涼膈散作用機(jī)制的研究進(jìn)展

楊 謙

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300073）

涼膈散作用機(jī)制的研究進(jìn)展

楊 謙

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300073）

目前單味中藥的成分及藥理作用的研究已經(jīng)取得了較多成果，但是對(duì)中醫(yī)方劑的研究大多還停留在臨床水平。本文收集了涼膈散作用機(jī)制的相關(guān)文獻(xiàn)并加以總結(jié)歸納，以期通過(guò)涼膈散更好的了解中醫(yī)方劑的研究方法和成果，為日后的深入探索提供參考。

涼膈散；作用機(jī)制；綜述。

1 涼膈散簡(jiǎn)介

通常涼膈散是指《太平惠民合劑局方》（以下簡(jiǎn)稱局方）中的涼膈散，其組成也最能反映“涼膈”之義，本文以此方為準(zhǔn)。后世雖然也有不少方劑冠名涼膈散，但有的只是組成稍異而治法不變，有的則是治法組成完全不同，故均不贅述?！毒址健匪d涼膈散，各藥劑量分別為連翹二斤半，大黃、芒硝、甘草各十兩，薄荷、山梔子、黃芩各二十兩[1]。此為宋朝計(jì)量單位，據(jù)考證[2]，宋時(shí)一斤約為634～640 g，一兩約為39～40 g，一錢約為3.9～4 g，具體劑量較難準(zhǔn)確判定，按照各藥比例確定劑量可能更為實(shí)用。從組成不難看出涼膈散主要為瀉下清熱之用，然其中又有薄荷、竹葉等輕清之品，瀉下之藥用量亦較輕，這大大擴(kuò)展了它的適用范圍。與涼膈散臨床應(yīng)用相關(guān)的研究亦不在少數(shù)，但是其具體的作用機(jī)制研究則起步較晚。因此，本文納入了近來(lái)發(fā)表的諸多論文，以圖對(duì)涼膈散的作用機(jī)制加以總結(jié)，為后來(lái)的研究提供依據(jù)。

2 涼膈散用藥原理及源流的討論

涼膈散善清上中二焦，已有備述[3]，相似的文章也認(rèn)為涼膈散是上病下取[4]，并可清頭面之火[5]。盡管這三篇文章篇幅較短，舉例較少，從中仍可看出涼膈散的用藥特點(diǎn)。涼膈散之法易明，其源流之脈絡(luò)也比較清晰。涼膈散最早出自《局方》，而不是劉完素首創(chuàng)，這點(diǎn)已無(wú)異議[6]。若是將涼膈散方后的加減與原方結(jié)合，還可看出劉完素所創(chuàng)防風(fēng)通圣散與涼膈散之間的聯(lián)系[7]。更進(jìn)一步，亦有認(rèn)為銀翹散也出自涼膈散[8]，其理論基礎(chǔ)是吳鞠通論銀翹散時(shí)言及李東垣之清心涼膈散。雖然查李東垣之書未見(jiàn)清心涼膈散一方，但同為溫病學(xué)派的王夢(mèng)英所著《溫?zé)峤?jīng)緯》中有此方，并言此方“即涼膈散去硝黃加桔梗?！闭J(rèn)識(shí)涼膈散的源流有助于我們理解涼膈散運(yùn)用的臨床基礎(chǔ)，確定作用機(jī)制的研究方向。

3 涼膈散化學(xué)成分的現(xiàn)代藥理學(xué)研究

針對(duì)涼膈散中部分單味藥已經(jīng)有諸多研究，如黃芩、大黃等藥。許多具體成分的作用機(jī)制研究也已開(kāi)展。但是將涼膈散作為一個(gè)整體的研究依然十分稀少。目前僅有的方法是利用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）聯(lián)合二極管陣列檢測(cè)器（Diode Array Detector，DAD）建立涼膈散的指紋圖譜[9]。具體方法是檢測(cè)涼膈散水煎液的各項(xiàng)成分及其色譜峰值，并人為選取涼膈散各藥的某幾種化學(xué)成分單質(zhì)組成涼膈散類似物然后檢測(cè)其色譜峰值，比較兩者是否具有相似性。結(jié)果選定的化學(xué)成分均可在涼膈散水煎液中找到對(duì)應(yīng)峰值，為涼膈散的標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)提供了可行的方法。

