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    涼膈散作用機(jī)制的研究進(jìn)展

    2017-03-08 02:22:50
    關(guān)鍵詞:內(nèi)毒素中藥小鼠

    楊 謙

    (天津中醫(yī)藥大學(xué),天津 300073)

    涼膈散作用機(jī)制的研究進(jìn)展

    楊 謙

    (天津中醫(yī)藥大學(xué),天津 300073)

    目前單味中藥的成分及藥理作用的研究已經(jīng)取得了較多成果,但是對(duì)中醫(yī)方劑的研究大多還停留在臨床水平。本文收集了涼膈散作用機(jī)制的相關(guān)文獻(xiàn)并加以總結(jié)歸納,以期通過(guò)涼膈散更好的了解中醫(yī)方劑的研究方法和成果,為日后的深入探索提供參考。

    涼膈散;作用機(jī)制;綜述。

    1 涼膈散簡(jiǎn)介

    通常涼膈散是指《太平惠民合劑局方》(以下簡(jiǎn)稱局方)中的涼膈散,其組成也最能反映“涼膈”之義,本文以此方為準(zhǔn)。后世雖然也有不少方劑冠名涼膈散,但有的只是組成稍異而治法不變,有的則是治法組成完全不同,故均不贅述?!毒址健匪d涼膈散,各藥劑量分別為連翹二斤半,大黃、芒硝、甘草各十兩,薄荷、山梔子、黃芩各二十兩[1]。此為宋朝計(jì)量單位,據(jù)考證[2],宋時(shí)一斤約為634~640 g,一兩約為39~40 g,一錢約為3.9~4 g,具體劑量較難準(zhǔn)確判定,按照各藥比例確定劑量可能更為實(shí)用。從組成不難看出涼膈散主要為瀉下清熱之用,然其中又有薄荷、竹葉等輕清之品,瀉下之藥用量亦較輕,這大大擴(kuò)展了它的適用范圍。與涼膈散臨床應(yīng)用相關(guān)的研究亦不在少數(shù),但是其具體的作用機(jī)制研究則起步較晚。因此,本文納入了近來(lái)發(fā)表的諸多論文,以圖對(duì)涼膈散的作用機(jī)制加以總結(jié),為后來(lái)的研究提供依據(jù)。

    2 涼膈散用藥原理及源流的討論

    涼膈散善清上中二焦,已有備述[3],相似的文章也認(rèn)為涼膈散是上病下取[4],并可清頭面之火[5]。盡管這三篇文章篇幅較短,舉例較少,從中仍可看出涼膈散的用藥特點(diǎn)。涼膈散之法易明,其源流之脈絡(luò)也比較清晰。涼膈散最早出自《局方》,而不是劉完素首創(chuàng),這點(diǎn)已無(wú)異議[6]。若是將涼膈散方后的加減與原方結(jié)合,還可看出劉完素所創(chuàng)防風(fēng)通圣散與涼膈散之間的聯(lián)系[7]。更進(jìn)一步,亦有認(rèn)為銀翹散也出自涼膈散[8],其理論基礎(chǔ)是吳鞠通論銀翹散時(shí)言及李東垣之清心涼膈散。雖然查李東垣之書未見(jiàn)清心涼膈散一方,但同為溫病學(xué)派的王夢(mèng)英所著《溫?zé)峤?jīng)緯》中有此方,并言此方“即涼膈散去硝黃加桔梗?!闭J(rèn)識(shí)涼膈散的源流有助于我們理解涼膈散運(yùn)用的臨床基礎(chǔ),確定作用機(jī)制的研究方向。

    3 涼膈散化學(xué)成分的現(xiàn)代藥理學(xué)研究

    針對(duì)涼膈散中部分單味藥已經(jīng)有諸多研究,如黃芩、大黃等藥。許多具體成分的作用機(jī)制研究也已開(kāi)展。但是將涼膈散作為一個(gè)整體的研究依然十分稀少。目前僅有的方法是利用高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)聯(lián)合二極管陣列檢測(cè)器(Diode Array Detector,DAD)建立涼膈散的指紋圖譜[9]。具體方法是檢測(cè)涼膈散水煎液的各項(xiàng)成分及其色譜峰值,并人為選取涼膈散各藥的某幾種化學(xué)成分單質(zhì)組成涼膈散類似物然后檢測(cè)其色譜峰值,比較兩者是否具有相似性。結(jié)果選定的化學(xué)成分均可在涼膈散水煎液中找到對(duì)應(yīng)峰值,為涼膈散的標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)提供了可行的方法。

