HPLC法測(cè)定苦參洗劑中苦參堿的含量

朱玲娟+茍小軍

摘要：目的 建立H PLC法測(cè)定苦參洗劑中苦參堿的含量。方法 采用C18（5μm，4.6×250m m）為色譜柱，以：甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鈉（含0.2%磷酸，1%高氯酸鈉）（23：77）流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，流速為1.0mL/min。結(jié)果 苦參堿在204.6～1023μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，r=0.9998，平均加樣回收率為98.18%，RSD =1.08%。結(jié)論 本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為苦參洗劑的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：苦參洗劑；HPLC；苦參堿

中圖分類號(hào)： 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： 文章編號(hào)：1007-2349（2017）02-0085-03

苦參洗劑為臨床經(jīng)驗(yàn)方，由苦參、地膚子、冰片、紅花等8味中藥組成的復(fù)方中藥制劑，具有清熱解毒、燥濕止癢、消腫止痛的功效，臨床上廣泛用于瘙癢性及炎癥性皮膚病。方中苦參為君藥，具有清熱燥濕，殺蟲，利尿的功效，外治用于赤白帶下，陰腫陰癢，濕疹，濕瘡，皮膚瘙癢，疥癬麻風(fēng)；滴蟲性陰道炎等疾病[1]，其主要活性成分為生物堿類成分，生物堿成分中主要含有苦參堿，而且苦參堿的測(cè)定方法已較成熟，故對(duì)本研究選擇苦參堿作為定量指標(biāo)，采用高效液相色譜法直接測(cè)定苦參堿的含量，該方法專屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、重復(fù)性好，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent高效液相色譜儀（四元泵，DAD檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器），Agilent1200工作站；BP211D型電子分析天平（德國Sartoius）?？鄥A對(duì)照品對(duì)照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：1100805-200306）；苦參洗劑（系自制）；水為超純水，甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent C18柱（250 mmx4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鈉（含0.2%磷酸，1%高氯酸鈉）（23：77）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；進(jìn)樣量10 μL。在此條件下，苦參堿與其他色譜峰分離良好，理論板數(shù)以苦參堿計(jì)算，應(yīng)不低于3000.

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取苦參堿對(duì)照品，精密稱取苦參堿對(duì)照品10.23 mg置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對(duì)照品儲(chǔ)備液（每1 mL含苦參堿204.6 μg）。再精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得苦參堿對(duì)照品溶液（40.92 μg/mL）[2]。

2.3 供試品溶液的制備 精密吸取本品5 mL，用稀鹽酸調(diào)pH值至3～4，用石油醚（60℃～90℃）萃取4次，每次用量15 mL，棄去石油醚液，水層用0.5%氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9～10，用三氯甲烷萃取4次，每次用量15 mL，合并三氯甲烷層，加無水硫酸鈉脫水，三氯甲烷液置水浴中蒸至5 mL，過中性氧化鋁柱，以三氯甲烷60 mL洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中 稀釋至刻度，定容，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液[3]。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方取缺當(dāng)歸的陰性對(duì)照藥，按供試品溶液制備方法，制得陰性對(duì)照溶液，進(jìn)樣，依法測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照液在相同位置處無與苦參堿相對(duì)應(yīng)的色譜峰，表明處方中其它藥材和輔料不干擾苦參堿的測(cè)定。

2.5 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液5，10，15，20，25 μL進(jìn)樣，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X）進(jìn)行回歸，苦參堿的回歸方程為Y=1058.3X-457.6，r=0.9998，表明進(jìn)樣量在204.6～1023 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μL，按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定苦參堿峰面積值，計(jì)算苦參堿RSD為1.13%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0，2，4，8，24 h測(cè)定，記錄苦參堿面積，結(jié)果RSD為1.54%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批次的樣品6份，按照供試品溶液制備方法得到供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定苦參堿的含量，計(jì)算苦參堿RSD為1.58%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法測(cè)定，精密移取已知含量的樣品（批號(hào)：130706）0.5 mL，精密加入苦參堿對(duì)照品適量，制成各自的供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

2.10 樣品測(cè)定 取3批樣品，精密移取本品5 mL，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，10 μL進(jìn)樣。結(jié)果見表2。

3 討論

苦參藥材中苦參堿的法定測(cè)定方法是用濃氨試液，加三氯甲烷，超聲提取，以乙腈-無水乙醇為流動(dòng)相[4]，試驗(yàn)中曾考察了苦參堿不同的提取方法[4，5]，效果不佳，最終采用稀鹽酸調(diào)pH值至3～4，用石油醚（60℃～90℃）萃取4次，每次用量15 mL，棄去石油醚液，水層用0.5%氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9～10，用三氯甲烷萃取來提取苦參堿，過中性氧化鋁柱，排除了干擾。采用的流動(dòng)相是甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鈉（含0.2%磷酸，1%高氯酸鈉）（23：77），在此色譜條件下，可使苦參堿分離良好，峰形較好，理論板數(shù)高。試驗(yàn)中采用曾考察了三氯甲烷萃取1次，萃取2次，萃取3次，萃取4次，萃取5次，結(jié)果表明，萃取4次，與乙酸乙酯萃取5次，效果相當(dāng)，為了節(jié)省資源，簡(jiǎn)單方便，選擇三氯甲烷萃取4次，同時(shí)對(duì)三氯甲烷每次萃取用量做了比較，分別每次10 mL，每次15 mL，每次20 mL，每次25 mL，結(jié)果表明，每次15 mL，后含量不再增加，故選擇三氯甲烷萃取，每次15 mL。

參考文獻(xiàn)：

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[3]張智軍，崔華，馬久太.HPLC法測(cè)定膚疾洗劑中苦參堿的含量[J].世界中醫(yī)藥，2 012，7（5）：457-459.

[4]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，188.

[5]趙駿，齊喜紅.生物堿提取方法研究概述[J].天津中醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào)，2003，22（4）：43-44.

（收稿日期：2016-10-11）