蛹蟲草菌絲液體培養(yǎng)條件研究

郭星

摘 要：本試驗對蛹蟲草菌絲培養(yǎng)條件進(jìn)行了研究，確定最佳的培養(yǎng)條件是：PH值7.0，振蕩培養(yǎng)時間7天，培養(yǎng)溫度22℃，培養(yǎng)基裝液量100ml/瓶，搖床振頻120～140r/min。菌絲體表現(xiàn)為菌球分布均勻，密度疏密適中，大小適宜，菌球組織緊實，干重可達(dá)到0.5g/100ml。

關(guān)鍵詞：蛹蟲草 液體發(fā)酵 菌絲干重

蛹蟲草，是真菌和蟲體相互結(jié)合的一種藥用真菌，多寄生在鱗翅目蛹和幼蟲體內(nèi)。經(jīng)研究，其營養(yǎng)價值和藥用價值可以和冬蟲夏草相媲美，甚至有些成分還要高于冬蟲夏草。但由于冬蟲夏草產(chǎn)量低，價格昂貴，所以蛹蟲草的人工栽培顯得尤為重要，且極具商業(yè)價值。[1]

經(jīng)大量研究表明，人工液體發(fā)酵獲得的蟲草菌絲體和冬蟲夏草的成分基本一致，可代替其入藥。另外，在生產(chǎn)上液體菌種所發(fā)揮的功效顯而易見，為研究蛹蟲草液體發(fā)酵條件，本人進(jìn)行了試驗研究，現(xiàn)將試驗結(jié)果報告如下：

一、材料和方法

1.材料

1.1菌種 蛹蟲草固體菌種。

1.2主要儀器 高壓蒸汽滅菌鍋，恒溫培養(yǎng)箱，遠(yuǎn)紅外恒溫干燥箱，分析天平等。

1.3培養(yǎng)基 （1）菌種活化培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀2g，硫胺素10mg，瓊脂20g，水1000ml。（2）液體發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，硫酸鎂1g ，磷酸二氫鉀2g，硫胺素15mg，核黃素 15mg ，水1000ml。[2]

2.方法

菌種活化 將斜面固體菌種接種在活化平板培養(yǎng)基上， 20～22℃培養(yǎng)一周，菌絲長滿平板后即可轉(zhuǎn)色備用。

不同PH值對蛹蟲草菌絲生長量的影響 按液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方制備液體培養(yǎng)基，用1mol/L HCL或1mol/L NAOH將培養(yǎng)基PH值分別調(diào)制4.0、5.0、6.0、7.0、8.0。液體培養(yǎng)基分裝在250ml三角瓶內(nèi)，每瓶100ml，各處理重復(fù)五次，常規(guī)滅菌。培養(yǎng)條件： 20～22℃，閉光，130r/min振蕩培養(yǎng)。振蕩培養(yǎng)7天后過濾菌液，菌絲用蒸餾水沖洗數(shù)次，60℃烘干稱重。以下方法同1.2.2。

不同培養(yǎng)時間對蛹蟲草菌絲生長量的影響 培養(yǎng)時間分別為5、6、7、8、9天。

不同培養(yǎng)溫度對蛹蟲草菌絲生長量的影響 培養(yǎng)溫度分別為18、20、22、24、26℃。

不同裝液量對蛹蟲草菌絲生長量的影響 在250ml三角瓶中培養(yǎng)基裝液量分別為80、100、120、140、160ml。

不同振頻對蛹蟲草菌絲生長量的影響 搖床振頻分別為80、100、120、140、160r/min。

二、結(jié)果分析

1.不同PH值對蛹蟲草菌絲生長量的影響

試驗結(jié)果表明：不同PH值對蛹蟲草菌絲生長量的影響不同。在其他條件相同的情況下，菌絲生長起始期其生長量隨著PH值的升高而增加，當(dāng)PH值為7.0時菌絲干重最大（0.4407g/100ml），菌球分布均勻，大小適中，密度最佳。達(dá)到8.0時菌絲生長量開始下降，菌球密度也明顯減小。說明菌絲在弱酸條件下隨著PH值升高而升高，而堿性條件對菌絲生長有抑制作用。[3]