    4 涼膈散作用機(jī)制的研究

    4.1 涼膈散對(duì)肺組織和細(xì)胞的作用機(jī)理

    該方面的研究主要是圍繞與肺部炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子、蛋白、基因表達(dá)及病理表現(xiàn)展開(kāi)的。肺組織核因子-κB(NF-κB)是較早得到研究的細(xì)胞因子[10],它是多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的匯聚點(diǎn),在調(diào)控炎癥反應(yīng)的基因表達(dá)方面起到關(guān)鍵性作用。當(dāng)利用內(nèi)毒素(主要為lipopolysaccharide,LPS)干預(yù)后NF-κB表達(dá)會(huì)顯著增多。利用不同劑量的涼膈散對(duì)LPS介導(dǎo)的小鼠肺部炎癥模型進(jìn)行干預(yù),發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比肺組織NF-κB表達(dá)減少,且呈劑量依賴性。研究中采用的LPS造模方式被許多后繼的研究借鑒。如對(duì)LPS介導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型,同樣以涼膈散干預(yù),相比對(duì)照組小鼠體內(nèi)促炎癥因子TNF-α及IL-6[11]的表達(dá)減少,肺水含量減少,肺通透指數(shù)降低,PaO2明顯提高。病理結(jié)果也顯示,其能減少炎癥細(xì)胞的肺內(nèi)積聚,減少肺泡萎陷及肺實(shí)變的發(fā)生。與以上實(shí)驗(yàn)具有相似流程的研究還證明下列因素也可受涼膈散作用而改善:Th1/Th2比值[12](Th1、Th2細(xì)胞是CD4+T輔助細(xì)胞分化產(chǎn)生不同細(xì)胞因子的效應(yīng)細(xì)胞亞群,Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ等促炎細(xì)胞因子,介導(dǎo)細(xì)胞免疫,Th2細(xì)胞主要分泌IL-4等抗炎細(xì)胞因子,介導(dǎo)體液免疫);IL-lβ和IL-10含量[13];轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子3(SATA3)和磷酸化轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子3(P-SATA3)[14](STAT3是JAK/STAT途徑的重要成員之一,P-SATA3是其磷酸化后的活化形式);IL-10[15](一種重要的抗炎因子);AQP-1和AQP-5[16-17](肺水通道蛋白的兩種亞型,參與肺內(nèi)水的異常代謝);Toll樣受體4[18](TLR4是介導(dǎo)LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要受體,在急性肺損傷中具有重要作用);a-rENaC、P-rENaC、Y-rENaC、a-Na+-K+-ATase蛋白及其相關(guān)調(diào)控基因[19](均可參與大鼠肺組織肺水轉(zhuǎn)運(yùn),改善肺水腫)。另有相關(guān)會(huì)議論文也涉及到以上內(nèi)容[20-21]。這一系列實(shí)驗(yàn)為涼膈散如何“清熱”提供了分子級(jí)別的解釋,其中對(duì)抗炎促炎因子與免疫細(xì)胞的影響尚未涉及到機(jī)制的層面,但對(duì)于肺水轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白和基因的研究,尤其是涉及到Toll通路和JAK/STAT通路的研究提示了涼膈散于這些環(huán)節(jié)中可能存在明確的作用靶點(diǎn),值得更深入的研究。

    4.2 涼膈散對(duì)腸道細(xì)胞的作用機(jī)制

    在研究涼膈散對(duì)腸道作用機(jī)制時(shí)觀察到了部分與肺組織相似的現(xiàn)象,如TNF-α、IL-6和NF-κB水平的下降[22],說(shuō)明涼膈散對(duì)機(jī)體的作用靶點(diǎn)可能分布廣泛或可能作用于全身多個(gè)靶點(diǎn),一定程度上解釋了部分全身性疾病[23]為何也會(huì)有涼膈散治療成功的報(bào)道。一些具有腸道本身特點(diǎn)的大分子物質(zhì)變化也被證明受到?jīng)鲭跎⒂绊?,在腸缺血模型小鼠體內(nèi)予以涼膈散灌腸后,小腸組織內(nèi)丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量降低,超氧化物歧化酶(Super Oxide Dismutase,SOD)活性增高,Bcl-2蛋白(可抑制細(xì)胞凋亡)表達(dá)增強(qiáng),而B(niǎo)ax蛋白(可促進(jìn)細(xì)胞凋亡)表達(dá)降低[24],推測(cè)涼膈散腸缺血時(shí)細(xì)胞壞死的機(jī)制可能和減少氧自由基(oxygen free radical,OFR)產(chǎn)生、上調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2基因的表達(dá)和下調(diào)促凋亡蛋白Bax基因的表達(dá)有關(guān)。

