運用近紅外光譜法對青霉素V鉀片一致性檢驗的研究

相茂花，相茂功

（1.日照市食品藥品檢驗檢測中心，山東 日照 276826；2.山東眾山生物科技有限公司，山東 日照 276808）

運用近紅外光譜法對青霉素V鉀片一致性檢驗的研究

相茂花1，相茂功2

（1.日照市食品藥品檢驗檢測中心，山東 日照 276826；2.山東眾山生物科技有限公司，山東 日照 276808）

目的 運用近紅外光譜法分析不同廠商不同批次的青霉素V鉀，進行一致性檢驗，評價紅外光譜分析價值。方法 分配采購5個廠家50個批次的青霉素V鉀片，每批次樣品隨機抽取3片，進行紅外光譜檢測計算平均光譜，建立近紅外定性模型并進行驗證，從每批次測定10張光譜，兩臺儀器共檢測10×50×2個光譜，每個廠家100個光譜，其中每個廠家30張作為建模參考光譜，不同人員進行驗證。結(jié)果 高效液相色譜法與近紅外光譜法對50個批次的樣品來源廠商聚類鑒定結(jié)果均達到100.0%，高效液相色譜法鑒定不合格產(chǎn)品1批次，近紅外光譜也檢出該批次不合格樣品。加速后，樣品的近紅外光譜較同批次產(chǎn)品發(fā)生顯著變化，采用高效液相色譜法徹底加速后樣本青霉素V濃度為（98.5±0.4）%，加速后為（95.3±0.7）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 近紅外光譜法對青霉素V鉀片一致性檢驗效果較好，對青霉素V鉀含量變化非常敏感，同時還可進行聚類分析，判斷產(chǎn)品的來源。

青霉素V鉀片；近紅外光譜；藥物質(zhì)量

藥物的無損檢測一直是藥品質(zhì)量管理中常用的技術(shù)以及研究熱點，近紅外光譜法是藥物生產(chǎn)過程中在線分析、藥物質(zhì)量鑒定、過程控制的常用技術(shù)。青霉素V鉀片是一種抗生素，屬于β內(nèi)酰胺類抗生素，相較于青霉素G，其對酸穩(wěn)定，口服吸收好，對耐藥性金葡菌引起的感染療效較好，目前全世界青霉素V的產(chǎn)量約為1萬噸，且這一數(shù)字仍在不斷上升，在美國有報道顯示青霉素V鉀片屬四大常用抗生素[1]。在我國青霉素V鉀片的生產(chǎn)時間較晚，直至上世紀末才開始批量生產(chǎn)，青霉素V鉀片因口服方便，價格適中，越來越受到歡迎，加強青霉素V鉀片質(zhì)控非常必要。本次研究運用近紅外光譜法分析不同廠商不同批次的青霉素V鉀，進行一致性檢驗，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥物

Bruker VECTOR22/N傅立葉變換近紅外光譜儀，附有OPUS5.0軟件，U-4100紫外/可見/近紅外分光光度計。分配采購5個廠家50個批次的青霉素V鉀片，每個廠家10個批次。分別為華北、山西大同、吉林、杭州、江西五個地區(qū)生產(chǎn)。對照品：中國藥品生物制品檢定院，苯氧乙酸對照片、苯氧甲基青霉噻唑酸A型與B型對照品、苯氧基氨酸脫羧青霉噻唑酸A型與B型對照品。

1.2 方法

每批次樣品隨機抽取3片，采用漫反射光線探頭壓住藥物，每片正面反面都檢測1次，取平均光譜作為樣品光譜。采集條件：內(nèi)置背景為參比，掃描范圍120000～4000/cm，掃描次數(shù)32次，分辨率為8/cm，計算平均光譜。建立近紅外定性模型并進行驗證，從每批次測定10張光譜，兩臺儀器共檢測10×50×2個光譜，每個廠家100個光譜，其中每個廠家30張作為建模參考光譜，不同人員進行驗證。一致性建模參數(shù)：二階導(dǎo)數(shù)加矢量歸一化，平滑點13個，譜段9000～5000/cm、4500～3200/cm、3000～3250/cm，CI限度為7。結(jié)果顯示，不同廠家的圖譜均未通過驗證，提示此光譜一致性模型能夠有效的區(qū)分不同廠家青霉素V鉀片光譜，模型有較好的專屬性，模型識別率為100%，對10個驗證的樣品進行模型預(yù)測，結(jié)果顯示預(yù)測率為100%。另取3批檢驗合格，青霉素V含量在99%以上的樣品，市售包裝，在（40±2）℃條件下放置1周，而后掃描近紅外光譜。最后，采用高效液相色譜法檢測不同廠商生產(chǎn)產(chǎn)品中的5個廠商雜質(zhì)以及青霉素V含量水平，對比高效液相色譜法進行樣本鑒定與近紅外光譜樣品鑒定結(jié)果。

