的五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對(duì)照品溶液，按 “2.1”項(xiàng)下的方法測(cè)定，計(jì)算其五味子醇甲回收率為9.88%，RSD為1.45%（n＝6）、五味子甲素回收率為102.08%，RSD＝2.25%（n＝6），五味子乙素為101.53%，RSD＝0.76%（n＝6）結(jié)果如表（1）。

表1 五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素加樣回收率

2.4 樣品測(cè)定 分別吸取對(duì)照品和3批供試品溶液，按 “2.1”項(xiàng)下的方法測(cè)定供試品中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量，其結(jié)果 （n＝3）如表2。

表2 樣品的含量測(cè)定

3 討論

3.1 提取方法的選擇 比較張彥東等［2］用氯仿萃取法和李正國(guó)等［3］用甲醇超聲的提取方法，結(jié)果證明后者提取較完全，且方法簡(jiǎn)單易行，所以選擇甲醇超聲提取法。

3.2 流動(dòng)相的選擇 比較并參考乙腈－甲醇－水（15∶15∶10）［4］、甲醇－水 （85：15）［5］、甲醇－水（75：25）［10］等方法及摸索試驗(yàn)，最終確定以甲醇－水 （65：35）為流動(dòng)相可以使清心安眠顆粒中五味子三種成分實(shí)現(xiàn)較好分離。

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 曾試驗(yàn)220nm［4］、224nm［10］、245nm［5］和254nm［9、11］等檢測(cè)波長(zhǎng)，結(jié)果顯示220nm和224nm處吸收較大，但是容易拖尾，比較245nm和254nm，后者更為穩(wěn)定且常用，參考文獻(xiàn)［2－12］，故選擇254nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

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Determination of Schisandrin、Deoxyschisandrin andγ－Schisandrin Qingxinanmian granules by RP－HPLC

YAN Dong1，TIAN Yuan2，Chen Xue1，ZHAI Yan－jun1
1.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，China；2.Affiliated Hospital of Liaoning University o f Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，China

Objective：To setup a determination of Schisandrin，Deoxyschisandrin andγ－Schisandrin in qingxinanmian granules by HPLC.M ethod：These components were separated through Agilent TC－C18（250 mm×4.6mm，5μm）column with methanol water（65：35）by volume as a mobile phase.The flow rate was 1m l/min，and the detection wavelength was 254nm，and temprature was 30℃.Results：The linear range of Schisandrin，Deoxyschisandrin andγ－Schisandrin were 0.62～3.1μg，3.8～19μg and 1.98～9.9μg，respectively.The average recovery was 99.88%with RSD 1.45%（n＝6）for Schisandrin，102.08%with RSD 2.25%（n＝6）for Deoxyschisandrin and 101.53%with RSD 0.76%（n＝6）forγ－Schisandrin respectively.Conclusion：The method is simple，quick and rapid with good reproducibility.It can be used for the quality control of qingxinanmian granules.

HPLC；Qingxinanmian granules；Schisandrin；Deoxyschisandrin；γ－Schisandrin

R286

A

1007－8517（2013）12－0022－03

2013.04.17）

閆冬（1987－）、女（漢族）、碩士研究生、研究方向：中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)研究。Tel：13079235441 E－mail：yandong871111＠163.com

翟延君Tel：13019499386 E－mail：lnzyzyj＠sohu.com