4 涼膈散作用機(jī)制的研究

4.1 涼膈散對(duì)肺組織和細(xì)胞的作用機(jī)理

該方面的研究主要是圍繞與肺部炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子、蛋白、基因表達(dá)及病理表現(xiàn)展開(kāi)的。肺組織核因子-κB（NF-κB）是較早得到研究的細(xì)胞因子[10]，它是多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的匯聚點(diǎn)，在調(diào)控炎癥反應(yīng)的基因表達(dá)方面起到關(guān)鍵性作用。當(dāng)利用內(nèi)毒素（主要為lipopolysaccharide，LPS）干預(yù)后NF-κB表達(dá)會(huì)顯著增多。利用不同劑量的涼膈散對(duì)LPS介導(dǎo)的小鼠肺部炎癥模型進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比肺組織NF-κB表達(dá)減少，且呈劑量依賴性。研究中采用的LPS造模方式被許多后繼的研究借鑒。如對(duì)LPS介導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型，同樣以涼膈散干預(yù)，相比對(duì)照組小鼠體內(nèi)促炎癥因子TNF-α及IL-6[11]的表達(dá)減少，肺水含量減少，肺通透指數(shù)降低，PaO2明顯提高。病理結(jié)果也顯示，其能減少炎癥細(xì)胞的肺內(nèi)積聚，減少肺泡萎陷及肺實(shí)變的發(fā)生。與以上實(shí)驗(yàn)具有相似流程的研究還證明下列因素也可受涼膈散作用而改善：Th1/Th2比值[12]（Th1、Th2細(xì)胞是CD4+T輔助細(xì)胞分化產(chǎn)生不同細(xì)胞因子的效應(yīng)細(xì)胞亞群，Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ等促炎細(xì)胞因子，介導(dǎo)細(xì)胞免疫，Th2細(xì)胞主要分泌IL-4等抗炎細(xì)胞因子，介導(dǎo)體液免疫）；IL-lβ和IL-10含量[13]；轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子3（SATA3）和磷酸化轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子3（P-SATA3）[14]（STAT3是JAK/STAT途徑的重要成員之一，P-SATA3是其磷酸化后的活化形式）；IL-10[15]（一種重要的抗炎因子）；AQP-1和AQP-5[16-17]（肺水通道蛋白的兩種亞型，參與肺內(nèi)水的異常代謝）；Toll樣受體4[18]（TLR4是介導(dǎo)LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要受體，在急性肺損傷中具有重要作用）；a-rENaC、P-rENaC、Y-rENaC、a-Na+-K+-ATase蛋白及其相關(guān)調(diào)控基因[19]（均可參與大鼠肺組織肺水轉(zhuǎn)運(yùn)，改善肺水腫）。另有相關(guān)會(huì)議論文也涉及到以上內(nèi)容[20-21]。這一系列實(shí)驗(yàn)為涼膈散如何“清熱”提供了分子級(jí)別的解釋，其中對(duì)抗炎促炎因子與免疫細(xì)胞的影響尚未涉及到機(jī)制的層面，但對(duì)于肺水轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白和基因的研究，尤其是涉及到Toll通路和JAK/STAT通路的研究提示了涼膈散于這些環(huán)節(jié)中可能存在明確的作用靶點(diǎn)，值得更深入的研究。

4.2 涼膈散對(duì)腸道細(xì)胞的作用機(jī)制

在研究涼膈散對(duì)腸道作用機(jī)制時(shí)觀察到了部分與肺組織相似的現(xiàn)象，如TNF-α、IL-6和NF-κB水平的下降[22]，說(shuō)明涼膈散對(duì)機(jī)體的作用靶點(diǎn)可能分布廣泛或可能作用于全身多個(gè)靶點(diǎn)，一定程度上解釋了部分全身性疾病[23]為何也會(huì)有涼膈散治療成功的報(bào)道。一些具有腸道本身特點(diǎn)的大分子物質(zhì)變化也被證明受到?jīng)鲭跎⒂绊?，在腸缺血模型小鼠體內(nèi)予以涼膈散灌腸后，小腸組織內(nèi)丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量降低，超氧化物歧化酶（Super Oxide Dismutase，SOD）活性增高，Bcl-2蛋白（可抑制細(xì)胞凋亡）表達(dá)增強(qiáng)，而B(niǎo)ax蛋白（可促進(jìn)細(xì)胞凋亡）表達(dá)降低[24]，推測(cè)涼膈散腸缺血時(shí)細(xì)胞壞死的機(jī)制可能和減少氧自由基（oxygen free radical，OFR）產(chǎn)生、上調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2基因的表達(dá)和下調(diào)促凋亡蛋白Bax基因的表達(dá)有關(guān)。

