鹿腸毒血癥的病原學(xué)診斷

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)動物科技學(xué)院內(nèi)蒙古通遼028000）

鹿腸毒血癥的病原學(xué)診斷

鄧守全，馬德慧*

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)動物科技學(xué)院內(nèi)蒙古通遼028000）

本研究采用對送檢臟器觸片觀察、細(xì)菌分離培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)觀察和藥敏試驗(yàn)等方法，對赤峰市某鹿場病死鹿的小腸、肝臟、肺臟等組織進(jìn)行了細(xì)菌分離鑒定。結(jié)果表明所分離細(xì)菌為魏氏梭菌，該菌對氧氟沙星、左氟沙星、菌必治、舒普深、阿莫西林高度敏感，對氯霉素、妥布霉素、卡那霉素、鏈霉素、氟苯尼考、強(qiáng)力霉素中度敏感，對阿米卡星、新霉素、慶大霉素有耐藥性[1]。

腸毒血癥；魏氏梭菌；分離培養(yǎng)

鹿腸毒血癥是由魏氏梭菌產(chǎn)生的毒素引起的急性毒血癥。近年來在我國部分省區(qū)鹿場流行的傳染病當(dāng)中，其發(fā)病率居首位，且發(fā)病急、病程短、死亡快、病死率高，以胃腸出血，尤其以小腸出血為主要特征[2]。2016年入冬以來，內(nèi)蒙古赤峰市某梅花鹿養(yǎng)殖場鹿群陸續(xù)發(fā)生了疑似腸毒血癥的急性傳染病，我們通過實(shí)驗(yàn)室檢測手段對該病進(jìn)行病原學(xué)診斷，結(jié)果證實(shí)為魏氏梭菌感染。

1 材料與方法

1.1 病料

內(nèi)蒙古赤峰市某梅花鹿場送檢的疑似患有腸毒血癥的急性死亡鹿內(nèi)臟。

1.2 主要儀器和試劑

恒溫培養(yǎng)箱（上海博訊），生物顯微鏡（OLYMPUS），超凈工作臺（蘇凈AIR TECH)，革蘭氏染色液（青島海博），細(xì)菌培養(yǎng)基（北京奧博星），藥敏紙片（杭州天和）。

1.3 病料觸片鏡檢

用酒精棉球擦拭后經(jīng)火焰適度灼烤的剪刀剪開小腸，將處理好的載玻片輕觸于腸黏膜，自然干燥后進(jìn)行革蘭氏染色，肝臟也做觸片。上述觸片于油鏡觀察。

1.4 細(xì)菌分離培養(yǎng)

用燒紅的手術(shù)刀對十二指腸、肝臟、肺臟表面進(jìn)行燒烙，待刀片冷卻后在燒烙表面切一個切口，將接種環(huán)深入切口內(nèi)取樣，分別接種于肝湯瓊脂板、血平板上和肝湯液體培養(yǎng)基中，肝湯液體培養(yǎng)基于80℃水浴20～25 min，將接種后的平板和肝湯培養(yǎng)液共同放置于燭缸內(nèi)，37℃培養(yǎng)20～48 h，觀察細(xì)菌生長情況和菌落特征，吸取約20 uL肝湯培養(yǎng)物，革蘭氏染色，鏡檢。

1.5 藥敏試驗(yàn)

移取肝湯培養(yǎng)液100 mL置于肝湯平板中，用涂布棒將其涂抹均勻后，按照國標(biāo)要求，每種藥敏片之間距離適當(dāng)，37℃燭缸內(nèi)培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)構(gòu)，并測量抑菌圈直徑。

