腸道寄生蟲糞便的病原學(xué)檢查方法

潘嚴(yán)+姜子睿+周超+李彩云

[摘要] 在實驗動物病原檢測中，寄生蟲檢測是其中重要的分支，也是體現(xiàn)實驗動物質(zhì)量不可或缺的一個方面。寄生蟲侵入宿主可在宿主體內(nèi)產(chǎn)生多種有害作用包括奪取營養(yǎng)，機械性損傷，繼發(fā)感染，毒性作用等，嚴(yán)重影響實驗動物健康并降低實驗動物的質(zhì)量。許多寄生蟲生活史中蟲卵、卵囊、或幼蟲隨宿主的糞便排出體外，這些都可以通過糞便寄生蟲檢查，確定是否感染寄生蟲以及感染的種類和程度。病原學(xué)檢查是診斷寄生蟲成蟲及蟲卵的重要的實驗技術(shù)，采集糞便做糞便檢查又是診斷實驗動物消化道有無寄生蟲感染比較常用的手段。實驗動物糞檢的病原學(xué)方法有多種。本文列舉并介紹了一些目前比較常用的糞便寄生蟲定性和定量的檢查方法，旨在提高糞便寄生蟲病原學(xué)檢查的技術(shù)水平。

[關(guān)鍵詞] 腸道寄生蟲；糞便；病原學(xué)檢查方法；實驗動物質(zhì)量

[中圖分類號] R446 [文獻標(biāo)識碼] B [文章編號] 2095-0616（2016）20-213-05

Pathogenic examination methods of Intestinal parasite stool

PAN Yan JIANG Zirui ZHOU Chao LI Caiyun

Shanghai Yinuosi Biological Technology Co.Ltd.，National Shanghai New Drug Safety Evaluation Research Center，Shanghai 201203，China

[Abstract] In the experimental animal pathogen detection，the parasite detection is one of the important branches，and it is also an indispensable aspect of the quality of experimental animals.Parasitic invasion of the host can produce a variety of harmful effects in the host body including the seizure of nutrients，mechanical damage，secondary infection，toxic effects，seriously affect the experimental animal health and reduce the quality of experimental animals.Many parasites in eggs and oocysts，or host larvae with the faeces excreted through feces，which can determine whether the parasite examination，parasite infection and infection type and degree.Etiological examination is an important diagnostic technique of parasite egg and adult feces collection，do stool examination is the diagnosis of digestive tract have no experimental animal parasitic infections more commonly used methods.There are many kinds of pathogenic methods in laboratory animal feces examination.This article lists and describes some of the more commonly used methods of qualitative and quantitative examination of fecal parasites，aimed at improving the technical level of fecal parasite pathogens.

[Key words] Intestinal parasites；Stools；Pathogenic examination method；Laboratory animal quality

根據(jù)現(xiàn)行的2001版中國國家標(biāo)準(zhǔn)實驗動物寄生蟲學(xué)檢測方法，不同種屬動物體內(nèi)體外寄生蟲有其適用的檢測方法，這些方法是經(jīng)過很多檢測人員反復(fù)實踐得出的結(jié)論。比如大，小動物蠕蟲的檢測方法國標(biāo)上寫的有飽和鹽水漂浮法，沉淀集卵法，透明膠紙法等[1]。必須指出的是糞便排泄物檢查，跟以下6點密切相關(guān)：糞便的稠度、糞便的顏色、糞隱血指標(biāo)、粘液、排泄物的有效期及顯而易見的寄生蟲[2]，這6點會直接影響到檢測結(jié)果。本文對當(dāng)下諸多檢測方法的檢測步驟及其影響因素進行了詳盡的闡述。