    4.3 涼膈散對(duì)肝臟細(xì)胞的作用機(jī)制

    將涼膈散用于肝臟疾病的研究并非是受到傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論的啟發(fā),而是基于對(duì)現(xiàn)代藥理學(xué)研究的解讀。因涼膈散中單味藥大黃、黃芩和連翹等藥具有改善微循環(huán)的作用,故將其用于創(chuàng)傷性休克所致肝損害的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),涼膈散干預(yù)可以顯著促進(jìn)肝臟內(nèi)補(bǔ)體結(jié)合受體C5a-R基因的表達(dá)[25]。實(shí)驗(yàn)中觀察到的減輕肝臟細(xì)胞損傷的作用可能是通過(guò)C5a-R結(jié)合具有損傷效應(yīng)的補(bǔ)體片段C5a,降低C5a濃度達(dá)到的。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)涼膈散也可下調(diào)促凋亡蛋白Bax基因的表達(dá),但不影響抑凋亡蛋白Bcl-2基因。這與前面提到的研究結(jié)果有部分相互印證的作用,為上文涼膈散靶點(diǎn)的猜測(cè)提供了更多線索。文中還提到死亡受體Fas與其受體FasL表達(dá)減少以及可反映細(xì)胞凋亡水平的caspase3表達(dá)的減少。另外,肝臟庫(kù)普弗細(xì)胞表面CD14和清道夫受體(scavenger receptor,SR)這樣與炎癥水平密切相關(guān)的蛋白表達(dá)水平也可因涼膈散的介入而改善[26]。

    4.4 涼膈散作用于其他細(xì)胞的分子機(jī)制

    自從血小板被證明與機(jī)體炎癥反應(yīng)有關(guān)以來(lái),許多與炎癥相關(guān)的實(shí)驗(yàn)開(kāi)始以血小板為對(duì)象,研究血小板在各類炎癥反應(yīng)中的具體變化。涼膈散可以減少血小板活化標(biāo)志物——血小板源細(xì)胞因子sCD40L、β-TG——的釋放,減少血小板中TLR4的表達(dá)[27],并呈劑量依賴性,又一次將涼膈散的靶點(diǎn)指向了Toll途徑。對(duì)于在炎癥中起重要作用的巨噬細(xì)胞,近來(lái)也有涼膈散干預(yù)的報(bào)道,巨噬細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞撕裂素蛋白活化激酶p38MAPK的活性[28-29],CD14mRNA[30]、NF-κB[31]及NF-κB亞基p65[32]的表達(dá)均可受涼膈散抑制而不同程度降低,從而減弱細(xì)胞對(duì)炎癥的反應(yīng)程度。

    4.5 其他與涼膈散有關(guān)的機(jī)制研究

    以往涼膈散都被認(rèn)為是清熱解毒之劑,但是一些實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)涼膈散可以改善部分凝血指標(biāo),甚至對(duì)Ⅱ型糖尿病小鼠的血糖及血脂有積極作用。如對(duì)家兔內(nèi)毒素的模型實(shí)施涼膈散干預(yù)后,不僅有血清過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)水平、SOD活性、TNF-α水平的變化[33],還發(fā)現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)(BPC)、凝血酶原時(shí)間(PT)、血漿纖維蛋白原含量(Fb)及血液流變參數(shù)全血粘度(J1、J2、J3)、血漿粘度(Br)、紅細(xì)胞壓積(Ht)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)(Lb)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)(Rh)的改善[34]。對(duì)小鼠內(nèi)毒素血瘀模型應(yīng)用涼膈散可以改善腸系膜微循環(huán)[35]。對(duì)小鼠Ⅱ型糖尿病模型或高脂高糖飲食小鼠應(yīng)用涼膈散或黃連解毒湯可以改善小鼠的血糖、血清胰島素以及血甘油三酯和總膽固醇。

    5 總 結(jié)

    目前中藥方劑的研究很多還處在臨床水平,含有三種以上中藥的方劑更是如此,涼膈散即是典型代表。這其中的難點(diǎn)在于方劑成分復(fù)雜導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中不易得到成分均一穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)試劑。水煎劑在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)藥理研究中并不是一個(gè)理想的產(chǎn)物,而含藥血清由于其可控性較差也存在爭(zhēng)議。將涼膈散用于實(shí)驗(yàn)時(shí)也出現(xiàn)了這兩種不同的研究方法,究竟哪一種能更好的反映方劑的臨床作用現(xiàn)在還沒(méi)有足夠的證據(jù)。另一個(gè)原因是方劑多靶點(diǎn)的性質(zhì),越來(lái)越多的研究表明方劑的作用并不單一,這為實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和選題帶來(lái)了困擾。從涼膈散的研究中可以看出,它既能降低某些廣泛分布的炎癥因子如TNF-α等的水平,又能對(duì)特定細(xì)胞內(nèi)的基因或蛋白如肺內(nèi)a-rENaC的表達(dá)產(chǎn)生影響。盡管中醫(yī)方劑研究還有很多問(wèn)題亟待解決,但是隨著后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究的深入與積累,方劑的具體作用機(jī)制會(huì)逐漸明晰,為方劑的標(biāo)準(zhǔn)化提供依據(jù)。

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    本文編輯:趙小龍

    R285.5

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    ISSN.2095-8242.2017.24.4736.03

    楊謙(1992-),性別:男;學(xué)歷:碩士;職稱:無(wú);研究方向:無(wú)

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