1.3 觀察指標

高效液相色譜法、近紅外光譜對50個批次的樣品來源廠商聚類鑒定結(jié)果。對比高效液相色譜法樣本鑒定成分分析結(jié)果，近紅外光譜對樣品青霉素V純度的鑒定結(jié)果。近紅外光譜對加速試驗后樣品、加速前同批次樣品的鑒定結(jié)果，加速前后青霉素V含量水平變化。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)計算，青霉素V含量服從正太分布采用（Mena±SD）符號（±s）表示，組間比較采用t檢驗，鑒定結(jié)果采用x2檢驗組間比較，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

高效液相色譜法與近紅外光譜法對50個批次的樣品來源廠商聚類鑒定結(jié)果均達到100.0%。高效液相色譜法鑒定不合格產(chǎn)品1批次，近紅外光譜也檢出該批次不合格樣品。高效液相色譜法對同批次青霉素V含量分析與近紅外光譜分析結(jié)果相近。加速后，樣品的近紅外光譜較同批次產(chǎn)品發(fā)生顯著變化，采用高效液相色譜法徹底加速后樣本青霉素V濃度為（98.5±0.4）%，加速后為（95.3±0.7）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

本次研究通過建模，采用矢量歸一化對原光譜進行預(yù)處理后，并采用標準算法計算光譜距離，在9000-5000/cm、4500-3200/cm、3000-3250/cm光譜范圍內(nèi)建立了青霉素V鉀片一致性檢驗以及聚類分析模式。結(jié)果顯示，模型對50個批次的樣品來源廠商聚類鑒定結(jié)果達到100.0%，對不合格批次樣品的敏感性較高，對青霉素V含量的估算與高效液相色譜法相近，可作為代表性樣品的頻率與范圍和定性分析方法[2]。需注意的是，在我國不同生產(chǎn)商的青霉素V制備工藝、質(zhì)控能力存在一定的差異，種子制備、發(fā)酵工藝存在偏差，這影響模型的構(gòu)建，應(yīng)選擇具有代表性的樣品構(gòu)建模型，重視數(shù)據(jù)分析，選擇合適的驗證集合。同時結(jié)合液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等靈敏性較高的技術(shù)驗證模型的分析效用。近紅外光譜法對于雜質(zhì)的性質(zhì)分析比較困難，其無法進行直接分析，需要借助標準以及化學(xué)計量學(xué)方法進行二次分析，有必要結(jié)合前文提到的定性分析技術(shù)，提高近紅外光譜法對雜質(zhì)的識別能力。同時重視標準數(shù)據(jù)庫的建立與完善，開發(fā)研制輔助設(shè)備，進一步發(fā)揮近紅外光譜法在藥品快速檢測領(lǐng)域的價值[3]。

小結(jié)：近紅外光譜法對青霉素V鉀片一致性檢驗效果較好，對青霉素V鉀含量變化非常敏感，同時還可進行聚類分析，判斷產(chǎn)品的來源，今后需結(jié)合定量分析技術(shù)，提高近紅外光譜法對雜質(zhì)的識別能力。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部).化學(xué)工業(yè)出版社,2000:1287-1288.

[2] 褚小立.化學(xué)計量學(xué)方法與分子光譜分析技術(shù)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,201l:7.

[3] 陳 希,吳 鑫,鄢雷娜,等.國產(chǎn)青霉素 V鉀片質(zhì)量評價[J].今日藥學(xué),2016,26(10):707-709.

本文編輯：吳玲麗

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ISSN.2095-8242.2017.32.6155.02