1 糞便樣品的收集和保存

寄生蟲檢查的糞便樣品應(yīng)該從動物的直腸收集，如果直腸不能獲得新鮮的糞便樣品，可從牧場收集[3]。樣品應(yīng)盡快地收集到合適的容器中，如帶蓋的塑料容器、螺旋蓋瓶、塑料杯、塑料袋和玻璃瓶等。收集時應(yīng)清楚地標(biāo)識日期、時間地點和數(shù)據(jù)，動物的種類、動物的名稱和其他一些相關(guān)信息。糞樣盡量保存在冰箱里以避免卵的孵化。如果運輸?shù)綄嶒炇业臅r間較長，需添加少于5%的氯仿或者加入10%的福爾馬林防腐（但不能用于糞便培養(yǎng)物）。樣品應(yīng)立即儲存在4℃，直到實驗室接收。樣品可以保持在冰箱中長達3周而蟲卵的數(shù)量和形態(tài)不發(fā)生改變。如果檢查的目的是查找原蟲滋養(yǎng)體，那必須立即檢查樣品；其他寄生蟲檢查也須在24h內(nèi)完成。但凡遇到糞便不能立即檢查，可在收集的糞樣中加入已加熱至50～60℃的5%～10%的福爾馬林，既可防止微生物繁殖，又能使蟲卵保持固有的形態(tài)不變[4]。

2 糞便寄生蟲定性的病原學(xué)檢查方法

2.1 糞便中蟲體檢查（fecal parasite examination）

從糞便中淘取蠕蟲蟲體進行蟲體鑒定和技術(shù)，用來鑒別診斷或觀察驅(qū)蟲療效。取服藥后1～3d的糞樣，加入蒸餾水?dāng)嚢杌靹?，用紗布?0目的篩網(wǎng)過濾糞樣，過濾后的糞渣用蒸餾水反復(fù)沖洗，然后倒入裝有蒸餾水的大的玻皿內(nèi)檢查。若糞渣當(dāng)中混有蟲卵，可以在玻皿的下方襯一張黑紙進行辨別。

2.2 直接涂片檢查法（direct smear method）

2.2.1 生理鹽水直接涂片法 滴加一滴生理鹽水在載玻片的中間部位，用竹簽挑取少許糞便大約半個米粒的量，讓糞粒和生理鹽水充分混合并在載玻片上均勻的涂抹成一層糞膜，置顯微鏡下觀察[5]。此法檢測需注意的是滴加生理鹽水的量視糞便的稀稠情況而定。為了提高檢出率，可取不同部位的檢查結(jié)果是陰性的糞便標(biāo)本復(fù)查3次。本法用于檢測大小鼠，豚鼠等實驗動物腸道鞭毛蟲和纖毛蟲的檢測。

2.2.2 直接涂片染色法 主要為碘液染色法，即，于載玻片中央滴加一滴碘液，用竹簽挑取少許糞便，在碘液中均勻地涂抹一層糞膜，加蓋玻片在顯微鏡下檢查。此法適用于犬、猴溶組織內(nèi)阿米巴包囊、結(jié)腸內(nèi)阿米巴包囊、藍氏賈第鞭毛蟲包囊等原蟲包囊的檢測，顯微鏡下檢測到包囊即可判為陽性。

2.3 厚涂片透明法（thick smear method）

又稱加藤法（Kato method）。用4cm大的正方形的100目/吋篩網(wǎng)過篩糞便后，取50mg糞樣放在載玻片上，用一張浸透的甘油-孔雀綠溶液的玻璃紙片蓋在載玻片上并輕壓，這樣糞便能鋪開成為一個涂面。置于30～36℃環(huán)境中30min，或置于25℃環(huán)境中約60min。待糞膜稍干，透明即可鏡檢[6]。該法主要用于蠕蟲卵的檢查。

2.4 沉淀集卵法

2.4.1 自然沉淀集卵法（nature sedimentation method） 取糞便25g，放入燒杯內(nèi)，加入10～20倍的蒸餾水，調(diào)成糞漿。用雙層濕紗布將糞漿濾入500mL錐形量杯中，加蒸餾水至500mL靜置20～30min。先廢棄上清液，然后加蒸餾水反復(fù)沉淀2～3次后，直到上清液變澄清，再棄去上清液，取沉渣涂片鏡檢。

