高效液相色譜法測定川產(chǎn)瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺的含量

夏 陳，鄧俊琳，張盈嬌，陳 建

(四川省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，四川 成都 610066)

高效液相色譜法測定川產(chǎn)瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺的含量

夏 陳，鄧俊琳，張盈嬌，陳 建*

(四川省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，四川 成都 610066)

采用HPLC法測定了川產(chǎn)(四川省阿壩縣、峨邊縣、美姑縣)瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺的含量，并與其在秘魯瑪咖中的含量進行了比較。色譜條件為：Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)；流動相A為0.005%的三氟乙酸水溶液，流動相B為0.005%的三氟乙酸乙腈溶液，梯度洗脫；檢測波長為210 nm。結(jié)果表明，阿壩縣、峨邊縣和美姑縣瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺含量分別為0.087%、0.085%、0.055%，均高于秘魯瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺含量(0.030%)。該方法重復性好(RSD=0.47%)、精密度高(RSD=0.38%)、加標回收率準確可靠(RSD=3.5%)，可用于瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺含量的測定。

N-芐基-十六烷酰胺；高效液相色譜；川產(chǎn)瑪咖；瑪咖酰胺

瑪咖(Lepidium meyeniiWalp.，Maca)是十字花科獨行菜屬草本植物，原產(chǎn)于秘魯海拔3 500m以上的安第斯山區(qū)，主要分布于秘魯胡寧(Junin)和帕斯科(CerrordePasco)地區(qū)的suni和puna生態(tài)區(qū)[1-2]。我國自2003年在云南麗江種植基地引種以來，現(xiàn)已成功在新疆、吉林、西藏、四川(甘孜、阿壩、松潘、峨邊、美姑)等高海拔山地引種和收獲[3]。瑪咖富含氨基酸、礦物質(zhì)、多糖等營養(yǎng)物質(zhì)以及特殊次生代謝產(chǎn)物[4]，具有改善性功能、提高生育能力、延緩更年期、抗疲勞等多種功效[5-6]。研究表明，芥子油苷、多酚、瑪咖酰胺、瑪咖烯等次生代謝產(chǎn)物是瑪咖的主要活性成分，瑪咖酰胺和瑪咖烯是僅在瑪咖中發(fā)現(xiàn)的特征性物質(zhì)[7-10]。國外已研究發(fā)現(xiàn)了20多種瑪咖酰胺，其中亞麻酰芐胺、亞油酰芐胺和N-芐基-十六烷酰胺的含量較高[11-12]。國內(nèi)的研究主要集中在營養(yǎng)成分[13-14]上，對瑪咖酰胺的研究報道較少。雖然朱穎秋等[15]測定了不同產(chǎn)地瑪咖中亞麻酰芐胺和亞油酰芐胺的含量，但對國產(chǎn)瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺的含量測定未見報道。鑒于此，作者采用HPLC法測定四川省阿壩縣、峨邊縣、美姑縣所產(chǎn)瑪咖中的N-芐基-十六烷酰胺含量，并與其在秘魯瑪咖中的含量進行比較，擬為川產(chǎn)瑪咖的優(yōu)質(zhì)栽培及其精深加工提供幫助。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

川產(chǎn)瑪咖：將采自四川省的阿壩州阿壩縣、樂山市峨邊縣、西昌市美姑縣的新鮮瑪咖自然陰干，粉碎，過60目篩，備用；秘魯瑪咖粉：產(chǎn)于秘魯胡寧(Junin)。

N-芐基-十六烷酰胺對照品(純度≥95%)，自制；其余試劑及乙腈等溶劑均為色譜純。

萬能粉碎機，北京中興偉業(yè)儀器有限公司；DHG-9075A型電熱恒溫鼓風干燥機，上海齊欣科學儀器有限公司；電子天平，奧豪斯儀器(上海)有限公司；KH2200DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；1260型高效液相色譜儀，美國Agilent公司。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液的配制

準確稱取N-芐基-十六烷酰胺對照品49.2 mg置于100 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，得濃度為467.40 μg·mL-1的對照品母液；將該母液分別稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍，配制不同濃度的對照品溶液。

1.2.2 樣品溶液的配制

分別準確稱取阿壩縣、峨邊縣、美姑縣及秘魯瑪咖粉2 g，置于具塞錐形瓶中，加入10 mL甲醇，加蓋，稱重，40 ℃超聲提取1 h，冷卻，以甲醇補齊重量，取上清液過0.45 μm微孔濾膜，得樣品溶液。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)；DAD檢測器，檢測波長210 nm；柱溫40 ℃；流速1.0 mL·min-1；進樣量20 μL；流動相A為0.005%三氟乙酸水溶液，流動相B為0.005%三氟乙酸乙腈溶液；梯度洗脫：0～35 min，55%～95%B；35～40 min，95%～100%B。

2 結(jié)果與討論

2.1 瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺的HPLC圖譜

分別測定阿壩縣、峨邊縣、美姑縣及秘魯瑪咖樣品中N-芐基-十六烷酰胺的HPLC圖譜，結(jié)果如圖1所示。

a.秘魯 b.阿壩縣 c.峨邊縣 d.美姑縣 e.N-芐基-十六烷酰胺對照品

由圖1可以看出，N-芐基-十六烷酰胺對照品在保留時間為37 min時出現(xiàn)色譜峰，而4個瑪咖樣品均在37 min處有色譜峰。表明，在此色譜條件下，瑪咖樣品中的N-芐基-十六烷酰胺得到較好分離。