2.不同培養(yǎng)時間對蛹蟲草菌絲生長量的影響

菌絲在接種后2天內(nèi)要經(jīng)過一個適應(yīng)期，接著會進(jìn)入快速生長期，通過實驗證明，培養(yǎng)7天的菌絲干重最高（0.5483g/100ml），在5～6天之間培養(yǎng)時間較短，菌絲快速生長期還未達(dá)到頂峰階段，因此菌絲生長量較少，而8～9天菌絲培養(yǎng)時間過長，開始逐漸衰老自溶，菌球變大變松，產(chǎn)量下降。因此，多種因素綜合考慮以培養(yǎng)7天最有利于菌絲的生長。

3.不同培養(yǎng)溫度對蛹蟲草菌絲生長量的影響

蛹蟲草菌絲在15～30℃下均能生長，但溫度的高低對菌絲的產(chǎn)量起著決定性的作用。實驗表明在22℃時，菌絲干重最高。在18～22℃之間菌絲生長量隨著溫度的升高而增加，當(dāng)溫度達(dá)到26℃時，由于溫度過高不適宜菌絲生長，所以菌絲產(chǎn)量較低。

4.不同裝液量對蛹蟲草菌絲生長量的影響

培養(yǎng)基裝液量的多少直接影響振蕩培養(yǎng)的效果，不同液體體積在規(guī)定空間（250ml）內(nèi)的振蕩效果差異較大，另外，較多的裝液量也會給搖床增加負(fù)擔(dān)。實驗證明菌絲生長量隨著裝液量的增加而減少，兩者呈反比，分析原因認(rèn)為：裝液量少時有足夠的剩余空間為培養(yǎng)基提供溶氧，從而有利于菌絲生長。裝液量在100ml時菌絲干重最大（0.4414g/100ml），裝液量在120ml時菌絲生長量與100ml時差別不明顯，但考慮到經(jīng)濟(jì)問題認(rèn)為100ml為最佳。

5.不同振頻對蛹蟲草菌絲生長量的影響

試驗結(jié)果表明：在相同時間內(nèi)，振蕩頻率越大菌絲生長量越多，在120～140r/min之間時菌絲生長量最高，菌球也較為均勻，濃密，但當(dāng)振蕩頻率到達(dá)160r/min時菌絲體結(jié)球狀不好，出現(xiàn)塊狀菌絲聚集象限，不利于生長，因此，綜合考慮以120～140r/min最為適合。

對實驗結(jié)果分析來看，蛹蟲草菌絲發(fā)酵始期階段在弱酸條件下生長較好， PH值在7.0時菌絲生長量達(dá)到最高峰，超過7.0時菌絲生長量減少，菌絲產(chǎn)量減低；菌絲培養(yǎng)的最佳時間為7天，在第7天時測得菌絲干重最高，說明，菌絲以完成對數(shù)生長期，產(chǎn)量達(dá)到頂峰，如果繼續(xù)培養(yǎng)，菌絲將進(jìn)入衰老階段，生長量不再增加；溫度因素實驗分析表明，在各處理之間菌絲產(chǎn)量沒有差異，菌絲在18～26℃之間均能正常生長，但在22℃時菌絲產(chǎn)量最高；蛹蟲草菌絲最佳的裝液量為100ml/瓶，實驗結(jié)果顯示，當(dāng)裝液量在100ml時瓶內(nèi)的溶氧量最高，對菌絲生長提供充足的氧分，菌絲生長量最高，菌絲質(zhì)量最好。[4]

參考文獻(xiàn)

[1]王建芳，楊春清.蛹蟲草有效成分及藥理作用研究進(jìn)展.中醫(yī)藥信息，2005，22（5）：30-32.

[2]邵愛娟，戴如琴，蘭紅麗.蟲草菌絲的生理研究.中國中醫(yī)藥科技，1994，1（5）：22.

[3]汪宇，于榮敏，佟志清.蛹蟲草液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化及生長動力學(xué)考察.中國野生植物資源，2003， 22（4）：56.

[4]陳晉安，黃浩，鄭忠輝.蛹蟲草液體發(fā)酵條件的研究.集美大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2001，6（3）：219.