2.4.2 離心沉淀法[7]（centrifugal sedimentation method） 取2g糞便充分攪碎調(diào)勻，加蒸餾水5mL用濕紗布濾入離心管中，平衡離心管離心糞樣（1500r/min）然后棄去上清液，再加蒸餾水重復(fù)離心沉淀3～4次，直至上清液澄清后，廢棄上清液，取沉渣涂片鏡檢。

2.4.3 醛醚沉淀法（formalin-ether sedimentation） 把糞便中加入SAF保存液中混勻，用紗布過濾，離心（2000r/min）1min后，吸去上清液，然后加入7mL生理鹽水并用木筷混勻，混勻后加入3mL乙醚蓋上蓋子，拇指按住蓋子充分混勻，不能拔掉蓋子（小心氣體）。離心（2000r/min）5min，廢棄上面的3層，吸取底層滴在載玻片上涂抹均勻，蓋上蓋玻片后鏡檢。

2.4.4 尼龍袋集卵法（nylon pocket egg concentration method） 取銅絲篩（80孔/時，篩徑10cm，深4cm）與尼龍袋（260孔/時，篩徑12cm，深10cm）套迭，銅絲篩在上，尼龍袋在下。將糞便加水調(diào)勻后倒入銅絲篩內(nèi)，濾去粗大的糞渣，糞液濾入尼龍袋內(nèi)，然后取去銅絲篩，將尼龍袋依次浸入2只盛清水的器皿內(nèi)用光滑圓頭玻璃棒反復(fù)攪拌袋內(nèi)糞便（注意不使袋內(nèi)糞渣外溢）直至袋內(nèi)包囊雜質(zhì)全部淘洗干凈，再用清水沖洗袋內(nèi)壁四周使糞渣集中于底部，可直接吸取糞渣涂片鏡檢。此法主要用于血吸蟲蟲卵的濃集[8]。

2.5 浮聚法（floatation method）

2.5.1 飽和鹽水浮聚法（brine floatation method） 該法檢測鉤蟲卵效果比較好。用竹簽挑取黃豆大小的糞便放入漂浮杯中，加少量飽和生理鹽水，用竹簽充分攪成糞漿，然后丟棄竹簽。用滴管繼續(xù)滴加飽和生理鹽水，鹽水滴加至杯口，但不能溢出。用一塊載玻片附著于液滴表面，使兩者完全接觸靜置15min，平提載玻片，迅速反轉(zhuǎn)，放在顯微鏡下觀察。選擇比重較飽和鹽水更大的亞硝酸鈉飽和溶液作為漂浮液更有助于線蟲卵的檢查。此法適用于小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬、猴的蠕蟲卵的檢測[9]。

2.5.2 硫酸鋅離心浮聚法（zinc sulfate centrifugal flotation method） 取少許糞便加入大于糞便10倍量的蒸餾水中充分將糞便攪碎后過濾（過濾方法同離心沉淀法），反復(fù)離心3～4次至上清液澄清后，倒去上清液。在糞沉渣中加入33%硫酸鋅溶液混勻，然后繼續(xù)加硫酸鋅溶液加到距管口1cm處，再離心1min。用一根接種環(huán)挑取表面的糞液置于載玻片上，加一滴碘液鏡檢，放在顯微鏡下檢查。

2.5.3 蔗糖離心浮聚法（sucrose centrifugal flotation method） 取糞便約5g，加水20mL，以260目尼龍袋或4層紗布過濾。取濾液3000r/min離心[10] 5～10min，吸棄上清液，加蔗糖溶液再離心，然后如同飽和鹽水浮聚法，取其表面膜鏡檢[11]。鑒于1小時后卵囊脫水變形不易辨認，故應(yīng)立即鏡檢。此法適用于檢查糞便中隱孢子蟲卵囊。

2.5.4 氯化鋅溶液漂浮法 取黃豆粒大小的糞便一塊放入5mL離心管中，加入4mL氯化鋅溶液（氯化鋅13.5g+蒸餾水至1000mL溶解后備用）混勻。2000r/min離心3min，靜置5min。取1滴上清夜滴于載玻片，蓋上蓋玻片鏡檢蟲卵。此法比較適用于犬，貓等動物細粒棘球絳蟲的檢測[12]。