4.3 涼膈散對(duì)肝臟細(xì)胞的作用機(jī)制

將涼膈散用于肝臟疾病的研究并非是受到傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論的啟發(fā)，而是基于對(duì)現(xiàn)代藥理學(xué)研究的解讀。因涼膈散中單味藥大黃、黃芩和連翹等藥具有改善微循環(huán)的作用，故將其用于創(chuàng)傷性休克所致肝損害的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，涼膈散干預(yù)可以顯著促進(jìn)肝臟內(nèi)補(bǔ)體結(jié)合受體C5a-R基因的表達(dá)[25]。實(shí)驗(yàn)中觀察到的減輕肝臟細(xì)胞損傷的作用可能是通過(guò)C5a-R結(jié)合具有損傷效應(yīng)的補(bǔ)體片段C5a，降低C5a濃度達(dá)到的。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)涼膈散也可下調(diào)促凋亡蛋白Bax基因的表達(dá)，但不影響抑凋亡蛋白Bcl-2基因。這與前面提到的研究結(jié)果有部分相互印證的作用，為上文涼膈散靶點(diǎn)的猜測(cè)提供了更多線索。文中還提到死亡受體Fas與其受體FasL表達(dá)減少以及可反映細(xì)胞凋亡水平的caspase3表達(dá)的減少。另外，肝臟庫(kù)普弗細(xì)胞表面CD14和清道夫受體（scavenger receptor，SR）這樣與炎癥水平密切相關(guān)的蛋白表達(dá)水平也可因涼膈散的介入而改善[26]。

4.4 涼膈散作用于其他細(xì)胞的分子機(jī)制

自從血小板被證明與機(jī)體炎癥反應(yīng)有關(guān)以來(lái)，許多與炎癥相關(guān)的實(shí)驗(yàn)開(kāi)始以血小板為對(duì)象，研究血小板在各類炎癥反應(yīng)中的具體變化。涼膈散可以減少血小板活化標(biāo)志物——血小板源細(xì)胞因子sCD40L、β-TG——的釋放，減少血小板中TLR4的表達(dá)[27]，并呈劑量依賴性，又一次將涼膈散的靶點(diǎn)指向了Toll途徑。對(duì)于在炎癥中起重要作用的巨噬細(xì)胞，近來(lái)也有涼膈散干預(yù)的報(bào)道，巨噬細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞撕裂素蛋白活化激酶p38MAPK的活性[28-29]，CD14mRNA[30]、NF-κB[31]及NF-κB亞基p65[32]的表達(dá)均可受涼膈散抑制而不同程度降低，從而減弱細(xì)胞對(duì)炎癥的反應(yīng)程度。

4.5 其他與涼膈散有關(guān)的機(jī)制研究

以往涼膈散都被認(rèn)為是清熱解毒之劑，但是一些實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)涼膈散可以改善部分凝血指標(biāo)，甚至對(duì)Ⅱ型糖尿病小鼠的血糖及血脂有積極作用。如對(duì)家兔內(nèi)毒素的模型實(shí)施涼膈散干預(yù)后，不僅有血清過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO）水平、SOD活性、TNF-α水平的變化[33]，還發(fā)現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)（BPC）、凝血酶原時(shí)間（PT）、血漿纖維蛋白原含量（Fb）及血液流變參數(shù)全血粘度（J1、J2、J3）、血漿粘度（Br）、紅細(xì)胞壓積（Ht）、紅細(xì)胞聚集指數(shù)（Lb）、紅細(xì)胞剛性指數(shù)（Rh）的改善[34]。對(duì)小鼠內(nèi)毒素血瘀模型應(yīng)用涼膈散可以改善腸系膜微循環(huán)[35]。對(duì)小鼠Ⅱ型糖尿病模型或高脂高糖飲食小鼠應(yīng)用涼膈散或黃連解毒湯可以改善小鼠的血糖、血清胰島素以及血甘油三酯和總膽固醇。

