高效液相測定注射用環(huán)磷腺苷葡胺中環(huán)磷腺苷含量

劉云娜+李巖

摘 要：目的：建立環(huán)磷腺苷葡胺葡萄糖注射液中環(huán)磷腺苷含量的HPLC檢測方法。方法：采用Agilent 1200高效液相色譜儀，Agilent ZORBAX SB-C18柱（150x4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈：pH2.5磷酸緩沖液（95：5），流速為1 ml/min，檢測波長為259 nm，柱溫為30℃進(jìn)行測定。結(jié)果：環(huán)磷腺苷濃度在0.01082～0.2104 mg/ml范圍內(nèi)時(shí)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好，方程相關(guān)系數(shù)r=0.9999，平均回收率99.7 %，RSD=1.22%。結(jié)論：用該方法檢測注射用環(huán)磷腺苷葡胺中環(huán)磷腺苷含量準(zhǔn)確，簡便，高效。

關(guān)鍵詞：HPLC；環(huán)磷腺苷葡胺注射液；環(huán)磷腺苷

環(huán)磷腺苷葡胺注射液非洋地黃類強(qiáng)心劑，具有正性肌力作用，能增強(qiáng)心肌收縮力，改善心肌泵血功能，有擴(kuò)張血管作用，可降低心肌耗氧量；改善心肌細(xì)胞代謝，保護(hù)缺血、缺氧的心??；能夠改善竇房屋結(jié)P細(xì)胞功能等作用[1]。環(huán)磷腺苷葡胺由環(huán)磷腺苷和葡甲胺兩種成分組成[2]。環(huán)磷腺苷葡胺注射液的含量測定在現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中為紙色譜法[3]，但由于紙色譜法耗時(shí)長，操作過程復(fù)雜，人為因素過多，精確度差，靈敏性低。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC） 有“三高、一廣、一快”的特點(diǎn)：高壓、高效、高靈敏度；應(yīng)用范圍廣；分析速度快、載液流速快；本文采用高效液相的方法對注射用環(huán)磷腺苷葡胺中環(huán)磷腺苷的含量進(jìn)行測定。

1.儀器與試劑

1.1儀器

電子天平（BSA224S賽多利斯）；高效液相色譜儀（1200美國安捷倫公司）；ZORBAX SB-C18 柱（150 x 4.6 mm， 5 μm 美國安捷倫公司）；紫外分光光度計(jì)TU—1901（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)）；pH計(jì)（PHS-3C上海雷磁儀器廠）。

1.2試劑

環(huán)磷腺苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號140709-201404，純度為99.9%）；環(huán)磷腺苷葡胺注射液（亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，規(guī)格2 ml：30 mg，批號20151012）；磷酸（分析純）；乙腈（色譜純）；水（注射水）。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent ZORBAX SB-C18 柱 （長度×直徑：150 x 4.6 mm，粒徑：5μm）；以乙腈：pH2.5磷酸緩沖液（95：5）為流動(dòng)相；檢測波長為259 nm；柱溫：30℃；流速：1 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 樣品配置

對照品溶液的配置：精密稱取適量的環(huán)磷腺苷對照品，加流動(dòng)相稀釋制成濃度為0.1mg/ml的溶液，作為對照品溶液。

供試品溶液的配置：精密量取適量的本品，加流動(dòng)相稀釋制成環(huán)磷腺苷濃度為0.15mg的溶液，作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取適量的環(huán)磷腺苷對照品，加流動(dòng)相稀釋制成濃度為0.1mg/ml的溶液，作為對照品溶液；然后精密量取0.5，1，2，4，6，8 ml至10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。再各取上述溶液10 μl注入液相色譜儀中，最后以藥物峰面積A對濃度C（mg/ml）進(jìn)行線性回歸。得到的回歸方程：A=1650C+862，r=0.9999，結(jié)果表明環(huán)磷腺苷照品濃度在0.01082～0.2104 mg/ml范圍內(nèi)，濃度與藥物峰面線性關(guān)系良好。

2.4 精密度考察

精密吸取對照品溶液10 μl，按照設(shè)定色譜條件重復(fù)進(jìn)樣8次，記錄峰面積結(jié)果見表1，計(jì)算的RSD=0.58%。

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密量取2.2項(xiàng)中供試品溶液， 按照設(shè)定色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，對照品溶液，進(jìn)樣1次，每次進(jìn)樣10 μl，記錄峰面積，計(jì)算的結(jié)果（見表2）平均含量為100.37%，RSD=0.35%。結(jié)果表明此方法具有良好的重復(fù)性。

表2、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取2.2項(xiàng)中供試品溶液1份，分別在0、1、2、4、8、12 h進(jìn)樣品10 μl，記錄峰面積結(jié)果見表3，計(jì)算的RSD=0.87%。結(jié)果表明樣品至少在12 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.7回收率實(shí)驗(yàn)

按環(huán)磷腺苷葡胺注射液處方工藝80%、100%、120%的含量模擬制成樣品各3 份： 精密稱取稱取環(huán)磷腺苷對照品與相應(yīng)比例混合輔料混勻，加水溶解定量稀釋至50 mL，每個(gè)濃度平行制備3 份；另外精密稱取環(huán)磷腺苷對照品10 mg，加流動(dòng)相稀釋制成濃度為0.1 mg/ml的溶液，作為對照品溶液；取供試品與對照品溶液各去10 μl注入液相色譜儀中，按照設(shè)定色譜條件測定，按外標(biāo)法測定峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果（見表4）顯示，磷腺苷葡胺注射液中的環(huán)磷腺苷含量測定加樣回收率均在99%～101%之間，平均回收率為99.7%，RSD為1.22%（RSD≤2.0%）符合要求，說明此檢測方法具有良好的回收率。

3 .討論

環(huán)磷腺苷葡胺葡萄糖注射液是以臨床常用和較穩(wěn)定的治療藥物制成治療型輸液供臨床使用，可以避免臨時(shí)使用時(shí)將一些小針劑加到輸液中使用帶來的如熱原、微粒、PH變化等諸多醫(yī)療隱患；操作更簡便、安全，并可有效地避免二次交叉污染[4-5]。同時(shí)對原小水針質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了提高，含量測定由原紙色譜法改為高效液相色譜法，確保臨床用藥安全有效[6-8]。

本文中通過對環(huán)磷腺苷葡胺葡萄糖注射液中環(huán)磷腺苷的含量測定，對HPLC法進(jìn)行方法建立及考察，結(jié)果表明該方法線性及重復(fù)性良好、精確度及回收率高，可行性強(qiáng)。

參考文獻(xiàn)

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作者簡介：劉云娜，黑龍江威凱洱生物技術(shù)有限公司，職稱：助理工程師，單位郵編：150028，學(xué)歷：本科，1986年出生。