2.6 幼蟲孵化法

2.6.1 毛蚴孵化法（Miracidium hatching method） 此法是診斷日本血吸蟲及華睪吸蟲的方法之一。取30g新鮮糞便，處理方法同自然沉淀法，在燒瓶內(nèi)放入已經(jīng)洗凈的糞渣，加清水或氨水至燒瓶瓶口處，放25～30℃培養(yǎng)箱或室溫孵化，2h后多次觀察有無毛蚴孵出。如果有毛蚴孵出，在瓶口水面下可見梭狀白色小點做直線運動。毛蚴孵化法又可改良為常規(guī)沉孵法和棉析毛蚴孵化法這兩種方法[13]。

2.6.1.1 常規(guī)沉孵法（conventional sedimentation and hatching method） 又稱沉孵法。取糞便100g左右，放入500mL的燒杯中，將糞便加水調(diào)至糊狀，然后加水至300～400mL，混勻，用50目的糞篩過濾到另一個燒杯內(nèi)，加水沉淀，靜置約20min后棄去上清液，再加水混勻，繼續(xù)沉淀。就這樣反復(fù)3～4次后直至上清液澄清為止。最后棄去上清液，將上述沉淀糞渣加溫水置于三角燒杯中，杯內(nèi)的水量至杯口2cm處為宜且使玻璃管中有一段露出的水柱，瓶口用中央插有玻璃管的膠塞塞上，開始孵化。30min后開始觀察水柱內(nèi)是否有毛蚴；若無，以后每隔1h觀察一次。直到發(fā)現(xiàn)毛蚴為止，才能停止觀察。

2.6.1.2 棉析毛蚴孵化法（cotton screening and hatching method） 簡稱棉析法。取新鮮的糞便50g左右漂洗后，將糞渣放入300mL的平底孵化瓶中，加入25℃的清水到瓶頸下部，為了使瓶頸下部不浮動，可以在液面上方塞一層薄的脫脂棉，再緩慢加入溫水至瓶口1～3cm處。如棉花層上面水中有糞便浮動，可將這部分水吸去，再加清水孵化。這種方法比較簡便只需漂洗或不漂洗直接裝瓶孵化。毛蚴只集中在棉層上方的清水域中與下層糞液隔開，這樣有利于毛蚴的觀察。

2.6.2 鉤蚴培養(yǎng)法（Ancylostome culture method） 此法主要用于檢查鉤蟲卵。取15mL的潔凈試管1支，加入蒸餾水1～2mL，將濾紙剪成與試管等寬但較試管稍短的T字形紙條，取約黃豆大小糞便均勻地涂抹在豎條紙的2/3處，將紙條插入試管內(nèi)，使下端剛剛與水接觸；以糞便不接觸水面為宜；在25～30℃培養(yǎng)箱孵育。3d后（注：需每天補充蒸發(fā)的水分），用肉眼或放大鏡觀察管底水中有無鉤蚴。無色透明的鉤蚴在水中經(jīng)常蛇形游動，蟲體透明。如果沒有發(fā)現(xiàn)鉤蚴，則需要繼續(xù)培養(yǎng)觀察至第5天才能結(jié)束。

2.7 幼蟲分離法-貝爾曼法（Baermann，stechnique）

該方法用于從糞便和土壤中查找蠕蟲的幼蟲。貝爾曼裝置是由一個大的玻璃漏斗及其周圍的豎立成環(huán)形的支撐結(jié)構(gòu)所構(gòu)成。漏斗下端連接乳膠橡皮管子，管子有塞子。漏斗內(nèi)安置一個金屬篩片用作樣品支撐。使用時在樣品1～3cm的水平之上裝滿大約30℃的水，鋪設(shè)一層紗布于支撐的篩片上，放入5～15g糞便殘渣并確保被溫水覆蓋。靜置過夜后，放一塊載玻片或培養(yǎng)皿在橡皮管下面，打開塞子使液體流入載玻片上面，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下檢查幼蟲。