5 總 結(jié)

目前中藥方劑的研究很多還處在臨床水平，含有三種以上中藥的方劑更是如此，涼膈散即是典型代表。這其中的難點(diǎn)在于方劑成分復(fù)雜導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中不易得到成分均一穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)試劑。水煎劑在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)藥理研究中并不是一個(gè)理想的產(chǎn)物，而含藥血清由于其可控性較差也存在爭(zhēng)議。將涼膈散用于實(shí)驗(yàn)時(shí)也出現(xiàn)了這兩種不同的研究方法，究竟哪一種能更好的反映方劑的臨床作用現(xiàn)在還沒(méi)有足夠的證據(jù)。另一個(gè)原因是方劑多靶點(diǎn)的性質(zhì)，越來(lái)越多的研究表明方劑的作用并不單一，這為實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和選題帶來(lái)了困擾。從涼膈散的研究中可以看出，它既能降低某些廣泛分布的炎癥因子如TNF-α等的水平，又能對(duì)特定細(xì)胞內(nèi)的基因或蛋白如肺內(nèi)a-rENaC的表達(dá)產(chǎn)生影響。盡管中醫(yī)方劑研究還有很多問(wèn)題亟待解決，但是隨著后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究的深入與積累，方劑的具體作用機(jī)制會(huì)逐漸明晰，為方劑的標(biāo)準(zhǔn)化提供依據(jù)。

[1] 馬曉梅,穆齊金.略論涼膈散[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2008,15:161-162.

[2] 李永壽.從涼膈散的加減應(yīng)用看中醫(yī)的“上病下取”治則[J].吉林中醫(yī)藥,1982,04:10-11.

[3] 王秋陶.涼膈散善清頭面之火[n].中國(guó)中醫(yī)藥報(bào),2001-06-22003.

[4] 左言富.涼膈散等并非劉完素創(chuàng)制[J].中醫(yī)雜志,1982,12:74.

[5] 山西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院高建忠.防風(fēng)通圣散由涼膈散加減而成[n].中國(guó)中醫(yī)藥報(bào),2012-09-05004.

[6] 山西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院高建忠.銀翹散方源于涼膈散[n].中國(guó)中醫(yī)藥報(bào),2011-12-01004.

[7] 胡建蘭,邵 萌,余林中.涼膈散湯劑HPLC-DAD指紋圖譜研究[J].中草藥,2014,01:50-54.

[8] 林 慧,余林中,秦清和.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素肺損傷小鼠肺組織核因子-κB活性的影響[J].四川中醫(yī),2004,07:16-18.

[9] 胡孔友,余林中,陳育堯,林曉春.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用[J].中藥藥理與臨床,2008,05:3-5.

[10] 胡孔友,余林中.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致大鼠急性肺損傷T輔助細(xì)胞漂移的影響[J].中醫(yī)雜志,2009,11:1023-1025+1028.

[11] 胡孔友.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用及其炎癥調(diào)控機(jī)制[D].南方醫(yī)科大學(xué),2009.

[12] 余林中,劉建新,胡孔友,刁建新,王 麗.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致急性肺損傷大鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子1表達(dá)的影響[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,01:43-46.

[13] 余林中,胡孔友.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致大鼠急性肺損傷炎癥調(diào)控的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2009,11:1433-1436.

[14] 劉建新.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致急性肺損傷大鼠肺水通道蛋白表達(dá)的影響[D].南方醫(yī)科大學(xué),2010.

[15] 劉建新,余林中,王 麗,陳育堯,林曉春.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致急性肺損傷大鼠肺水腫的保護(hù)作用[J].中藥藥理與臨床,2012,03:2-5.

[16] 余林中,劉建新,胡孔友,王 麗.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷模型Toll樣受體4表達(dá)的影響[J].中藥新藥與臨床藥理,2010,04:334-337.

[17] 王國(guó)全.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素型急性肺損傷肺組織水液轉(zhuǎn)運(yùn)的影響及機(jī)制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué),2014.

[18] 余林中,胡孔友,劉建新,王 麗,陳育堯,林曉春.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致大鼠急性肺損傷的保護(hù)及其炎癥調(diào)控機(jī)制[A].中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥實(shí)驗(yàn)藥理分會(huì).中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥實(shí)驗(yàn)藥理分會(huì)第八屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C].中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥實(shí)驗(yàn)藥理分會(huì),2009:2.