2.2 方法學驗證

2.2.1 標準曲線和線性關(guān)系

分別對濃度(μg·mL-1)為5.48、11.69、23.37、46.74、93.48、467.40的N-芐基-十六烷酰胺對照品溶液進行HPLC分析。以濃度(x，μg·mL-1)為橫坐標、峰面積(y)為縱坐標繪制標準曲線，得N-芐基-十六烷酰胺的線性方程為y=34.101x(R2=0.9990)。表明，N-芐基-十六烷酰胺的峰面積和濃度之間呈良好的線性關(guān)系。

2.2.2 重復性實驗

按1.2.2方法平行配制瑪咖(美姑縣產(chǎn))樣品溶液3份，進行HPLC分析，計算N-芐基-十六烷酰胺含量的相對標準偏差(RSD)為0.47%。表明該方法重復性良好。

2.2.3 精密度實驗

按1.2.1方法配制對照品溶液，連續(xù)進樣3次，計算N-芐基-十六烷酰胺峰面積的RSD為0.38%。表明該方法精密度良好。

2.2.4 加標回收率實驗

稱取瑪咖粉末(美姑縣產(chǎn))適量于具塞錐形瓶中，加入N-芐基-十六烷酰胺對照品適量，按1.2.2方法配制樣品溶液，進行HPLC分析，結(jié)果見表1。

表1加標回收率實驗結(jié)果(n=3)

Tab.1Results of recovery experiment(n=3)

由表1可知，N-芐基-十六烷酰胺的平均加標回收率為92%，RSD為3.5%。表明該方法有較好的回收率，結(jié)果準確可靠。

2.3 瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺的含量測定

據(jù)McCollom等[11]報道，干瑪咖中的瑪咖酰胺總含量在0.0016%～0.0123%范圍內(nèi)。本實驗測得阿壩縣、峨邊縣、美姑縣瑪咖樣品中N-芐基-十六烷酰胺的含量分別為0.087%、0.085%、0.055%，均高于此文獻報道值，而秘魯瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺含量(0.030%)與該文獻報道值接近。這可能是因為：(1)瑪咖原產(chǎn)于秘魯海拔3 500 m以上的安第斯山區(qū)，其氣候特點是海拔高、晝夜溫差大、少肥、缺氧等。只要有適當溫度和水分，同時保證合適的海拔高度、土質(zhì)和施肥等條件，就能實現(xiàn)引種[16]。川產(chǎn)瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺含量均高于秘魯瑪咖，表明這些高海拔地區(qū)適宜瑪咖生長。(2)瑪咖中瑪咖酰胺含量的高低與種子來源、海拔高度、收獲時間、加工方式等[15，17]有關(guān)。此外，瑪咖的品質(zhì)在栽培過程中也會受到連作效應的影響，導致土壤營養(yǎng)元素缺失、田間病蟲害更易發(fā)生、瑪咖抗逆性減弱、品質(zhì)下降[18]。阿壩縣和美姑縣均為首次種植瑪咖，其生長未受到連作效應的影響，N-芐基-十六烷酰胺含量較高；而峨邊縣瑪咖是第二年種植，受到連作效應的影響，這也可能是其N-芐基-十六烷酰胺含量稍低的一個原因。

3 結(jié)論

采用HPLC法測定瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺含量，結(jié)果表明，川產(chǎn)瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺含量均高于秘魯瑪咖。該方法重復性好(RSD=0.47%)、精密度高(RSD=0.38%)、加標回收率準確可靠(RSD=3.5%)，可用于瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺的含量測定。

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Determination of Contents ofN-Benzyl-hexadecanamide in Sichuan Maca by HPLC

XIA Chen,DENG Jun-lin,ZHANG Ying-jiao,CHEN Jian*

(InstituteofAgro-ProductsProcessingScienceandTechnology,SichuanAcademyofAgriculturalSciences,Chengdu610066,China)

ThecontentsofN-benzyl-hexadecanamideinMacafromAbaCounty,EbianCounty,andMeiguCountyofSichuanProvince,ChinaweredeterminatedbyHPLC,andtheresultswerecomparedwiththecontentofN-benzyl-hexadecanamideinMacafromPeru.Thechromatographicconditionswereasfollows:anEclipseXDB-C18column(4.6mm×250mm,5.0μm),amixtureofwater/trifluoroaceticacid(99.995∶0.005,volumefraction,solventA)andacetonitrile/trifluoroaceticacid(99.995∶0.005,volumefraction,solventB)asamobilephasewithgradientelution,and210nmwavelengthdetection.TheresultsshowedthatthecontentsofN-benzyl-hexadecanamideinAbaMaca,EbianMaca,andMeiguMacawere0.087%,0.085%,and0.055%,respectively.AllthreeMacasampleshadhigherN-benzyl-hexadecanamidecontentthanthatinPrueMaca(0.030%).ThismethodissuitablefordeterminingthecontentofN-benzyl-hexadecanamideinMacawithgoodrepeatability(RSD=0.47%),highprecision(RSD=0.38%),andreliablerecovery(RSD=3.5%).

N-benzyl-hexadecanamide;HPLC;SichuanMaca;macamide

四川省農(nóng)業(yè)科學院條件建設專項基金資助項目

2016-08-11

夏陳(1983-)，男，四川鄰水人，碩士，助理研究員，研究方向：功能食(藥)品，E-mail:154541462@qq.com;通訊作者：陳建，博士，研究員，E-mail:jc_saas@yahoo.com。

10.3969/j.issn.1672-5425.2017.02.016

O 657.72

A

1672-5425(2017)02-0068-03

夏陳，鄧俊琳，張盈嬌，等.高效液相色譜法測定川產(chǎn)瑪咖中N-芐基-十六烷酰胺的含量[J].化學與生物工程，2017，34(2)：68-70.