2.8 幼蟲培養(yǎng)法（LarvaL cuLture method）

取新鮮易碎的糞便若干，置培氏皿中央堆成半球狀，頂部略高出，然后在培氏皿內(nèi)邊緣加水少許，糞便不能太干燥（稀的糞便可不用加水）。為了使糞與培養(yǎng)皿接觸必須加蓋蓋好。放入25～30℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)[14]。（夏天放室溫亦可）每日觀察糞便是否干燥，要保持適宜的濕度，加水定期培養(yǎng)。經(jīng)7～15d，第三期幼蟲即可出現(xiàn)，它們從糞便中爬出來，在此期間全部幼蟲應(yīng)該已經(jīng)達到感染期。幼蟲爬到培氏皿的蓋上或四周。這時可用吸管吸上生理鹽水把幼蟲沖洗下來，滴在載玻片上，覆以蓋玻片，進行鏡檢。

2.9 肛門拭子法（anaL swab method）

2.9.1 透明膠帶法（ceLLophane tape method） 用于檢測蟯蟲卵。雌性的蟯蟲從肛門周圍的皮膚上產(chǎn)卵。蟯蟲卵通常在常規(guī)的糞檢中不能看到。因此可以用2cm寬的透明膠帶剪成3～6cm長的小段，粘貼肛門周圍，然后拿下并粘在載玻片上，置顯微鏡下檢查。此法也適用于檢測小鼠蟯蟲（隱藏管狀線蟲）卵和大鼠蟯蟲（大鼠管狀線蟲）卵。

2.9.2 棉簽拭子法（cotton swab method） 用長10～11cm的竹簽，一端包以脫脂棉將它放在生理鹽水中浸濕，然后擠去多余水分，將此棉簽放在試管內(nèi)，蓋上紗布防塵落內(nèi)，用時取出。將棉簽放肛周皺襞表面順一個方向滾動揩拭。然后將棉簽放入試管內(nèi)并在試管的1/2處加入飽和鹽水并用力振蕩數(shù)分鐘，然后，迅速將棉簽提起來并將棉簽放在試管壁上。擠去多余的水分，棄之。試管內(nèi)加滿飽和鹽水靜置20min后，用蓋玻片輕輕地沾試管口液面，迅速取下，蓋于載玻片上鏡檢[15]。

2.10 糞便寄生蟲定量的病原學(xué)檢查方法

2.10.1 定量透明法（Kato-Kaze method） 又稱改良加藤法，適用于各種糞便內(nèi)蠕蟲卵的檢查和計數(shù)。經(jīng)4cm大的正方形的100目/吋篩網(wǎng)篩過的糞便填滿置于載玻片上的定量板的?？?，刮去多余糞便，拿掉定量板，蓋以浸透的甘油—孔雀綠溶液的玻璃紙片并輕壓，使糞便鋪開成一個涂面。置30～36℃環(huán)境中30min，也可以25℃約60min。待糞膜稍干，透明即可鏡檢。由于填滿定量板的糞量為41.7mg，將蟲卵數(shù)乘24，再乘糞便性狀系數(shù)，即為每克糞便蟲卵數(shù)。

2.10.2 汞碘醛離心沉淀法（merthioLate-iodine-formaLdehyde centrifugation sedimentation method） 把1g糞便加入到10mL左右的汞碘醛液中，充分混勻，用兩層脫脂紗布過濾，然后在加入乙醚4mL，混勻2min后離心（2000r/min）1～2min。離心后分成4層。棄去乙醚、糞渣、汞碘醛、這上面3層。取第4層沉渣鏡檢[16]。包囊濃集可以提高檢出率。此法可用來進行蠕蟲卵的定量檢測，前提必須是糞便量要準(zhǔn)確到1g。

2.10.3 簡易計數(shù)法（simpLe counting method） 該法只適用于線蟲卵和球蟲卵囊計數(shù)。取新鮮的糞便1g，置于小燒杯中，加10倍量水?dāng)嚢杌旌?，用紗布濾入離心管中，靜置30～60min（或離心沉淀2～3min）棄去上層液體后加飽和鹽水，混勻后用滴管滴加鹽水至離心管口，管口上方用正方形蓋玻片覆蓋[17]。經(jīng)30min取下蓋玻片，放在載玻片上鏡檢。分別計算各種線蟲卵的數(shù)量。每份糞便用同樣方法復(fù)查3片，其總和為1g糞便的蟲卵數(shù)。