[19] 余林中,胡孔友,劉建新,王 麗.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致大鼠急性肺損傷保護(hù)作用及其機(jī)制研究[A].中國(guó)藥理學(xué)會(huì).第十一屆全國(guó)中藥藥理學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要[C].中國(guó)藥理學(xué)會(huì),2010:2.

[20] 常文秀,曹書華,王勇強(qiáng),楊書英.涼膈散對(duì)腸缺血再灌注損傷大鼠腸道的保護(hù)作用[J].天津醫(yī)藥,2012,04:370-374.

[21] 吳 瑜.涼膈散治療傳染性單核細(xì)胞增多癥[J].四川中醫(yī),2006,12:78.

[22] 楊書英.涼膈散對(duì)腸缺血再灌注損傷大鼠腸道的保護(hù)作用[D].天津醫(yī)科大學(xué),2008.

[23] 趙志伶.CVF和涼膈散對(duì)創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝臟損害機(jī)制的研究[D].天津醫(yī)科大學(xué),2011.

[24] 余林中,江愛(ài)達(dá),陳育堯,林 慧,秦清和,馬曉冬.涼膈散對(duì)內(nèi)毒素血癥小鼠的肝臟庫(kù)普弗細(xì)胞CD14和清道夫受體表達(dá)的影響[J].中國(guó)中藥雜志,2006,03:220-223.

[25] 王 兵,曹書華,王勇強(qiáng),胡才理,徐新女.加味涼膈散含藥血清對(duì)脂多糖刺激小鼠血小板Toll樣受體4表達(dá)及細(xì)胞因子釋放的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,05:681-684.

[26] 林 慧,余林中,江愛(ài)達(dá),秦清和.涼膈散含藥血清對(duì)內(nèi)毒素刺激RAW264.7細(xì)胞CD14mRNA表達(dá)的影響[J].中藥藥理與臨床,2005,03:1-2.

[27] 江愛(ài)達(dá),余林中,林 慧,秦清和.涼膈散對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞絲裂素活化蛋白激酶p38活性的影響[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2005,07:511-513+518.

[28] 林 慧.涼膈散解毒作用細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D].第一軍醫(yī)大學(xué),2004.

[29] 江愛(ài)達(dá),余林中,龔小衛(wèi),鄧 鵬,馬曉冬.涼膈散藥物血清對(duì)脂多糖誘導(dǎo)體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-кB的影響[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,06:619-622.

[30] 江愛(ài)達(dá).涼膈散解毒作用細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D].第一軍醫(yī)大學(xué),2005.

[31] 余林中,吳 銳,黃 泳,雷載權(quán),沈映君.涼膈散對(duì)家兔內(nèi)毒素溫病模型的解毒作用研究[J].中藥藥理與臨床,1996,05:4-6.

[32] 余林中,黃 泳,吳 銳,鄭有順.涼膈散對(duì)家兔內(nèi)毒素溫病模型的化瘀作用研究[J].中藥藥理與臨床,1998,01:8-10.

[33] 余林中,吳 銳,陳 紅,黃 泳,雷載權(quán),沈映君.涼膈散對(duì)小鼠內(nèi)毒素血瘀模型微循環(huán)的影響[J].中藥藥理與臨床,1996,02:3-5.

[34] 楊 彬,馬 景,俞恒桑,葉 騫,毛水龍.涼膈散與黃連解毒湯對(duì)2型糖尿病小鼠血糖、血脂及胰島素水平的影響[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009,06:337-338.

[35] 馬 景,毛水龍,楊 彬,俞恒桑,葉 騫.涼膈散與黃連解毒湯對(duì)高脂高糖飼料加STZ所致2型糖尿病小鼠血糖、血脂及胰島素水平影響的實(shí)驗(yàn)研究[A].中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)、中醫(yī)藥生物化學(xué)與分子生物學(xué)分會(huì).中醫(yī)藥生物化學(xué)與分子生物學(xué)通訊[C].中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)、中醫(yī)藥生物化學(xué)與分子生物學(xué)分會(huì):2008:3.

本文編輯：趙小龍

R285.5

A

ISSN.2095-8242.2017.24.4736.03

楊謙（1992-），性別：男；學(xué)歷：碩士；職稱：無(wú)；研究方向：無(wú)