2 結(jié)果

2.1 臟器觸片結(jié)果

十二指腸黏膜觸片和肝臟、肺臟切面觸片均見革蘭氏陽性大桿菌，菌體粗大，兩端鈍圓或平齊，許多菌體外周可見一圈“空白”的莢膜。(如圖1～3，見P94）

2.2 菌落形態(tài)及液體培養(yǎng)結(jié)果

在肝湯瓊脂上為邊緣不整齊、表面粗糙的扁平大菌落（如圖4，見P94）。分離株的菌落具有較強(qiáng)的溶血現(xiàn)象，密集的菌落使血平板整體褪色（如圖5，見P94）。肝湯液體培養(yǎng)物出現(xiàn)渾濁且液面形成白色菌環(huán)，該環(huán)為菌體生長時釋放出的氣體所形成的泡沫。

2.3 菌體形態(tài)

鏡下觀察菌體為革蘭氏陽性，兩端鈍圓，直線型粗大桿菌，此時不見莢膜。（如圖6，見P94）

2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

所分離菌株該菌對氧氟沙星、左氟沙星、菌必治、舒普深、阿莫西林高度敏感，對氯霉素、妥布霉素、卡那霉素、鏈霉素、氟苯尼考、強(qiáng)力霉素中度敏感，對阿米卡星、新霉素、慶大霉素有耐藥性（見表1）。

3 討論

1）魏氏梭菌是一種能感染多種動物的病原菌，是革蘭氏厭氧芽孢桿菌的代表，可引起許多幼畜發(fā)生嚴(yán)重的腸道感染，在自然界中廣泛存在，且常以休眠形式的芽孢體存在，對外界環(huán)境抵抗力強(qiáng)，在水、土壤和動物的糞便中都可以找到。其致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和具有侵襲性的酶。該分離株對營養(yǎng)要求較為苛刻，初次分離時需在肉湯或肝湯培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

2）從臨床癥狀、臟器的病理變化及對病死鹿臟器的細(xì)菌分離培養(yǎng)、鏡檢觀察、藥敏試驗(yàn)的結(jié)果分析可知，該病原分離株為魏氏梭菌。該菌對氧氟沙星、左氟沙星、菌必治、舒普深、阿莫西林高度敏感，對氯霉素、妥布霉素、卡那霉素、鏈霉素、氟苯尼考、強(qiáng)力霉素中度敏感，對阿米卡星、新霉素、慶大霉素有耐藥性。

3）在實(shí)際生產(chǎn)過程中，包括鹿在內(nèi)的反芻動物感染魏氏梭菌的現(xiàn)象比較多見，一般呈地方性流行，感染后發(fā)病快，死亡率高，所以應(yīng)引起養(yǎng)鹿從業(yè)者和獸醫(yī)工作者的高度重視。在今后的生產(chǎn)中，要加強(qiáng)鹿的飼養(yǎng)管理和免疫預(yù)防工作，防患于未然才是防控本病的根本原則?！?/p>

表1 分離菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果（mm)

[1] 孟慶玲,吳文娟,陶大勇等.天山馬鹿腸毒血癥的病原學(xué)診斷及病理學(xué)觀察[J].塔里木大學(xué)學(xué)報,2005,17(4)：8-10.

[2] 田立志,丁玉林,鄭秉武等.一起梅花鹿腸毒血癥的診斷[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2011,32(2)：309-310.

Etiologic Diagnosis for Entertaracmia in Deer

Deng Shouquan，Ma Dehui*
（Inner Mongolia university for nationalities institute of animal science and technology,TongLiao Inner Mongolia, 028000）

In this study,the microflora of the deer's small intestine,liver,lung and other tissues of deer-dead deer in Chifeng City were isolated and identified by observing the organ contact,observing bacterial culture, morphological observation and drug susceptibility test.The results showed that the isolated bacteria were Clostridium perfringens,which was sensitive to ofloxacin,levofloxacin,Rocephin,Sulperazon and amoxicillin. The bacteria were sensitive to chloramphenicol,tobramycin,Streptomycin,florfenicol,doxycycline moderately sensitive to amikacin,neomycin,gentamicin-resistant.

Entertaracmia;Clostridium welchii;Cultivation

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.1.040

*通訊作者：馬德慧