2.10.4 麥克馬斯特氏法（McMasters method） 麥?zhǔn)戏ㄓ糜诖_定每克糞便的卵或卵囊的數(shù)量最簡單和最有效的方法。稱量4g糞便放入容器中，加入56mL飽和鹽水充分振蕩、混勻、攪拌，通過細篩過濾于另一容器中，用巴氏吸管吸出樣品，填滿麥克馬斯特計數(shù)池的兩側(cè)。放置5min，置10×10的放大倍率下進行顯微鏡檢查，計數(shù)所有的卵或卵囊。兩個計數(shù)池蟲卵數(shù)加在一起，乘以50就是每克糞便中的蟲卵數(shù)。

2.10.5 斯陶爾氏法（StoLLs method） 用下頸部有兩個刻度的小燒瓶下面刻度為56mL，上面刻度為60mL，（沒有這種燒瓶，可用事先標(biāo)好上述二個刻度的大試管或小三角燒杯代替）。計數(shù)時，先加入4% NaOH到下面的刻度處，再緩慢加入搗碎的糞便，使液面到達上面的刻度60mL為止（大約加入4g糞便）。然后再加十幾粒小玻璃球，充分振蕩，使液體成為分布均勻的糞懸液，經(jīng)過濾后，用吸管吸取濾液0.15mL置載玻片上，蓋上大的蓋玻片鏡檢計數(shù)。或?qū)?.15mL糞液滴于2～3張載玻片上，分別進行計數(shù)，再加起來即可。所見蟲卵總數(shù)×100，就是每克糞便中的蟲卵數(shù)。需要注意的是做蟲卵計數(shù)時，糞便應(yīng)無任何雜物，必須將糞便徹底研碎，混勻。在進行蟲卵計數(shù)時，最好每天早、中、晚各檢查一次并連續(xù)檢查3次，然后取其平均值，這樣取得的蟲卵計數(shù)結(jié)果比較準(zhǔn)確。將每克糞便蟲卵數(shù)×24h糞便的總重量，計算結(jié)果就是每天所排蟲卵總數(shù)，再將此總數(shù)除以已知成蟲每天排卵數(shù)，可以得出雌蟲的大約寄生數(shù)量。如果是雌雄異體的，將上述雌蟲數(shù)再×2，即可得出雌雄成蟲寄生總數(shù)。

2.11 寄生蟲學(xué)測微技術(shù)（Micrometry in ParasitoLogy）

在光學(xué)顯微鏡下測量細菌、細胞、寄生蟲卵、幼蟲、某些成蟲、原蟲等大小時需要使用顯微鏡測微器[18]。這個儀器是由目鏡測微尺和物鏡測微尺兩部分組成。使用時，將目鏡測微尺放于目鏡內(nèi)，物鏡測微尺放在載物臺上。用低倍鏡調(diào)節(jié)焦距，使目、物這兩個測微尺的零點對齊，再尋找目、物這兩個測微尺較遠端的另一重合線，算出目鏡測微尺的幾格相當(dāng)于物鏡測微尺的幾格，從而計算出目鏡測微尺上每格的長度，以后測量時，只用目鏡測微尺測量就可以了。在沒有物鏡測微尺的情況下，可以用血球計數(shù)板代替使用。以計數(shù)板內(nèi)兩個小方格的長度為標(biāo)準(zhǔn)，可以按上述方法測出目鏡測微尺每1格的微米數(shù)。用目鏡測微尺測量蟲卵大小時，一般是測量蟲卵的最長處和最寬處，圓形蟲卵是測量其直徑；測量幼蟲和某些成蟲時，是測量蟲體的長度、寬度及各部分構(gòu)造的尺寸大小。各種蟲卵和幼蟲常有恒定的大小，測量蟲卵和幼蟲的大小可作為確定某一蟲卵或幼蟲的依據(jù)。注意有些蟲體會彎曲，這時候可以采用旋轉(zhuǎn)目鏡測微尺的辦法，來進行分段測量，最后將數(shù)據(jù)加起來就行了。

3 小結(jié)

上述糞便寄生蟲病原學(xué)檢測方法可操作性強，無需特殊儀器設(shè)備，快速省時。有些方法很經(jīng)典，沿用至今。且經(jīng)過眾多檢測人員長時間的積累和改良，實踐證明應(yīng)用范圍甚為廣泛。但是由于通過形態(tài)學(xué)進行診斷，某些寄生蟲蟲卵或幼蟲的鑒別受檢測人員主觀因素影響較大。為了彌補這一不足，有待于運用分子生物學(xué)和免疫學(xué)等檢測技術(shù)與傳統(tǒng)鏡檢技術(shù)相結(jié)合的方式來提高糞便寄生蟲蟲卵或幼蟲的檢出率[19]，提高檢測效率。

[參考文獻]

[1] 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18448.1～18448.10—2001實驗動物寄生蟲學(xué)檢測方法[S].2001.

[2] AMust.The Laboratory methods practicaL parasitoLogy-Lab1-The Laboratory procedures for diagnosing parasites[J].SadhospitaL，2014，424（1）：1-4.

[3] J MiLLer.Jargen Hansen and Brian Perry The epidemioLogy diagnosis and controL of heLminth parasites of ruminants[M].Ethiopia： The InternationaL Livestock Centre for Africa Addis Ababa，1994：95-103.

[4] 繆峰，劉永春，趙長磊.現(xiàn)場調(diào)查寄生蟲標(biāo)本的收集、固定、和保存方法[J].中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志，2002，20（6）：83.

[5] 趙小紅.常用動物寄生蟲的糞便檢查技術(shù)[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2013，29（5）：47.

[6] 尹燕.雙寄生蟲檢驗技術(shù)[M].鄭州：鄭州大學(xué)出版社，2014：171-177.

[7] 艾必燕，樵星芳，陳建康，等.實驗犬寄生蟲檢測程序及方法的應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)動物防制，2008，24（6）：404-405.

[8] 王銀波，周特雄.尼龍絹集卵法操作過程中血吸蟲蟲卵的散失[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，1994，1（12）160：

[9] 林建平，潘品福，諸建武，等.4種寄生蟲蟲卵檢查方法比較[J].浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2004，16（9）：23.

[10] 韓先楨.離心速度與時間對牛隱孢子蟲卵囊浮集率的影響[J].中國獸醫(yī)雜志，1998，24（6）：8-9.

[11] 盧靜.實驗動物寄生蟲學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2010：45-49.

[12] 岳進巧，張彤，馬秀敏，等.一種犬糞便中腸道寄生蟲蟲卵檢查方法的建立[J].西部醫(yī)學(xué)，2012，24（2）：221-223.

[13] 張雪娟，程天印，盧福莊.日本血吸蟲病快速糞便毛蚴孵化法檢測研究[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報，2004，16（6）：381-383.

[14] 謝擁軍，崔萍.動物寄生蟲病防治技術(shù)[M].北京：北京化學(xué)工業(yè)出版社，2009：22-26.

[15] 馬國娟，朱樂仁，張荔萍.透明膠紙法和棉簽試紙法在普查繞蟲感染中的價值[J].人民軍醫(yī)雜，1990，12（2）：73-74.

[16] 葉應(yīng)撫，王毓.三全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].南京：南京東南大學(xué)出版社，1991：129-130.

[17] 宋永剛，王應(yīng)泉.寄生蟲病原檢查技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：61-66.

[18] 邵世和.病原生物學(xué)診斷技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：97-125.

[19] KoLakowskaR，TrippnerM，WasiLewskaE.Detection of the parasite Giardia iatestinaLis during feces examination with immunoenzymatic and microscopic methods[J].Comparative Study，1996，51（14-18）：210-211.